胞外漆酶同工酶谱及其在食用菌育种中的应用I．黑木耳及光帽鳞伞不同菌株的鉴别

利用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳,分析比较了黑木耳(Auricularia auricula) 16个菌株和光帽鳞伞(Pfioliota nameko) 9个菌株的胞外漆酶同工酶酶谱。经多批次重复, 得到了所有菌株的恒定酶谱。依照这些酶谱及各酶带等电点(pT)值的不同,确立了它们的漆酶标志位点相似系谱。16株黑木耳被区分成4种类型9个组。9株光帽鳞伞被分成两种类 型3个组,但各组内之菌株间仍有异同。试验结果表明,把漆酶同工酶谱应用于菌株鉴别将是一种有意义的方法。     

融合株SPSC发酵生产酒精的工艺研究 Ⅰ.絮凝速率、发酵过程的最适温度和pH值

酿酒酵母属(S. cereviae)变异株和粟酒裂殖酵母属(S. pombe)变异株进行属间原生质体融合得到融合株SPSC,该融合株比S. cereviae具有强的自身絮凝能力。以葡萄糖浓度150g/L的底物在30～44℃的温度范围内进行摇瓶厌氧发酵,获得最佳温度范围为34～38℃,最高发酵温度为40℃。在有效容积2.35L悬浮床反应器中,在pH值3.0～5.0范围内进行连续发酵,获得最适发酵pH为3.5～4.5。     

不同类群酵母胞壁甘露聚糖核磁共振氢谱的比较研究*

运用核磁共振氢谱(PMR谱) 对各类酵母的细胞壁甘露聚糖进行比较研究,在我国尚无报道,其中某些酵母也尚无文献记载。本文结果表明：1．同菌株的胞壁甘露聚糖PMR谱型的重复性很好。2．同种不同株的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的多糖谱型也相同。3．所测的二端芽殖酵母中完全型与不完全型菌株的谱型很相似, 如柠檬形克勒克酵母(Kloeokera apiculata)与葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum。4．某些分类系统上来源较杂的子囊菌酵母如单宁管囊酵母(Packysolen tanophilus)、萤光威克酵母(Wickerkamiaflurescens) 与高糖固囊酵母(Citeromyses matritensis) 则体现了各不相同的谱型。 5．二株分自西双版纳的极为相近的类酵母(Saccharomycodes sp.)其多糖的(PMR)谱型与多糖的组分都彼此相同,有助于对它们的适当归类。这一切证明酵母胞壁多糖PMR谱型相似程度的比较是分类上较有意义的性状,有助于探讨亲缘关系,核实完全型与不完全型,也有助于对疑难菌株的分析     

姜黄属植物过氧化物酶同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析姜黄属14种(28个样品)植物的过氧化物酶同工酶。结果表明属内种间有明显的酶谱差异,各种都有特征酶谱。根据酶谱特征及酶谱距离,结合根茎颜色,可把14个种分成三群:第一群,根茎黄色至深红色,有姜黄、毛姜黄、郁金、印尼莪术、C.petiolata和C.sP.(2);第二群,根茎灰白色,有广西莪术、大莪术和温郁金;第三群,根茎浅黄而间淡蓝色或深蓝色,有莪术、顶花莪术、细莪术、C.aeruginosa及C.zedoaria。研究结果还表明:1.国产莪术的酶谱与从美国引入的C.zedoaria和C.aeruginosa均不相同,而与引自新加坡的C.Phaeocaulis一致;2.不同形态的广西莪术具有完全一致的酶谱;3.温郁金与郁金的酶谱有差异。     

红酵母属同工酶酶谱分析及其分类研究

分析了２４株红酵母菌的苹果酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和酯酶的电泳图谱,并将同工酶酶谱资料进行了聚类分析。结果发现：参试红酵母属内各种间３种同工酶酶谱差异明显,２４株红酵母菌被明显分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ５群,每一个分别代表一个种（Ｂ群除外）,其中Ａ群的１８个菌株为Ｋｒｅｇｅｒ－ｖａｎ Ｒｉｊ（１９８４）系统中的深红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂａ）,又可分为２个亚群,第Ａ１亚群相当于Ｌｏｄｄｅｒ     

