第八讲 植物原生质体培养

一、前言植物原生质体就是除去细胞壁以后的裸露细胞。英国植物生理学家Cocking(1960)首先用酶解的方法降解番茄根尖的细胞壁,获得大量而完整的原生质体。植物原生质体可直接从植物各种器官、如根、茎、叶、花、果实的细胞中获得,也可以从培养细胞中获得。一般认为由叶肉组织分离的原生质体遗传性状较一致。而一般     

植物叶片原生质体分离的可能机制

分析了植物叶片在分离液环境中形成原生质体的过程,文中提出,分离液配方中的酸性物质使植物叶片处于酸性环境中并导致植物正常细胞首先发生细胞壁酸性降解,随后出现原生质体脱离细胞壁进入分离液,继而又进一步发生质膜的酸性降解,使细胞核和细胞器进入分离液中,最终分离液中的细胞器以细胞核为中心进行细胞器重组,最后产生外貌形态一致的新的原生质体。植物细胞壁和质膜是植物细胞的包被系统。植物细胞包被系统的酸性降解使植物细胞器重组并产生新的原生质体成为可能。     

颠茄胚囊细胞原生质体的酶法分离和观察

分离被子植物雌配子原生质体对发展植物受精工程有着重要意义。最近几年,虽然用酶法分离生活的胚囊已有一些成功的报道。但对分离组成胚囊细胞的原生质体前人还没有进行过尝试。1984年我们首次从烟草生活胚珠中分离出卵细胞、中央细胞、助细胞和反足细胞的原生质体。最近我们又用颠茄胚珠为材料,采用酶解压片技术进行分离胚囊细胞的原生质体,也取得预期的结果。获得了有活性的卵细胞、中央细胞和助细胞的原生质体。从而证明这项技术是有推广应用价值的。在观察中发现用酶法分离生活胚囊细胞的原生质体,能     

植物防御反应与原生质体培养技术的改进

介绍了脱壁酶分离原生质体操作过程中,植物细胞防御反应的发生及其对原生质体分离与早期阶段培养的影响;阐述了原生质作早期阶段培养的实质是遭受机械、生理损伤的植物细胞完成其自身修复的过程;并对改进原生质体培养技术进行了分析。     

植物原生质体培养方法

1　植物原生质体培养的简史植物细胞原生质体 ,在植物学上指植物细胞通过质壁分离后 ,可以和细胞壁分开的那部分细胞物质。原生质体分离纯化后 ,须在适当的培养基上应用适当的培养方法 ,才能再生细胞壁 ,并启动细胞持续分裂 ,直至形成细胞团、长成愈伤组织或胚状体、分化和发育成苗 ,最终再生完整植株。其中 ,选择合适的培养方法始终是原生质体培养中最基础也是最关键的一环。植物原生质体培养方法起源于植物单细胞培养方法。早在 190 2年 ,Haberlant通过实验就预言 :体外培养单个细胞可通过其分裂得到培养组织。直到 1954年 ,植物单细胞培…     

植物生物技术讲座（一）：原生质体培养

植物原生质体是指通过质壁分离,能够和细胞壁分开的那部分细胞物质。换言之原生质体就是除去全部细胞壁的“细胞”,或是一个为原生质膜所包围的“裸露细胞”。植物原生质体由于失去细胞壁,更由于单个原生质体即包含一个物种的     

用转动电场分离细胞

电流在生物技术领域有许多直接的应用。它可以刺激植物组织培养物的生长和形态发生,诱导原生质体融合,增强细胞膜透性,并且能够使植物细胞转动。柏林洪堡大学的 G.Fuhr 等人利用“电转动作用”,从由于原生质体分离操作而受到损害的原生质体中分离出存活的原生质体。所用的材料是伽蓝菜属的 Kalanchoe daigremontiana的叶肉细胞。据研究人员报告,在电场强度为3.5×10~3V/m 的转动电场中,存活的原生质体     

植物原生质体融合研究的近况

一、概述近代植物原生质体融合研究是从Power等人(1970)的工作开始的。如果把这十多年有关的资料加以分析归纳,不难看出它之所以能发展是基于植物生理学和细胞生物学中两个试验途径的成就即:(1)植物细胞和组织培养方法;(2)分离和操纵原生质体的技术。有了这些,才能使研究从个体水平进入细胞水平,能够在容器中用数以万计的细胞进行     

多种被子植物花粉生殖细胞大量分离技术的比较研究

从11种植物的成熟花粉粒中分离出大量生活的生殖细胞。比较了四种分离方法(一步渗透压冲击法、二步渗透压冲击法、低酶法和花粉原生质体释放法)在不同植物中的效果。归纳出三类植物适于采用三种分离方法。研究了影响分离效果的若干重要因素。对5种植物的分离生殖细胞进行了纯化。经鉴定,纯化的细胞群体中80%以上的细胞是生活的。     

分离、纯化玉米胚性细胞原生质体的新方法

酶解植物愈伤组织分离原生质体,往往含有一定量的去壁不干净或完全没有去壁的细胞,这对于原生质体培养及以原生质体为工具来研究某些生化、生理都是不利的。最近,E.B.Swanson(1985)等人采用一种“过柱”的方法来纯化从玉米胚性细胞分离得到的含“细胞杂质”(指原生质体中尚有一部分含壁的或去壁不干净的细胞)的原生质体。即将纤维素酶RS交联在由溴化氰活化的琼酯糖凝胶6MB大颗粒柱上,然后让原生质体悬浮液通过直径2.2cm,大颗粒层高1.5cm的琼酯糖凝胶柱,一次便可以使原生质体悬浮     

