磷脂酶A2激活对中性粒细胞趋化和粘附的作用

外源性磷脂酶A2(Ⅰ型PLA2)和钙离子载体(A23187)可明显促进中性粒细胞对TNF,FMLP的趋化及同玻璃球的粘附.PLA2抑制剂二溴苯乙酮(PBPB)和PLA2抗体对PLA2诱发的趋化和粘附具有浓度相关的抑制作用,而对A23187的相同作用并无影响.提示PBPB和PLA2抗体可能通过直接同PLA2作用而抑制PMN趋化和粘附,A23187诱导的促趋化及粘附作用可能不同于PLA2.     

磷脂酶A2对中性粒细胞趋化和粘附的影响

胰源性１４×１０￣３ｕ磷脂酶Ａ＿２（ＰＬＡ＿２）在体外同大鼠中性粒细胞（ＰＭＮ）培养６０ｍｉｎ后,细胞对ＴＮＦ趋化增强,培养１０ｍｉｎ后上清液中血栓素（ＴＸＢ＿２）含量比正常增高（Ｐ＜０．０１）。前列环素（ＰＧＩ＿２）含量不变。ＰＬＡ＿２激动剂Ａ２３１８７也能显著加强中性粒细胞对ＴＮＦ的趋化,并伴有ＴＸＢ＿２释放增多（Ｐ＜０．０１）。此外,ＰＬＡ＿２和Ａ２３１８７还显著增强ＰＭＮ对玻璃珠的粘附活性。使用ＰＬＡ＿２抑制剂二溴苯乙酮（ＰＢＰＢ）和ＰＬＡ＿２多克隆抗体可抑制外源性ＰＬＡ＿２对ＰＭＮ趋化和粘附的增强作用,但对Ａ２３１８７的调节作用无效。以上结果表明ＰＬＡ＿２激活及其代谢产物可能介导ＰＭＮ趋化和粘附作用。     

磷脂酶A2活性对中性粒细胞凋亡的影响

细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种机体保持内环境稳定的特殊方式。正常情况下,中性粒细胞（ＰＭＮ）绝大部分通过凋亡而被清除,避免因坏死而造成组织损伤。我们在研究磷脂酶２（ＰＬＡ２）激活介导创伤和感染的机理时,发现其活性介导ＴＮＦ对ＰＭＮ的激发作用。其它证据也显示ＰＬＡ２及其代谢产物在细胞凋亡过程中发挥作用,我们推测ＰＬＡ２活性对ＰＭＮ凋亡或坏死的影响,可能是控制炎症反应的主要途径。这方面的工作尚少见,本文初步报告如下。１　材料和方法（１）材料和主要试剂　雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠由本院动物中心提供。Ｐ…     

钙离子对江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2溶液构象的研究

用荧光光谱方法研究了钙离子对江浙蝮蛇毒中性磷脂酶Ａ２（简称ＮＰＬＡ２）构象的影响。结果表明,Ｃａ２＋能使酶中唯一的色氨酸残基的荧光增强：只有在Ｃａ２＋存在时,底物卵磷脂才明显改变酶分子中Ｔｒｐ周围的环境,使其光谱的兰移达７ｎｍ,荧光增强约一倍：酶中唯一的Ｈｉｓ残基被修饰以后,则没有上述两种现象发生;结合在ＮＰＬＡ２上的ｂｉｓＡＮＳ的荧光强度,随Ｃａ２＋浓度的增加而增强,提示Ｃａ２＋对ｂｉｓ－ＡＮＳ结合区域的构象有明显影响。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2的荧光光谱学研究

用荧光光谱方法研究了江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2(NPLA_2).研究结果表明NPLA_2分子中确实含有一个色氨酸残基.且位于NPLA_2分子表面;我们还发现荧光探针bis-ANS在NPLA_2分子上有一结合区,其解离平衡常数为11.6μmol/L ;利用结合了的bis-ANS与NPLA_2分子中色氨酸残基之间的能量传递计算出两者之间的距离为17.7(?).     

磷脂酶A2的应用

磷脂酶Ａ2 (ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ2 ,ＰＬＡ2 ,ＥＣ 3 .1 .1 .4)即磷脂 2 酰基水解酶 ,是专一催化 3 Ｓｎ 磷酸甘油脂Ｃ 2位酯键的水解反应的酶 ,酶解产物为溶血磷脂和脂肪酸。ＰＬＡ2 不仅在生物体内具有很重要的生理功能 ,而且具有很高的应用价值 ,可广泛地应用在科学研究、磷脂改性、油脂精练、饲料添加剂、医疗等诸多方面。1 .用ＰＬＡ2 研究酶学、脂代谢和生物膜结构与功能ＰＬＡ2 (尤其是外分泌型的ＰＬＡ2 )的分子量较小 ,一般在 1 0～ 2 0ｋＤ之间 ,相对而言 ,结构较为简单。在蛇毒中 ,存在许多ＰＬＡ2 的同工酶 ,它们之…     

