核酸及蛋白质合成、提取、纯化

922757藻类的分子生物学〔会,法〕/Dubacq,J.P。了B iofutur一1091,106一22~24〔译自DBA,1992,11(3),92一01222〕 1990年s月4~10日,在美国Durkam召开T第四届藻类学国际研讨会。两个重点议题是:叶绿体基因组对光合器官的调控作用和核基因组在这方面的功能;以及基因的演变。在此以前,对海藻的分子生物学还一直未研究。最近,利用单细胞藻成从一些大型藻制备原生质体已能克服在抽提和纯化DNA方面的困难,对藻类基因组的研究已铺开。藻类核的、线粒体的和叶绿体的DNA在大小、基因排列和碱基化学(甲基化频率和特异于某些组的碱基)是不同的。…     

核酸及蛋白质合成、提取、纯化

921598自动化引物延伸装置〔专,日〕/Toa一Fuel/Jo3154一869:13.11。89一JP一294369(02。07.91)13.11。89 as 294369.92一235530/32(10页)〔译自DBA,1991,10(21),91一12085〕 新装置能将荧光标记的DNA引物加入样品、退火、酶促引物延伸及浓缩。该系统包括:DNA样品容器支撑及定位装置、将样品、引物及缓冲液导人容器的设施、加盖去盖装置、加热及温控装置、样品冷却装置、容器振荡(混匀)装置、低速及高速顺序离心装置以及控制装置(使退火、延伸及浓缩等过程可自动进行)。通过应用混匀和离心过程,可完全消除粘连在管壁上的样品,并且,微…     

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920805通过酚抽提法从服硫氛酸中纯化质粒〔英〕/Fishe-r,J .A.…了Anal.Bioehem一1991,194(2)一309~315【译自DBA,1991,10(15),91-08441〕 该方法利用自动核营酸提取设备。基本操作是于pH4.5时用酚从IM的脏氰酸中进行抽提,这样能从水相中有效地去除染色体DNA,而超螺旋的质粒DNA仍留在水相中。51核酸酶消化表明,去除的染色体DNA已经变性,因而可溶于有机相。整套方法包括:用溶菌酶、RNA酶A和蛋白酶K连续预处理细菌细胞;消化后的溶液用酚/氯仿十水混合物抽提二次,再用氯仿抽提一次。通过异丙醇沉淀收集纯化的质粒。这样提纯的质粒中…     

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931129由各种方法纯化的质粒ONA的Taq循环翻序〔英〕/Hradetzky,D.…1 Bioteeh Forum Eur一1092,9(7~8)一471~472〔译自DBA,1992,11(20),92一11144) DNA模板的纯化是测序中最关键最困难的一步。就DNA得率、花费、碱基范围和碱墓精确率等方面,考察了制备双链DNA的各种方法,包括小型制备一水煮法,小型制备一碱法,氮化艳制备法,Stratagene过柱法,Qiagen过柱法。采用质粒pBlueseript IIKS、ABI Taq引物循环侧序药盒及AIB Taq染料脱氧终止子循环测序药盒,对DNA进行自动测序。Stratagene或Q二age。层析给出高纯度DNA,使测序范围…     

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920401简化盆组蛋白纯化的遗传方法〔会,英〕/Moks,T.…j Abstr.Pap.Am。Chem.Soe一1991,ZoiMeet.Pt.z一BIOTS〔译自DBA,1991,10(13),91一07234〕 开发了以细菌血清蛋白受体如葡萄球菌蛋白一久和链球菌蛋自一G为基础的基因融合系统,以简化大规模和小规模的重组蛋白纯化。由于IgG和血清白蛋白间的强相互作用,可以一步回收基因融合产物,得到高产量和纯度。在融合蛋白的蛋白一A/G衍生物和目的蛋白之间导人不同专性酶促和化学裂解位点。这样可从纯化的融合蛋白上除去亲和性拖尾,放出生物活性分子。通过设计一种编码2个合成的1 gG一结…     

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921196C产一甲甚一2’脱级核昔5尹三磷酸的合成及其在ONA聚合醉催化的ONA合成中的底物特性〔俄〕/Chid-geavadze,2.G.…了Bioorg.Khim一1901,17(5)、一6了s~654〔译自DBA,1991,10(15),91一10248〕 制备了C产一甲基一2产一脱氧核昔5尹三磷酸,并研究其在DNA聚合酶催化的DNA合成中的底物特性。在各种底物同系物存在下,采用一种14碱基引物、M13mp10DNA、逆转录酶和末端转移酶等,合成了DNA。在反转录反应中,同系物被加成到引物的3产端。三磷酸化合物本身却不能作反转录酶或末端转移酶的底物。在由牛胸腺DNA聚合酶一a和大肠杆菌DNA…     

