颗粒体病毒、微红绒茧蜂、菜青虫相互关系的初步研究

近几年来,利用颗粒体病毒防治菜粉蝶(Pieris rapae以下称菜青虫)幼虫的工作,在我国已取得了较好的进展(梁东瑞等,1979;河北省菜青虫颗粒体病毒研究协作组,1981)。病毒杀虫剂与化学杀虫剂的显著区别之一,是前者具有选择性,不直接杀伤天敌昆虫。为了明确颗粒体病毒防治菜青虫对寄生蜂种群的影响,以便进一步了解病毒治虫在保持生态平衡上的意义,我们对颗粒体病毒、微红绒茧蜂(Apanteles rubecula)、菜青虫的相互关系作了一些实验室研究,现报道初步结果如后。     

两种提取菜粉蝶颗粒体病毒方法的比较

为了有效的制备菜粉蝶(Pieris rapae)颗粒体病毒(简称PrGV)杀虫剂。我们对丙酮-乳糖共沉和低速差速离心两种提取病毒的方法进行了比较。前者是以乳糖作为病毒包涵体表面的     

物理化学因子对菜粉蝶颗粒体病毒感染力的影响

<正> 为了探讨菜粉蝶颗粒体病毒(简称PrGV,下同),杀虫剂最好的保存和施用条件,我们用各种物理化学因子对它的感染力作了一些探讨,报道如下。 一、PrGV感染幼虫的最适温度     

中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制

【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood bee disease, CSBV）,并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15% FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。     

大菜粉蝶颗粒体病毒的研究:包含体结合的碱性蛋白酶

本文报道从新疆分离的一株大菜粉蝶(Pieris brassicae)颗粒体病毒(PbGV)包含体上结合有碱性蛋白酶.提取含酶的包含体蛋白,以酪蛋白为底物鉴定表明此酶在pH9.4有最大的酶活力,并定位于“包裹”在病毒粒子套膜外的包含体蛋白中.在高pH时分子皿为26,500的包含体蛋白被酶降解为19,500和15,600道尔顿的两个组分.Hg⁺⁺、Cu⁺⁺仅部分抑制酶活力,可被二异丙基氟磷酸(DFP)完全抑制.75℃以上加热处理可使酶失活,并大大降低病毒包含体的解离.推测此酶是影响PbGV对寄主感染率的因子之一.     

鼠疟原虫蚊期配子生殖的体外培养——在Eagle MEM培养基中发育的观察

为预防疟疾,开展疟原虫生物学、免疫学等方面的研究,从而设想建立疟原虫蚊期(配子生殖、孢子增殖)的体外培养系统。有关鼠疟原虫蚊期配子生殖的体外培养,国内外曾有不少的报道。近年来,国内曾用多种培养基对离体培养鼠动合子进行了初步观察;同时又在鼠疟动合子的形成和离体培养方法上进行了研究;国外学者罗萨利斯-龙奎尔(Rosales-Ronquillo)等在使用含斯氏按蚊细胞原代培养物的Eagle MEM.培养基和鲦鱼上皮细胞系Eagle MEM培养基对离体培养伯氏疟原虫的动合子进行了活体观察;斯皮尔(Speer)也使用了含该种蚊细胞的Eagle MEM培基进行鼠疟     

大菜粉蝶颗粒体病毒对菜粉蝶幼虫取食、生长、发育的影响

菜粉蝶幼虫在一、二、三、四龄初期饲以大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV),食量减少99.3—38.4%;四龄末或五龄初饲毒,食量反而比健虫高出36.3%和87.2%。幼虫感病后取食期的缩短或延长是食量变化的主要原因。幼虫病死前脱皮过程先被抑制,其结果往往使得死亡时所处的龄期明显延长。幼虫在四龄末饲毒后,由于五龄期延长,食量增加,其死亡前达到的最高体重平均为357.9毫克,远高于健虫化蛹前的最高体重。PbGV对菜粉蝶化蛹也有明显影响。幼虫在五龄前饲毒,一般不能化蛹。五龄第1—3天饲毒,化蛹率26.4—87.9%,第4天饲毒对化蛹无影响。本文结果对应用PbGv防治菜粉蝶幼虫危害以及对该病毒的大量增殖均具指导意义。     

菜粉蝶野田村病毒感染宿主的病理学变化及病毒的装配

应用光学组织切片和电镜超薄切片技术对菜粉蝶新的野田村病毒感染菜青虫幼虫的组织病理学和超微病理 学变化以及菜青虫颗粒体病毒混合感染后的病理学变化进行了研究。结果表明该病毒只在菜青虫中肠细胞质内 增殖。病毒侵染时,线粒体、内质网等细胞器均发生显著病变。该病毒与前人报告的能侵染菜青虫的其它病毒均 有所不同。本文还讨论了野田村病毒的装配。     

菜粉蝶野田村病毒感染宿主的病理学变化及病毒的装配

应用光学组织切片和电镜超薄切片技术对菜粉蝶新的野田村病毒感染菜青虫幼虫的组织病理学和超微病理学变化以及菜青虫颗粒体病毒混合感染后的病理学变化进行了研究.结果表明该病毒只在菜青虫中肠细胞质内增殖.病毒侵染时,线粒体、内质网等细胞器均发生显著病变.该病毒与前人报告的能侵染菜青虫的其它病毒均有所不同.本文还讨论了野田村病毒的装配.     