江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2的结构模拟研究

从我国江浙蝮蛇蛇毒纯化出的中性磷脂酶Ａ２（ＡＴＸ）不仅具有酶催化活性,还具有突触前神经毒性。用图象模拟和能量极小化及分子动力学方法,根据美国西部菱斑响尾蛇（Ｃ．ａｔｒｏｘ）蛇毒ＰＬＡ２的晶体结构构建了ＡＴＸ二体和单体模型,它们的基本折叠与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ２是很相似的。能量计算表明,二体的总势能比单体相应能量的两倍低２６３．６ｋｃａｌ／ｍｏｌ;ＡＴＸ二体模型中两亚基间的作用与Ｃ．ａｔｒｏｘＰＬＡ     

肿瘤坏死因子的研究进展

<正>肿瘤坏死因子(TNF或TNF-α)的研究进展日新月异,与数年前相比可谓面目一新,当初仅了解TNF的抗肿瘤活性,但后来发现TNF对多种正常细胞具有广泛的生物学活性。其生物学活性不仅与结构类似,结合同一种受体的淋巴毒素(LT或TNF-β)相近,且与结构迥异、结合不同细胞受体的白细胞介素1(IL-1)具有广泛的功能重叠性。 TNF及其分泌调节 TNF由分子量17kd的亚单位构成,依动物种类及分离方法的不同,可为2聚体,3聚体或4聚体,还不清楚多聚体是否为体现生物学活性所必需。人TNF为非糖基化蛋白,而几乎所有动物的TNF都为糖蛋白。 小鼠TNF分子由156个氨酸残基构成。家兔TNF在N端缺2残基,为154个残基。而人TNF由于在第73位插入一组氨酸,由157个氨酸残基构成。     

磷脂酶A2活力与急性缺氧性肺动脉高压关系的探讨

通过动物实验探讨磷脂酶Ａ２及相关炎性介质在急性缺氧性肺动脉高压形成中的作用。３０只ＳＤ大鼠随机分为三组;正常对照组,缺氧组及缺氧加地塞米松组。均测定肺动脉压;缺氧３０ｍｉｎ后,取静脉血肺组织测定ＰＬＡ２活力,血小板活化因子,前列腺素Ｅ２,血栓素Ｂ２。     

同种异体血管移植后肿瘤坏死因子表达的变化

目的探讨同种异体血管移植后移植血管和心肌肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor,TNF)表达的变化。方法取成年、雄性日本大白兔作为血管受者,新西兰大白兔为血管供者,进行颈动脉血管移植,通过免疫组织化学方法检测移植血管和心肌TNF表达的变化。结果自体原位移植组和液氮冷冻组TNF表达率低于新鲜移植组和抗生素处理组,新鲜移植组TNF表达率最高,与其它各组比较有显著性差异,P<0·05。血管移植后,心肌组织切片结果与血管移植组有类似结果:新鲜移植组心肌的TNF表达最高,与原位移植组和液氮冷冻组比较有显著性差异,P<0·05,而与抗生素处理组比较无显著差异性。结论液氮冷冻处理可降低移植血管和心肌TNF的产生;缺血再灌注损伤和/或免疫排斥反应能激发移植血管和全身各组织器官TNF的产生,从而造成移植血管的病理损害。     

以杆状病毒为载体表达可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体

从培养的HeLa细胞中提取总RNA,通过反转录PCR技术, 从该总RNA中扩增了约530 bp的shTNFR55基因的cDNA,将cDNA克隆至转移载体pAcGp67B的多角 体蛋白基因启动子的下游与转移载体构建成重组转移质粒pAcTNFR。pAcTNFR与杆状病毒AcNP V的DNA共转染昆虫细胞sf9,通过同源重组形成含有shTNFR55基因的重组病毒。经空斑分析 和DNA斑点杂交获得了纯化的重组病毒AcNPVTNFR。采用肿瘤坏死因子(TNF)敏感的L929细 胞检测表达产物的生物学活性。结果表明表达产物可以中和TNF对L929的细胞毒性。蛋白配 基印迹(Ligand blot)分析表明表达产物分子量约在20～25kD之间,有三条带。     

肿瘤坏死因子介导病理性氧供应依赖性的实验研究

本研究采用抗肿瘤坏死因子单克隆抗体预先保护实验动物,用ＥＬＩＳＡ法测定血浆中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）浓度,藉以考察ＴＮＦ在内毒素诱导病理性氧供应依赖性（ＰＯＳＤ）模型中是否起介导作用。结果表明,（１）ＴＮＦ浓度内毒素组显著高于对照组,抗体保护组显著低于无关抗体组（Ｐ＜０．０１）。（２）在Ｖｏ＿２－Ｄｏ＿２关系中,抗体保护组可清楚地分为依赖段和非依赖段两部分,其临界氧运输量和合并氧提取率分别为１０．８０±３２１ｍｌ·ｍｉｎ￣（－１）·ｋｇ￣（－１）和０．６９０,而无关抗体组则只有依赖段,合并氧提取率为０．４０８,显著低于抗体保护组。从而证明,ＴＮＦ在内毒素所致的ＰＯＳＤ现象中起介导作用。     