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923505快速简便地从产阮假丝醉母制备ONA〔英〕/Krizk-ova,L.…/Folia Mierobiol一1092,36(4)。一406~407[译自DBA,1992,11(7),92-03633〕 从产阮假丝酵母(Ca介己云da”云玄“s)工业菌株IRBMCS分离DNA,步骤如下:将指数I期的细胞悬浮于原生质球形成液(1.2M硫酸镁、20mM柠檬酸、pHS.s)中,5分钟后,加人Zymolase一5。。。(50g/l,溶于10倍稀释的原生质球形成液加10%a一疏基乙醇溶液中)。37℃半小时后,离心收集原生质球,悬浮于盐酸肌溶液(4.5MGuHCI,o.iM EDTA、o.15M NaCI、soopPmSDS、pHs)中,在65℃下温育10分钟。室温冷却后,…     

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924277染色体组ONA的微里提取:筛选大纽样品的方法〔英〕/Ramirez一50115,R.…了Anal.Bioe-五em一1992,201(2)一331一335[译自DBA,1992,11(12),92一06617〕 在制备的全过程中使用的是一种有96个穴的组织培养盘。用多管移液器便于同时分析多份样品。96种样品(即单个细胞培养物集落悬浮液)被培养在由明胶覆盖的96穴培养盘中,用磷酸盐缓冲液洗两次。用iomM Tris(pH7.5)、iomM EDTA、iomM NaCI、0.5%Saroosyl和img/。l的蛋白酶K在60℃处理过夜,使细胞裂解。将上清液倒出,用70%乙醇将盘洗三次,然后凤千。纯DNA可直接用限制酶消化、上…     

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931521闭合环状质垃DNA的羽备[专,英3/Hyman,E.…,W09213—963 l 30.01.91-US.647789(20.08.92)22.01.92 as U 00540.92—300048/36(20页)[译自DBA,1992,11(23),92-12897~ 从细胞成细胞器中纯化闭合环状(cc)DNA的新方法是· (1)用溶菌酶酶解细胞或细胞器I(2)用蛋白酶处理DNA, (3)加热使所有非环状DNA变性成单链(ss)形式,(4)用内切酶(I)类处理,消化RNA和染色体DNA, (5)回收ccDNA。最好由大肠杆菌纯化ccDNA,并用蛋白酶一K。当ccDNA是双链时,制备时在用核酸酶处理前用DNA一局部异构酶处理,释放出超螺旋质粒DNA。 (朱遐)93152…     

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92弓1 38合成无dc-dG拖尾的全长双链cONA转录本的新方法〔英〕/Fukuoka,5.1.…了Nueleie AeidsRes一1991,19(24)一6961~6962〔译自DBA,1992,11(6),92一02479〕 该方法利用末端转移酶将dC同聚物拖尾(15个碱基)添加到eDNA中。用合成的01190一ribo一G (rG,巧聚体)引导全长第二条链cDNA的合成。完成ds cDNA合成后,用RNA酶H消除RNA-DNA异源双链核酸分子拖尾中的rG核昔酸,用噬菌体T4 DNA聚合酶消除暴露的单链dC同聚物拖尾。产生的ds oDNA转录本不含C/G拖尾,通过连接物一接头辅助消化可将其插人任一载体。(朱遐)923139DNA片段的…     

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922口06醉母中的蛋白定位〔英」/Reid,G.A。/J。Gen。Mierobiol一1991,137,Pt.s。一1765~1773〔译白DBA,1091,10(23),91一13330〕 以酿酒酵母作实验材料为重点,综述了涉及蛋白质定位的细胞和分子过程。讨论了下述内容: (a)分泌途径,(b)等级分类信号,(c)蛋白质在内质网上的滞留;(d)转入液饱,(e)在内质网上定位的早期步骤,(f)线粒体蛋白定位, (g)蛋白质在核、过氧物酶体及其它细胞器中的定位;及(h)蛋白质从酵母细胞质中的直接分泌。在酵母细胞质中产生的几千种蛋白质中,多数蛋白通过一系列蛋白定位途径移到不同的胞内目标或分泌到细胞外。…     

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950777用荧光标记的双脱曩桉苷酸终止片段对cosmid DNA进行自动定序和作圈[英]/Obermaier,B.…,BioTechniques.一1992,13(1).一46～47[译自DBA;1992,1l(17),92—09538] 本法使用的一种DNA自动定序仪。只用少量COSmid模板DNA来进行引物的平移,此时,按提供的核苷酸序列数据来合成弓I物,用其对较长序列做分段测定。不需标记gI物在一支管子里即可完成测序反应,而在6.5％PA.GE的单泳道中即能将反应产物分开。用酿酒酵母染色体一Ⅱ左端一个33kb区上.以10个不同的寡核苷酸引物进行lO次独立的定序反应,每个泳道的辨析度是280～340个核苷…     