金合欢根瘤菌的几种酶活特性

金合欢根瘤菌Rhizobium sp.(Acacia farnesiana)的氧化酶、过氧化氢酶、脲酶、青霉素酶和β-半乳糖苷酶均呈阳性。经过酶活性定量测定表明金合欢根瘤菌有葡萄糖酸-6-磷酸脱氢酶(6PGD)和β-半乳糖苷酶的酶活性,而慢生型大豆根瘤菌未测到上述两种酶活性。根据聚丙烯酰胺凝胶电泳酯酶图谱,6株金合欢根瘤菌可分成两群:酋株AF1、AF2和AF3的酯酶图谱中有A带,AF4、AF5和AF6的酯酶图谱中没有A带。     

蛋白和酯酶电泳在根霉鉴定上的应用

对根霉(Rhizopus)属的十个种或变种共二十四株菌的菌体可溶性蛋白和酯酶同工酶进行了电泳的研究得到对这个属分类上更多的依据.在严格控制培养,提取和电泳条件的情况下,同一株菌不同批次所得菌体蛋白电泳图谱有较好的重复性.在相同的条件下,每个种的根霉有各自特征性蛋白图谱,种内不同菌株的蛋白图谱和酯酶酶谱基本相同.特别是形态特征明显、分类地位明确的种,种内各株的图谱也较一致,如R. stolonifer;与R.circinans.在确定新变种R. delemar var. latoapicalis时,电泳图谱与R.delemar var.delema:有明显不同,起到了佐证作用.因此认为,蛋白图谱与酯酶酶谱相辅相成,在根霉种的分类中是一有效的辅助手段.     

致病酵母菌基因组多态性及亲缘关系的研究

致病酵母是条件致病菌感染中最常见的菌群。其属间、种间及种内的分型具有重要的流行病学及临床意义。以随机扩增多态性(Randomly Amplified Polymorphism DNA markers,RAPD)的方法对48株临床上常见的酵母菌属间、种间及种内基因组型的多态性进行了研究,并以多种引物扩增带型的相似性系数的高低来评价酵母菌之间的亲缘关系。结果表明:RAPD带型可清楚的显示出假丝酵母(Candida)及相关酵母属间、种间及种内的差异,亲缘关系的研究表明假丝酵母属与隐球菌属(Cryptococcus)、丝孢酵母属(Trichosporon)的相似性系数为80％,除季也蒙假丝酵母(C. guilliermondii)外,假丝酵母属中不同种间的相似性系数为82％～87％,同种不同株间的相似性系数>90％。大多数属、种基因组分型的结果和形态学分类结果相符。     

竹菌中松胞菌素D的分离和鉴定

在筛选抗癌药的过程中,从肉球菌属(Engletomyces)的竹菌(Engleromyces goetzii Henn.)中分离到一种对皮肤癌有一定疗效的化合物。经紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱及质谱的鉴定,证实与已知的松胞菌素D(Cytocrhalashala D)是同一种物质。讨论了松胞菌素的分布及其在细胞生物学等方面的应用。     

β—N-乙酰氨基己糖苷酶产生菌的筛选与产酶条件

筛选了真菌、细菌和放线菌共1121株,其中有β-HexNAcasc活力的有237株,在所筛选菌中只要有β—GlcNAcase活力,也就有β-GalNAcase活力,但两酶比值(β-GlcNAcase／β—Gal-Nacase)不同。所筛选出的溜曲霉(ASP.tamarii)S215为由土壤中分离的,其产酶最适条件为5％麸皮液体培养基,28—30℃振荡培养5—6天,补充碳源如纤维二糖、葡萄糖胺、半乳糖胺或者补充氮源(NH4)2SO4及NH4NO3,可以稍稍提高酶活。在溜曲霉的培养液中除β-GlcNAcase及β-GalNAcase外,还有a-半乳糖苷酶、β一半乳糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、β-岩藻糖苷酶及α-甘露糖苷酶。     

