促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经元的保护作用及P53蛋白的表达

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对大鼠局灶性脑缺血再灌注神经细胞的保护作用.方法:60只SD大鼠随机分为缺血再灌注Epo治疗组(又分为高剂量A组、低剂量B组)、缺血再灌注组(C组)及假手术组(D组),采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分,TTC染色法观察线栓侧的梗死体积,并检测脑组织含水量的变化,HE染色法观察脑缺血再灌注后脑组织的病理变化,TUNEL法观察神经细胞凋亡情况,western blot法观察p53蛋白的表达变化.结果:对照组比较,大鼠脑缺血再灌注后出现不同程度的脑梗死,24h后缺血中心区及周围区均可见到p53蛋白表达.缺血再灌注6h内给予Epo可显著改善大鼠神经功能评分,减少梗死体积及脑组织含水量,减轻病理学变化及神经细胞凋亡.结论:Epo通过调控神经细胞凋亡、改善缺血再灌注损伤而发挥脑保护作用,P53蛋白参与缺血再灌注后神经细胞凋亡机制.     

IGF-1对不同年龄缺血性脑损伤大鼠神经发生的影响

目的:检测胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对青年和老年大鼠局灶脑缺血后神经发生及其后细胞生存的影响.方法:健康雄性SD青年鼠(3-4个月)和老年鼠(1年)随机分组,侧脑室注入IGF-1,1天后进行大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO),对照组由生理盐水取代.采用BrdU标记方法鉴定MCAO后7d和28d的增殖细胞.BrdU于MCAO后第6d由腹腔注入.免疫组化法检测7天后BrdU、PSA-NCAM标记细胞和28天后BrdU、BrdU/MAP2双标细胞.结果:老年组中BrdU阳性细胞的数目7d后较对照组增加5.1倍;青年纽中BrdU阳性细胞的数目7d后较对照组增加5.5倍.28d后,BrdU阳性细胞的残留率在青年IGF-1处理组和老年IGF-1处理组中分别是79.2%和75.1%,分别相对于对照组的77.1%和52.3%.老年组中PSA-NCAM阳性细胞的数目7d后较对照组增加3.2倍;青年组中PSA-NCAM阳性细胞的数目7d后较对照组增加3.7倍.28d后,BrdU/MAP2阳性细胞在青年IGF-1处理组较对照组增加7.0倍,在老年IGF-1处理组较对照组增加4.9倍.结论:此结果提示局部应用IGF-1进行缺血前预处理,在青年鼠和老年鼠中均能诱导神经发生,且在老年鼠中能明显提高神经发生后的增殖细胞的生存率和向神经元分化的能力.这一研究结果将有助于研究IGF-1在中老年脑损伤病人中的治疗性应用.     

IGF-1对缺血性脑损伤大鼠脑内神经发生的影响

目的:建立大鼠单侧局灶脑缺血模型,观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对局灶脑缺血后的鼠脑神经发生及增殖后细胞生存的影响.方法:用健康雄性SD大鼠建立大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分成假手术组,缺血对照组和IGF-1治疗组.各组再按不同的治疗时间分为7d、14d、28d、42d组.免疫组化法观察BrdU、PSA-NCAM的变化,免疫双标法观察BrdU/PSA-NCAM、BrdU/MAP2和BrdU/GFAP的共同表达变化.结果:BrdU标记细胞和PSA-NCAM标记细胞计数均在缺血后第7d最多,分别是缺血对照组的4.0倍和1.8倍,是假手术组的9.9倍和5.4倍.BrdU和PSA-NCAM双标细胞在缺血发生后双侧SVZ和DG区可以检测到,于第7d计数最多,之后逐渐降低;而BrdU和MAP2以及BrdU和GFAP双标细胞却从第14d开始逐渐增多,直到第42d.随着BrdU/PSA-NCAM双标阳性表达的逐渐降低,BrdU/MAP2双标阳性表达逐渐增高,呈现此消彼涨的变化.结论:IGF-1侧脑室注射后,在早期(7d内)诱导了缺血性脑损伤后神经细胞的增殖;在中期(7d-14d)诱导了新生细胞的迁移;在后期(14d后)伴随着迁移的进行新生细胞逐渐发生了分化.     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注后脑内NGF和bFGF表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注后脑组织神经生长因子(NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达的影响.方法:采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型.实验动物随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、模型 PNS治疗组和模型 尼莫地平治疗组.用免疫组织化学方法检测脑内皮质、海马等区域NGF和bFGF蛋白表达.结果:缺血2h再灌注46h后,脑内海马和皮质区的NGF表达降低,PNS能显著上调海马、皮质区及丘脑区域NGF的表达.缺血2h再灌注46h后,bFGF的表达各脑区无明显差异;但PNS能显著上调缺血再灌注损伤后胼胝体区域内bFGF的表达.结论:局灶性脑缺血再灌注后,PNS能上调缺血脑组织内NGF和bFGF表达,尤其是促进了NGF的表达,这可能是PNS对脑缺血后损伤神经元的保护机制之一.     