分离纯化后的烟草叶片液泡的显微观察

将分离纯化后的烟草叶片注佻 分别置于光镜和电镜下观察得到原生质体,原生质体释放液泡的过程,纯化后液泡的相应照片,结果说明我们选用的方法能得到完整的原生质体和液泡,且中央液泡是成熟植物细胞中体积最大的细胞器。     

原生质体在分离和鉴定植物生化突变体中的应用

本文就植物原生质体在生化突变体的分离与鉴定中的应用进行了述评。对一些从原生质体培养系统中选出的生化突变体进行了归类。讨论了原生质体在分离生化突变体中的优点。分析了原生质体在选择方案中的特殊性。评价了原生质体在鉴定和应用突变体中的作用。此外,还指出了原生质体应用中存在的一些问题。     

植物叶表面的附着物

植物叶表面上的附着物实际上是植物叶表面的分泌物。很多物质可以从原生质体中分离并沉积下来,这实际上是一种分泌过程,这些沉积物质就是分泌物。叶表皮细胞外壁上附着的角质膜、蜡质以及各种盐的     

烟草叶片液泡内氨基酸成份研究

液泡是植物细胞中特有的大型细胞器,具有重要的生理功能。本文报导了用双酶直接酶解法从烟草叶肉细胞中分离原生质体和完整液泡。在最适保存条件下,原生质体和液泡分别在３６和１２小时后,尚有一半保持活力。液泡内含有大量游离氨基酸,液泡膜ＡＴＰａｓｅ的最适ｐＨ为７．０,受Ｃｌ－激活,受ＮＯ３－抑制。     

生物工程新工具—植物精细胞

随着现代生物技术的进步和发展,寻求新的生物工程工具是人们普遍关心的重要课题。植物原生质体是迄今建立的较理想的生物工程实验系统,以往这方面的研究着眼点在于体细胞原生质体。最近几年,植物生殖系统中的原生质体开发和利用受到了日益关注,其中,植物精细胞的离体操作是当前植物生殖细胞工程高技术研究的热点之一,迄今已从十多种被子植物中分离出生活精细胞。     

应力诱导的菊花原生质体定向性伸长响应

从单细胞水平探索了应力条件对植物细胞伸长这一生长发育过程中的基本和重要现象的影响。从菊花叶片中分离原生质体并将其包埋于琼脂糖凝胶块中,通过自主研发的微应力加载装置对该细胞-凝胶混合物施加机械挤压,加载后的凝胶块培养并切片后进行细胞形态分析,采用基于有限元方法的ABAQUS软件计算细胞周围的应力场,发现受到应力刺激的原生质体在培养过程中倾向于以垂直于凝胶块中主应力张量的方向伸长,应力强度与这种细胞响应遵照某种非线性的剂量依赖关系,且该响应会受到外源性含RGD序列的多肽的抑制。说明植物单细胞具有响应外部力学信号的能力;植物细胞质膜上可能存在与动物细胞系统中类似的RGD特异结合受体,它在应力条件下的细胞伸长响应中可能参与了力学信号的介导。     

甘蔗和烟草叶原生质体分离期间的膜损伤及有关酶活性变化

甘蔗和烟草叶原生质体分离期间的膜损伤及有关酶活性变化何若天,覃伟,李任强（广西农业大学实验中心,南宁５３０００５）关键词：原生质体,超氧阴离子自由基（Ｏ_２~－）,膜损伤,甘蔗,烟草植物原生质体分离期间,所用细胞壁降解酶和高渗介质等对细胞生理有深刻影响...     

植物原生质体在分子细胞生物学研究中的应用

植物原生质体是去除了细胞壁的裸露细胞,其具有细胞全能性,现广泛应用于植物分子细胞生物学的研究中,可以大大缩减实验周期,并有助于得到体内实验的实时检测数据。该文除了介绍植物原生质体的提取和纯化方法外,还对国内外利用各种植物的原生质体进行细胞瞬时转化、亚细胞定位、细胞融合和大分子复合物相互作用等试验进行了总结和讨论。植物原生质体还可用于基因表达模式的实时检测,并作为生物反应器的受体细胞进行代谢物的体外生产。此外,还对当前该技术所面临的瓶颈进行了分析,为植物原生质体在分子细胞生物学领域的应用提供帮助,为技术的优化和推广提供参考。     

贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的研究

目的:研究不同方法对贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的影响,筛选适合用于贡蕉胚性悬浮细胞原生质体分离的方案.方法:用不同的酶浓 度、酶组合及不同的酶解时间对贡蕉胚性悬浮细胞进行原生质体分离,并对不同继代时间的胚性悬浮细胞的原生质体产量和活力进行研究.结果:贡蕉胚性悬浮细胞 在酶组合为3.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10和0.15%果胶酶Y-23的酶溶液中,酶解8h可获 得高产量的原生质体,采用继代7d的贡蕉胚性悬浮细胞进行原生质体分离时获得的原生质体产量最高,达到1.2×107个/mL PCV ECS,原生质体活力达到85%以上.结论: 合适的酶组合、酶浓度和酶解时间有利于贡蕉胚性悬浮细胞的原生质体分离,继代7d 后的贡蕉胚性悬浮细胞最适合用于原生质体分离.     

植物原生质体培养

六十年代初英国植物生理学家 Cocking首先用酶解方法降解细胞壁,获得了蕃茄根尖细胞的原生质体。由于酶解方法能获得遗传性状和生理性状较一致的原生质体群体,为从植物细胞获得大量原生质体开辟了新的途径,并已为国内外科研工作者广泛采用。现用酶解法