菜粉蝶幼虫感染颗粒体病毒后线粒体形态异常变化的初步观察

病毒侵入昆虫后引起细胞器形态变化的报道很少。我们进行菜粉蝶颗粒体病毒组织病理观察时,在脂肪细胞中,观察到线粒体有异常形态变化现象,现简要报道如下。 用病毒悬液浸湿甘蓝叶,晾干后饲喂3龄幼虫,感染后第3天,截取虫体中段,戍二醛和锇酸固定,618环氧树脂包埋,醋酸铀染色,透射电镜观察。 在脂肪细胞的超薄切片中,可以看到有些线粒体近似环状或液泡状,在有的切片中,此种线粒体的比例很大(图版Ⅰ:2),但在正常幼虫脂肪组织的超薄切片中,极少观察到此种形状的线粒体(图版Ⅰ:1)。     

菜粉蝶蛹血细胞体外细胞免疫反应及蝶蛹金小蜂毒液的影响

为探明蝶蛹金小蜂Pteromalus puparum毒液对其寄主菜粉蝶Pieris rapae蛹颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力的影响, 本研究分别采用Na₂-EDTA处理和尼龙毛法对菜粉蝶蛹颗粒血细胞与浆血细胞进行分离纯化; 再采用离体细胞培养方法, 研究了菜粉蝶蛹颗粒血细胞、 浆血细胞各自在包囊和吞噬反应中的作用, 以及蝶蛹金小蜂毒液对其所产生的影响。结果表明： 颗粒血细胞和浆血细胞均参与了包囊反应, 其中前者包囊作用明显, 后者作用微弱, 但两者同时存在时包囊作用最为明显; 血淋巴浆质对颗粒血细胞和浆血细胞包囊反应均无显著影响。毒液对颗粒血细胞和浆血细胞的包囊能力均存在显著的抑制作用, 且抑制作用具有明显的剂量效应特征。此外, 菜粉蝶蛹颗粒血细胞和浆血细胞均具吞噬能力, 其中前者吞噬能力显著强于后者; 毒液对颗粒血细胞与浆血细胞的吞噬能力亦均存在显著的抑制作用, 且该抑制作用亦具有显著的剂量效应特征。结果说明, 菜粉蝶蛹颗粒血细胞及浆血细胞均参与寄主的细胞免疫反应, 蝶蛹金小蜂毒液对其寄主颗粒血细胞和浆血细胞的包囊与吞噬能力均存在显著的抑制作用。     

小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠杆菌中的表达

根据颗粒体病毒颗粒体蛋白(Granulin)基因在其起始密码子上游的12个碱基高度保守序列(TATAAGGAATTT)以及大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV)的颗粒体蛋白基因的序列[1]设计引物,PCR扩增得到850bp左右大小的片段,核苷酸序列测定结果表明该病毒的granulin基因全长为855bp,起始密码位于第38～40位碱基,终止密码位于779～781位碱基,编码框序列全长为744;推测该基因编码一段由247个氨基酸组成的多肽,分子质量约为2.9178×104道尔顿.与其它颗粒体病毒颗粒体蛋白基因进行同源性比较,核苷酸同源性都在70%以上,氨基酸同源性都在75%以上,最高的为大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV),核苷酸同源性为97%,氨基酸同源性为98%.构建了重组表达载体pet-28a-Gran,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测,表明获得了颗粒体蛋白基因在大肠杆菌BL21中的特异表达.     