高强度间歇运动对脑梗死后大鼠的脑保护作用及HDAC6表达的影响

为了考察高强度间歇运动(HIIE)对脑梗死后大鼠的脑保护作用及组蛋白去乙酰化酶6 (HDAC6)表达的影响。本研究将60只SD大鼠随机分为3组,假手术组、大脑中动脉闭塞模型组和HIIE组,每组20只。HIIE组大鼠在建模48 h后进行4周的高强度间歇运动,其他组大鼠不进行运动。通过神经损伤评分来评价大鼠神经功能,TTC染色检测梗死面积,TUNEL染色测定脑组织的细胞凋亡,RT-PCR和Western blotting检测大鼠海马组织中HDAC6、TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA和蛋白表达。研究发现,高强度间歇运动后,HIIE组的神经损伤评分显著低于模型组(p<0.05)。TTC染色显示,HIIE组的梗死面积比例显著低于模型组(p<0.05)。TUNEL染色显示,HIIE组的海马神经细胞凋亡数显著低于模型组(p<0.05)。RT-PCR和Western blotting结果显示,HIIE组的HDAC6、TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA和蛋白表达水平均显著低于模型组(p<0.05)。本研究表明,高强度间歇运动可显著改善脑梗死大鼠的神经功能,降低脑梗死面积,抑制海马神经细胞凋亡。高强度间歇运动的神经保护作用机制可能与抑制HDAC6有关。     

Ephrin-B2促进大鼠局灶脑缺血再灌注后VEGF表达及血管新生

目的:探讨Ephrin-B2对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中血管新生的调节作用及其可能的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组及、缺血再灌注组及Ephrin-B2干预组,后两组再分为4天、7天、14天、28天亚组;线栓法制备局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型;改良神经功能评分(modified neurological severity scores mNSS)评分法对各时间点模型进行评分;Western blot及荧光定量PCR检测缺血脑组织中血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor VEGF)的表达;以免疫荧光双标法定位VEGF表达的细胞类型;以CD31+BrdU计数缺血半暗带中新生微血管密度(microvessel densityMVD)。结果:Ephrin-B2干预组与缺血再灌注组各时间点亚组比较,新生微血管密度测定计数较缺血再灌注组均显著增加(P0.05),神经功能评分均显著降低(P0.05),VEGF mRNA水平及蛋白表达水平均显著增加(P0.05),VEGF主要表达于CD31阳性的血管内皮细胞。结论:Ephrin-B2通过上调VEGF的表达促进脑缺血再灌注后缺血半暗带血管新生,从而促进神经功能缺失的修复。     

急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤大鼠海马GFAP的表达

目的:观察急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤后大鼠海马星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化.方法:健康成年雄性SD大鼠72只,随即机分为4组:假手术组(N组)、急性酒精中毒组(E组)、中度创伤性脑损伤组(T组)和急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤组(E T组).腹腔注射酒精(2.5g/kg)致使大鼠急性酒精中毒,2h后,按改进的Feeney's自由落体硬膜外撞击方法使其合并中度创伤性脑损伤(600g.cm).各组动物术后6h、24h和48h处死.中性红染色观察海马CA1区神经元形态学改变;用免疫组织化学的方法检测海马CA1区GFAP表达变化.结果:与N组和E组相比,T组和E T组GFAP表达显著增多(P＜0.01).术后6h和24h,T组GFAP表达显著高于E T组(P＜0.05);T组和E T组的海马CA1区神经元细胞出现胞体肿胀,排列散乱,但T组上述形态学改变较E T组明显.结论:急性酒精中毒合并中度创伤性脑损伤的早期可通过减少GFAP的表达,抑制星形胶质细胞激活,减少炎症反应发挥保护作用.     

Protein-Energy Malnutrition Developing after Global Brain Ischemia Induces an Atypical Acute-Phase Response and Hinders Expression of GAP-43

Protein-energy malnutrition (PEM) is a common post-stroke problem. PEM can independently induce a systemic acute-phase response, and pre-existing malnutrition can exacerbate neuroinflammation induced by brain ischemia. In contrast, the effects of PEM developing in the post-ischemic period have not been studied. Since excessive inflammation can impede brain remodeling, we investigated the effects of post-ischemic malnutrition on neuroinflammation, the acute-phase reaction, and neuroplasticity-related proteins. Male, Sprague-Dawley rats were exposed to global forebrain ischemia using the 2-vessel occlusion model or sham surgery. The sham rats were assigned to control diet (18% protein) on day 3 after surgery, whereas the rats exposed to global ischemia were assigned to either control diet or a low protein (PEM, 2% protein) diet. Post-ischemic PEM decreased growth associated protein-43, synaptophysin and synaptosomal-associated protein-25 immunofluorescence within the hippocampal CA3 mossy fiber terminals on day 21, whereas the glial response in the hippocampal CA1 and CA3 subregions was unaltered by PEM. No systemic acute-phase reaction attributable to global ischemia was detected in control diet-fed rats, as reflected by serum concentrations of alpha-2-macroglobulin, alpha-1-acid glycoprotein, haptoglobin, and albumin. Acute exposure to the PEM regimen after global brain ischemia caused an atypical acute-phase response. PEM decreased the serum concentrations of albumin and haptoglobin on day 5, with the decreases sustained to day 21. Serum alpha-2-macroglobulin concentrations were significantly higher in malnourished rats on day 21. This provides the first direct evidence that PEM developing after brain ischemia exerts wide-ranging effects on mechanisms important to stroke recovery.     