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930378质粒DNA的■促纯化[英]/Isfort,R.J./BioTechniques.一1992,12(6).一798---804[译自DBA,1992,11(15),92-08366] 本操作只需2小时,不用昂贵设备,花钱少。如此提纯的质粒DNA可用于限制性酶切,.克隆、亚克隆、定序、缺口平移分析和末端标记。用此法纯化的质粒为MSVcL,它含有野生型p53肿瘤抑制子基因。培养携该质粒的大肠杆菌,细胞用碱裂解处理后离心,再用酚·氯纺(1 t 1)和异丙醇处理细胞团。离心后将细胞困重悬于50raM Tris—HC。l’(pH8,含30mM MgCII、O.5raM ATP和10m。|yI磕基乙醇,总体积1 m1)。加20/,I酶液(含100U R…     

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923833 新的启动子区ONA序列〔专,日〕/Kaji,A./J0 3250一855:30.03.90一JP一081030(li.rZ。91)30.03.90 as 081030.92、一035929/05(4页)〔译自 DBA,1992,11(8),92一04290〕 新序列含启动子区,在一35区有TTACCC碱基序列,在一35区与一10区之间有15一20碱基的间隔 区。一10区为TATACT,间隔区以 GTAATATGTTTAATCAGGGC为主。将此启动子序列整合到表达栽体(如pKK系列)中,产生强启动效应。例如,将含有质粒pLC6一32的大肠杆菌培养于含大肠杆菌素的L培养基中,直至静止期。抽提质粒,用Eo0RI及Smal处理,在NaOAc存在下乙醇沉淀…     

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922362 生物颗粒的浓缩系统[专,俄]/Res.Inst.Appl.Microbiol./SU 1603-281:18.02.88-SU-380687(30.10.90)18.02.88 as 380687.91-293384/40(3页)[译自DBA,1991,10(25),91-14574] 该系统有一个水平缓冲液容器,内含电极和一个小室(?)聚集室,它由一个垂直的透析膜与阳极分开。系统中还有一个电渗膜,由一个多孔栅与小室-聚集室分开,孔栅在阴极室与渗析膜平行放置。阳极和阴极室内的电极缓冲液同量。在电场中,通过膜发生液体移动。如果膜带有负电,缓冲液从阳极流向阴极。若带正电则相反。本系统可用于浓缩     

核酸及蛋白质提取、纯化

930001结合使用化学及酶促RNA合成的起始寡核苷酸[英]/Pitulle,C.…∥Gene.·1992, 112(1)‘一101～105E译自DBA,1992,11(13),92·07251] 一种短核酸(6个核苷酸)在其3,端带鸟嘌呤。用它作为起始序列,用’TTRNA聚合酶进行转录。转录本在其5,末端带有这一短序列。获得了带有限定的含全部三,双或单磷酸基团的5,末端的RNA。有了游离的5,·0H基团,UIl可进行有效,方便的5L”P标记。这些寡核苷酸可以含有脱氧核苷酸,核苷酸,2,.0一甲基化核苷酸及生物素化核苷酸。只有其3,末端的鸟苷酸被编码于模板DNA的转录起始位点内,其余序列则不然。…     

阪崎肠杆菌核酸提取纯化方法分析比较

阪崎肠杆菌是一种食源性致病菌,目前越来越多的分子检测技术用于该菌的检测,以取代传统的检测技术。针对分子检测技术相应的核酸标准物质的研制势在必行。核酸的提取和纯化是核酸标准物质的研制过程中的重要环节之一,快速高效高质量,低毒低成本已成为核酸提取的重要目标。就现有方法进行分析比较,重点对常用的三种提取微生物基因组DNA的试剂盒进行了全方位比较,获得了阪崎肠杆菌较优的基因组DNA提取方法,并对提取的DNA进行PCR特异性扩增检测,获得较清晰的谱带。为阪崎肠杆菌核酸标准物质的研制奠定了基础。     

核酸纯化柱提取核酸定量检测丙型肝炎病毒RNA的临床应用

目的:探究核酸纯化柱提取核酸定量检测血浆标本中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)的临床应用效果。方法:将2013年8-11月期间我院600例抗-HCV阳性丙肝患者的样本,按随机字数表法分为研究组对照组各300例,分别采用核酸纯化柱和酚-氯仿提取法检测,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测两组HCV-RNA水平。结果:研究组检测阳性率为87.67%(263/300),显著高于和对照组的54.0%(162/300),差异有统计学意义(X2=82.296,P=0.000);两组HCV-RNA检测水平差异无统计学意义(u=1.721,P=0.067)。结论:核酸柱提法定量检测血浆HCV-RNA操作简单、快速,分离效率高,容易掌握,值得临床推广。     

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藻胆蛋白质的提取纯化与生物活性研究进展

藻胆蛋白的提取原料主要来自于红藻和蓝藻;细胞破碎的方法主要有反复冻融法、化学试剂处理法等5种方法;提取的方法主要有盐析法等3种;分离纯化的方法主要有层析法等3种;藻胆蛋白其生物活性主要表现在:抗肿瘤活性、抗病毒活性、抗氧化和消炎活性,提高免疫活性。