小菜粉蝶颗粒体病毒颗粒体蛋白基因的序列测定及在大肠杆菌中的表达

根据颗粒体病毒颗粒体蛋白(Granulin)基因在其起始密码子上游的12个碱基高度保守序列(TATAAGGAATTT)以及大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV)的颗粒体蛋白基因的序列[1]设计引物,PCR扩增得到850bp左右大小的片段,核苷酸序列测定结果表明该病毒的granulin基因全长为855bp,起始密码位于第38~40位碱基,终止密码位于779~781位碱基,编码框序列全长为744;推测该基因编码一段由247个氨基酸组成的多肽,分子质量约为2.9178×104道尔顿。与其它颗粒体病毒颗粒体蛋白基因进行同源性比较,核苷酸同源性都在70%以上,氨基酸同源性都在75%以上,最高的为大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV),核苷酸同源性为97%,氨基酸同源性为98%。构建了重组表达载体pet-28a-Gran,IPTG诱导后经SDS-PAGE检测,表明获得了颗粒体蛋白基因在大肠杆菌BL21中的特异表达。     

体外培养周期型马来丝虫感染期幼虫

关于体外培养周期型马来丝虫(periodic Brugia malayi)感染期幼虫(L_3),近年来国内外有一些报道,系应用含哺乳动物组织细胞系或原代细胞的培养系统培养彭亨丝虫和马来丝虫L_3,可使其幼虫发育至Ⅳ期蚴(L-4)或早期成虫(Chen and Howells,1979; Wong et al.,1982;Mak et al.,1983;郑惠君等,1984)。但未见应用含人体组织细胞系的体外培养系统培养布鲁属丝虫L_3的报道。本研究     

油桐尺蠖血球细胞系的建立及其对多角体病毒敏感性的测定

建立了稳定生长的油桐尺蠖幼虫血球细胞系,称为WIV-BS-02细胞系,原代培养始于1981年4月,至今已传至第83代,细胞系的群体倍增时间为48～72小时,形状有圆形和梭形两种,具有鳞翅目昆虫的典型染鱼体。比较了6种培养液和3种培养温度对细胞生长的影响,观察了同源油桐尺蠖核型多角体病毒感染后,光学显微镜下的细胞病理变化及电镜下病毒的形态发生,测定了细胞培养物对油桐尺蠖的体外培养细胞和幼虫的感染性。     

茼蒿精油的拒食活性和化学组分

茼蒿(chrysanthemum segetum L.)精油显示对小菜粉蝶幼虫(Pieris Rapae L.)有拒食活住,籍助于色谱-质谱和色谱-红外光谱技术,对精油中的有效馏份进行了分析,鉴出了包括芳樟醇,丁香酚,苯酚,对-甲苯酚等化合物。     

国外应用病毒杀虫剂概况

近十年来,国际上已有五种昆虫病毒作为商品生产,供应防治害虫,为少用化学农药、减轻环境污染提供了有利条件。这五种病毒都是核多角体病毒(Nec-leopolyhedrosis virus),简称“NPV”。核多角体病毒是由被感染昆虫的细胞核内自己复制的,所含病毒颗粒是嵌入一种多角形的蛋白质模型或内含体中,颗粒含有核酸,由核酸而引发病毒病。 大约有83％的病毒是从鳞翅目昆虫的幼虫分离而得。幼虫吃进有病毒的植物,在胃里溶解几秒钟后病毒颗粒就释放出来,穿过肠壁进入受感染细胞的核,进行复制,直至幼虫病死。 据报道,从夜蛾科实夜蛾属(HeliothiS)昆虫提取     

菜粉蝶幼虫S型生长曲线及其拐点的初步研究

菜粉蝶Artogeia rapae(L.)是十字花科蔬菜最重要的害虫之一。国内关于该虫的研究颇多。僵至今尚未见报道其幼虫生长曲线和拐点。本文以衡阳市第一代菜粉蝶幼虫为材料,对其“S”型生长曲线进行了初步研究,并求得其拐点位于第5龄初期,亦即药剂防治的最佳时期。 材料与方法 1.试虫 1986年3月自田间甘蓝上采得第一代菜粉蝶卵,置于室内孵化,幼虫用新鲜甘蓝叶单饲。将同一天孵化的幼虫分成两组,分别作为称重和观察历期试虫。供称重用的幼虫,自孵化之日起,每天均在同一时刻称重1次,直至化蛹,计3批112头。     

菜白蝶非包涵体病毒感染叙利亚金地鼠肾上皮细胞系(BHK_p 925)的研究

昆虫病毒感染体外培养的哺乳动物细胞,获得成功的有大蜡螟(Galleria mellonella)浓核病毒(Densonucleosis Virus)感染小白鼠L细胞和大白鼠胚成纤维细胞,家蚕核型多角体病毒的DNA感染人羊膜FL细胞。我们从罹病死亡的菜白蝶(Pieris rapas L.)虫体中分离到的一株非包涵体病毒感染BHKp 925上皮细     

胚胎神经细胞的培养方法与应用

体外胚胎神经细胞培养与在体神经细胞在神经发育生物学的研究中相辅相承，不断推动神经科学的发展。神经细胞原代培养涉及神经细胞的分离纯化、培养基的成分及观测方法等。本文对国内外近年来胚胎神经细胞的培养方法及应用进行了简单的综述。