利用带有原核增强子样序列的新型载体在大肠杆菌中高效表达人α肿瘤坏死因子

将去除信号肽的人肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)cDNA插入到带有原核增强子样序列Px的新型表达载体pBV320中,使TNF cDNA 5′端直接置于大肠杆菌trp启动子下游,采用37℃恒温培养,使TNF在大肠杆菌中获得了高效表达,表达活性达1.35(±0.17)×10~6U/L菌液。表达的TNF-α对L929细胞的毒性作用可被抗人肿瘤坏死因子-α的单克隆抗体所中和。表达菌裂解液作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示有一条分子量与TNF分子量吻合、约为17000道尔顿的蛋白带。利用DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Sephacryl S-200凝胶过滤对上述重组人TNF-α进行纯化,获得电泳纯产品,比活性为1.48×10~6U/mg。     

中华眼镜蛇心脏毒素和磷脂酶A_2引起小白鼠骨骼肌损伤的超微结构研究

中华眼镜蛇(Naja naja atra)的三个单一组份:心脏毒素Ⅰ、心脏毒素Ⅱ和磷脂酶A_2(称简为CTⅠ,CIⅡ和PhA_2),两个混和组份:CTⅠ-PhA_2和CTⅡ-PhA_2,分别注射到小白鼠后肢小腿胫骨前肌内,观察和研究小白鼠骨骼肌损伤的超微结构变化。这三个毒性组份均能造成小白鼠骨骼肌肌纤维的明显损伤和坏死,肌质膜、核膜和线粒体膜损伤,肌丝溶解而形成各种絮状游离坏死小块;肌小管系统消失;线粒体肿胀并形成含有嵴碎片的空泡;肌质网溶解; 肌纤维内出现有大量囊泡状结构物。整个肌纤维变成一种含有各种细胞器残骸并由破损肌质膜所包围的低电子密度破损细胞。五个组份所形成的超微结构损伤变化并无显著差异,CTⅠ-PhA_2或CTⅡ-PhA_2这两个混合组份比相应的单一组份的损伤似乎更严重些。     

内源性NO在LPS和TNFα诱导离体兔肺动脉反应性变化中 …

目的：探讨脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ,ＴＮＦα）所致离体肺动脉反应性张力变化与肺动脉源性一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｅ,ＮＯ）的关系。方法：离体兔肺动脉环用ＬＰＳ＋ＴＮＦα、ＬＰＳ或深剂孵育２ｈ和６ｈ,检测肺动脉对乙酰胆碱（ＡＣｈ）、硝普钠（ＳＮＰ）和苯肾上腺素（ＰＥ）的累积剂量反应,以及一氧化氮     

PTTG和b-FGF在宫颈病变组织中的表达及意义

目的探讨人垂体肿瘤转化基因(human pituitary tumor transforming gene,PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)在不同程度宫颈病变组织中的表达情况,以及两者的相关性。方法通过免疫组织化学SP法,检测PTTG和b-FGF在慢性宫颈炎(15例)、宫颈上皮内瘤变(43例,其中CINⅠ级17例、CINⅡ级14例、CINⅢ级12例)及宫颈鳞癌(30例)组织中的表达。结果PTTG和b-FGF在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达呈增高趋势。尤其在宫颈癌中的表达明显高于在慢性宫颈炎中的表达(P<0.05)。但两者在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级中的表达均无统计学意义(P>0.05)。PTTG和b-FGF在宫颈癌中的表达呈正相关(r=0.923,P<0.05)。结论PTTG在宫颈癌组织中高表达,可能是宫颈癌的一个分子标志。由PTTG和b-FGF的相关性推测PTTG可能通过上调b-FGF而参与了肿瘤的发生、发展过程。     

转录因子E2F1和PCNA在分离、培养的人视网膜色素上皮细胞中的表达及意义

为探讨转录因子 E2 F1及增殖细胞核抗原 (PCN A)在增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)中的作用 ,采用 SABC免疫细胞化学法检测转录因子 E2 F1和 PCNA在无血清组及 2 0 %血清组培养的人视网膜色素上皮细胞 (RPE)中的表达。结果显示在无血清组中 ,转录因子 E2 F1表达的阳性率为 2 .4%± 0 .2 5 % ,而未见 PCNA表达 ;在 2 0 %血清组中 ,E2 F1及 PCNA的表达阳性率分别为 2 9.1%± 0 .71%和 48.6 %± 1.13%。说明 E2 F1和 PCNA蛋白的表达取决于人 RPE细胞的生长状态 ,在增殖活跃的细胞中表达增高 ;转录因子 E2 F1调控人 RPE细胞中 PCNA蛋白的表达。提示转录因子 E2 F1调控人 RPE细胞的细胞周期进展 ,在 PVR的形成中也发挥着关键性的作用