甘薯属植物过氧化物酶同工酶分析

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对23份甘薯属不同倍性材料进行过氧化物酶同工酶酶谱分析。初步结果表明,过氧化物酶同工酶酶带数目与材料倍性无明显相关性;二倍体或四倍体野生种的种间酶谱差异显著;六倍体野生种不同株系间以及六倍体栽培种甘薯的不同品种间酶谱差异较小;但栽培种甘薯与六倍体野生种I.trifida(6x)、四倍体野生种I.littoralis(4x)以及二倍体野生种I.trifida(2x)的酶谱有4条明显共同标记带,表明其间有一定亲缘关系。     

根霉的研究IV．根霉淀粉葡萄糖苷酶的研究

本文研究根霉属内各种羣产生淀粉葡萄糖苷酶的情况及选择高活性的菌种。我们由150株根霉中选择出3株淀粉葡萄糖苷酶很强的根霉,共名称和菌号为Rhizopus japonicus AS 3.849(日本根霉),Rh. Tonkinensis AS 3.1175(河内根霉)和Rh.chinensis AS 3.2746(中国根霉)。酶作用的最适pH是4.5—5.0,最适温度因菌而异,一般以50一55℃最好,其中3．2 746耐热性最强,稳定性最高。根霉睫粉酶对原料的选择性不强,对6种不同的淀粉(可溶性淀粉、马铃薯、甘薯、玉米、大米和高粱),几乎都能全部水解成葡萄糖。3种根霉的性能,在很多方面都不相同,在一般条件下,3．849糖化力最强,3.1175次之,3.274 6糖化之初速度较低,而它的优点是生长迅速,酶的耐热性和稳定性强。     

疫霉蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳

对北京,河北、青海、山东、湖北、广东等地不周寄主上收集的,属于 Phytophthoracapsici,P．Colocasiae,P．Heveac,P．Infestans, P．Melonis P．Nicotianac var. nicotianae 和 P．Nicotianae var. parasitica 7个种和变种的17株菌的蛋白质,进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析和比较,经多批次试验,7个种和变种各自恒定地呈现典型的蚤白质图谱,显示出种间的差异。其中 P. infestans 占11株,它们虽采自不同地区和寄主,又分属5个生理小种,经多次电泳,电泳图谱基本相同,但不同菌株存在一些差异。同一株菌,培养条件对电泳图谱影响不大,不论是培养在含苹果酸的培养基上,还是培养在延胡索酸培养基上,电泳图谱基本一致,只是电泳材料必须新鲜。     

家鸽不同组织同工酶的初步研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对家鸽不同组织的酯酶同工酶、乳酸脱氢酶同工酶的酶谱进行了观察和试验分析。计算了家鸽8种组织酯酶同工酶各自酶带的Rf值。显示出家鸽8种组织的酯酶同工酶酶带和7种组织的乳酸脱氢酶同工酶酶谱分布特征具有明显的组织特异性。初步分析了基因位点与酶谱带型之间的相互关系,对于鸟类的生化分析和遗传研究有参考作用。     

右旋糖酐酶产生菌的筛选及其酶学性质的比较研究

从3162株真菌中筛出具有右旋糖酐酶话力的菌株528株,其中黄柄白曲霉(Asp. Flavi-pes)、蠕形青霉(Pen. Vermiculatum)、产黄青霉(Pen. Chrysogerum)和构巢曲霉(Asp. Nid-ulans)也产该酶,这在文献中尚未见报道。通过复筛,从中选出5株,它们分属黄柄白曲霉(Asp. Flavipe、二株)、肉色曲霉(Asp.carneus)、焦曲霉(Asp. Ustus)和淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)(各一株)。对它们的产酶特性作了一系列比较研究,发现所有酶的最适温度皆为50--55℃,最适作用PH为5.0—5.5,酶解最终产物是异麦芽塘、异麦芽三糖及少量葡萄糖,故它们皆属内切型右旋糖酐酶。此外它们在温度和PH稳定性、其它酶活力存在的情况、对不同底物作用的情况、凝胶电泳模式、金属离子和一些蛋白质变性剂的影响等方面都有一些差异。通过比较发现,由淡紫拟青霉8523菌产生的右旋糖酐酶具有较好的酶学性质：它在50"0保温24小时和60℃保温1小时,剩余话力分别为95％和90％,在pH 3．5—1 0．5很宽的范围内是稳定的,此外它对SDS和脲的耐受性也较其它菌株的酶好。     