离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响

 分析离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达的影响 ,并从中筛选正加速度 (forwardaccel eration ,+Gz)高耐力相关基因 .雄性SD大鼠在动物离心机上训练 ,刺激G值从 + 7Gz～ + 12Gz ,每天增加 + 0 5Gz ,第 12d重复 + 12Gz刺激 ,第 13d在离心机上通过测定动物的 +Gz耐力筛选出高耐力动物 ,立即断头处死 ,取全脑和心脏组织 ,分离其mRNA .将此mRNA与未处理动物相应组织来源的mRNA进行抑制性消减杂交 (SSH) ,获得的相关EST(expressionsequencetag ,EST)进行序列测定 ,并经BLAST进行计算机分析 .结果获得 88条与离心机训练相关的EST ,其中 4 4条为已知基因的部分序列 ,4 4条为未知基因的部分序列 .提示离心机训练对大鼠脑和心脏组织基因表达有影响 ;这些相关基因可能与 +Gz高耐力的产生有关     

Modulation of RAGE Isoforms Expression in the Brain and Plasma of Rats Exposed to Transient Focal Cerebral Ischemia

Activation of RAGE (receptor for advanced glycation endproducts) and of its subtypes may play a role in neuronal damage and neuroinflammation associated with brain ischemia, though the underlying mechanisms remain unclear. In this study, we have examined by Western blotting the expression of RAGE isoforms in the cerebral cortex and striatum of Wistar rats subjected to transient (1 or 2 h) middle cerebral artery occlusion (tMCAo). The findings show that the full-length RAGE (~50 kDa) and its isoforms in the 26-43 kDa range are significantly decreased in the ischemic cortex, but not in the striatum, after 1 and 2 h tMCAo when compared to the sham group. By contrast, in the striatum, ischemia-reperfusion injury caused a significant increase of full-length RAGE and its isoforms in the 72-100 kDa range. We also investigated the soluble form of RAGE, which was significantly decreased in the plasma of rats subjected to transient or permanent MCAo. In conclusion, the present data demonstrate that regional brain expression of RAGE is differentially affected by tMCAo in rat. These modifications are accompanied by a decrease in the plasma levels of soluble RAGE, thereby suggesting a potential role for soluble RAGE as a peripheral biomarker of focal ischemia.     

大鼠局灶性脑缺血后KCl诱导皮层扩散性抑制的体光学成像

采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型,在额叶皮层用KCl诱导产生皮层扩散性抑制(corticalspreadingdepression,CSD)。MCAO4h后,利用550nm内源信号光学成像(opticalintrin-sicsignalimaging,OISI)监测局灶性脑缺血后大鼠顶-枕叶皮层内源光信号变化。成像1h内观测到一系列诱导CSD波(14±3次),CSD波局限于顶-枕叶皮层中央区域扩展,以光强的显著下降为特征;而旁侧区域光强无明显改变,不具备CSD波特征,表明CSD波未传播到该区域。随后TTC染色证明上述旁侧区域已经梗死。实验表明:MCAO后4h,皮层区域旁侧部分会梗死;CSD波的OIS变化可用来区分缺血梗死区和外周供血较为完整区域(未梗死区)。     

复健片对大鼠脑梗死后不同时间点Nogo-A表达的影响

目的观察复健片在不同时间点对脑梗死大鼠脑组织Nogo-A表达的影响,探讨其促进神经发生的作用机制。方法240只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组共四个大组,并根据脑梗死病程每组又分为3d、1周、2周、4周、6周共5个亚组,每个亚组动物数为12只。用改良的LongaEZ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型,药物组灌胃给予复健片水溶液,余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水。用免疫组织化学法观察模型大鼠梗死周边区脑组织Nogo-A的表达。结果模型组大鼠脑内的Nogo-A在梗死后即开始表达,逐渐增高,2周时达到高峰,第6周时还处于高表达状态,明显高于正常对照组。3d时药物组中Nogo-A的表达与模型组比较差异无显著性(P0.05),其余各药物组中Nogo-A表达与模型组比较均有非常显著性差异(P0.01)。结论复健片可抑制Nogo-A的表达,从而促进神经再生。