苏氨酸操纵子的克隆与诱变

本文报道用Hind I+BamHI双酶切方法,从大肠杆菌K12的野生型菌株染色体上克隆苏氮酸操纵子的三个基因(thr A,thr B和thr C)到载体pBR322上,在合成培养基上筛选带thr操纵子的转化子。所得杂种质粒pTH1经羟胺体外诱变,筛选得到抗氨基酸类似物a-氧基-β-羟基戊酸(AHV)的突变质粒pTH2和pTH3,在宿主大肠杆菌C600中产苏氨酸最比初级克隆株高20倍以上,在解除天冬氨酸激酶—高丝氨酸脱氢酶(AKI—HDI)反馈抑制的宿主大肠杆菌A56—121中产苏氨酸量可达11g／L,比初级克隆株大肠杆菌 c600(pTHl)高100倍以上。     

乳糖发酵短杆菌色氨酸营养缺陷株的诱变*

用亚硝基胍(NTG)诱变乳糖发酵短杆菌(Breevibacterium lactofermentum)ATCC-13869得到34株氨基酸营养缺陷突变株。经添加生物合成代谢途径中的不同底物鉴定,突变株33为色氨酸酶基因(tnA)缺陷,突变株34为色氨酸合成酶基因(trpB trpA)缺陷。     

尝试利用R-Q对应因子分析识别分群融合子代

在特定融合组合的子代群体中,以不同姊妹菌株作为观察样本(n=N),以蛋白质电泳全部谱带泳动率作为指标(p=P)。则所对应的谱带光密度扫描峰面积作为其观测值(x)(当某菌株缺乏某条带时,其峰面积记为零),利用R-Q对应因子分析程序,解析这个数据矩阵(X_nxp)。能够在同一标度的因子平面上考察这一特定融合重组事件发生后．姊妹菌株间和各菌株内蛋白质谱带位置与含量间以及它们相互之间的多重内在联系,从而推断子代群体与亲本的遗传继承关系。并由此来识别和分群姊妹菌株。这种探索具有拓展数值分类能力和指导融合育种实践的意义．     

爱德华氏菌产乳酸氧化酶的条件研究

在以前工作的基础上,对已获得的产乳酸氧化酶的5株菌进行复筛,对产酶量大的一株菌进行了分类鉴定,确定该菌株属迟钝爱德华氏菌生物群I(Edwardsiella tarda Biogroup I)。这与曾报道的产乳酸氧化酶分枝杆菌(Mycobacterium)和片球菌(Pediococcus)是不同的菌。分别研究了培养基中的培养初始pH、核黄素、乳酸钠以及硫酸铵对发酵产乳酸氧化酶的影响。这一酶源在酶法生产丙酮酸及医疗诊断和酶电极应用上有意义。     

核盘菌属一新种——人参核盘菌

本文报道了采自人参(Panax ginseng C. A．Mey (保留名nom. Coiiscry))的核盘菌属一新种——人参核盘菌(Sclerotinla．Ginseng Wang C. R.,C. F. Chen et J. Chen)。该种在形态学以及可溶性蛋白、果胶(甲)酯酶和多聚半乳糖醛酸酶谱带等方面,均不同于已知种核盘菌(S. sclerotiorum (Lib．)de Bary),小核盘菌(S. minor Jagger)车轴草核盘菌(S．Trifoliorum Erikss．)和细辛核盘菌(S．Asari Wu et C．R. Wang)。模式标本(800719)保存于沈阳农业大学植物免疫研究室。