人血浆蛋白连续沉淀分离技术试验

目的:考察人血浆蛋白连续流沉淀分离装置的分离性能。方法:将传统的人血浆蛋白低温乙醇批处理法改进为连续沉淀分离法,并设计了一套连续沉淀分离装置。采用人血浆低温乙醇分离的组分FⅠ Ⅱ Ⅲ沉淀为试验物料,将蛋白液与试剂(乙醇和缓冲液)在特制的混合器内与循环母液迅速混合,形成连续沉淀分离过程。结果:实现了人血浆蛋白的连续沉淀分离,所得蛋白组分FⅡ中的IgG含量为5.0～8.4g/L,纯度达94%～97.4%。结论:该装置能够实现人血浆蛋白的连续分离,须进一步的试验和工艺优化。     

应用经典热乙醇法从组分IV沉淀中制备白蛋白

将Ｃｏｈｎ氏６法低温乙醇分离人血浆中的组分ＩＶ（ＦＩＶ）沉淀,溶解于注射用水中,加入９５％乙醇后使乙醇浓度为９％,经加温、过滤及超滤制得白蛋白。每公斤ＦＩＶ沉淀可制得白蛋白５７．８ｇ。     

D.血浆组分的检定要求

<正>1.引言 对于白蛋白,血浆蛋白组分,免疫球蛋白和凝血因子浓缩物的许多共同的要求,在3-11节中已予考虑。然而,为明确起见,将凝血因子浓缩物的一些特殊要求纳入各节是适宜的。 2.术语 粘制原液材料(BulK Purified materia)由合并原材料经分级分离制备的粉状或液体材料。     

国内外原料血浆综合利用水平的比较

随着近年来血液制品的快速发展,加快了对原料血浆的需求,血液制品行业普遍出现原料血浆供应不足的紧张局面。同时,血液制品安全事件在各国的相继发生,各国政府加强了监管力度,企业的兼并重组行动升级,目前全球仅剩不到52家血液制品企业(含中国32家),国内的投浆量不及国外血液制品企业一家的投浆量,且国内生产企业规模小、产品单一、质量及安全性不及国外的产品。本文就其目前国内外现状、研发能力、政策引导等方面,对国内外原料血浆生产人血浆蛋白制品综合利用水平作一比较,并就其中的问题进行如何改进提出可能的建议。     

沉淀敲出法快速发现霍山产铁皮石斛生物碱及其组分抗氧化活性在线测定

为了给霍山产铁皮石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据,在预实验基础上,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基清除活性评价平台,HPLC-UV-CL联用在线测定了铁皮石斛生物碱部位各组分清除自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组分,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定铁皮石斛的生物碱组分。结果表明,在本实验条件下,霍山产铁皮石斛中检出的5种生物碱中有4种可降低鲁米诺-双氧水发光体系的发光值。HPLC-UV-CL可用于铁皮石斛生物碱清除自由基活性快速测定。实验结果可为铁皮石斛质量控制、抗氧化活性成分定向分离的研究提供依据。     

人血浆LCAT活力测定方法的探讨——自身底物法

本文介绍了一种简单快速的人血浆LCAT活力测定方法。本方法以血浆本身为底物,用酶法测定游离胆固醇的降低来反映LCAT活力大小。在37℃反应60分钟,LCAT活性可达100nmole/ml/hr左右。方法测定的灵敏度较高,重复性好。     

用氧化亚铜从人发水解液中沉淀胱氨酸的研究

用氧化亚铜沉淀毛发水解液中的胱氨酸 ,其沉淀率最高可达 90 %左右。沉淀剂的用量 ,溶液的pH值及沉淀时水用量对沉淀效率有影响。通过实验确定了氧化亚铜沉淀毛发水解液中胱氨酸的最佳操作条件。     

人血浆α_2巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义. 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M.此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述.国内这     

动物的毛与人发角蛋白组分的比较研究

本文用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对10科18种50份动物毛与人发进行了角蛋白组分分析。结果证实,动物的毛与人发角蛋白组分的主要差异在<18.500低分子量区域;不同种属的动物毛角蛋白组分也存在明显差异;大熊猫毛的角蛋白组分与小熊猫和黑熊的相比有显著不同。不同种属动物毛角蛋白组分的差异对动物分类学研究能提供有参考价值的实验依据。     

植物细胞表面蛋白的研究——Ⅳ 烟草细胞表面蛋白的盐溶性组分是部分质膜蛋白组分的外延

用EDTA和某些去垢剂在有0.15MNaCl存在的条件下提取烟草细胞表面蛋白,认为含有5％正丁醇、10 mM Tris-HC1、0.15 MNaCl和0.1mM EDTA的溶液(pH 7.5,B-TBSE)是比SDS-TBSE更为理想的溶剂。过氧化物酶、酯酶、磷酸酶和ATP酶可直接进行测定。溶液中亚丁醇和EDTA的浓度对ATP酶无明显的抑制作用。 TCSP中的盐溶性组分(TSP)可以用生理盐水直接从细胞表面洗脱。质壁分离时TSP大部分都吸附在墨表面,休克时有过氧化物酶和部分ATP酶释放出来。在高渗条件下吸附在壁表面的酶,大部分部可用1％胆酸钠增溶。除上述盐水可洗脱的酶以外,细胞壁中尚有一部分可用1％Triton X-100、1 MNaC1洗脱的和碱溶性的蛋白(ASP)结合的过氧化物酶。当细胞由对数生长期中期进入后期时,TSP的过氧化物酶活性增加而酯酶活性下降。实验表明TSP是部分质膜蛋白组分的外延。 1 mMEDTA、5 mMMgCl_2或含有1mMEDTA的5％正丁醇都不能从细胞表面洗下ATP酶。但预先用E DTA、MgCl_2或含有EDTA的正丁醇洗涤细胞,则可阻碍或促进ATP酶的分离。而且EDTA的阻碍作用可被MgCl_2抵消。     

Ⅳ型胶原酶人基因工程抗体的研制

肿瘤组织内Ⅳ型胶原酶表达和活性升高与肿瘤转移密切相关 .抑制Ⅳ型胶原酶活性的物质能够有效地抑制或降低肿瘤的转移 .因此Ⅳ型胶原酶已成为恶性肿瘤辅助诊断和控制癌转移的标志分子之一 .利用噬菌体抗体展示技术 ,在人抗体库研究的基础上 ,成功地研制出一种Ⅳ型胶原酶特异人源单链抗体hCo4.该抗体主要是由抗体轻链可变区和重链可变区组成 ,分子量约为 2 7ku .ELISA和免疫印迹均证明hCo4能够与Ⅳ型胶原酶特异结合 ,是目前所报道的Ⅳ型胶原酶特异抗体中分子量最小的人基因工程抗体 .该抗体的亲和力与从分泌抗Ⅳ型胶原酶单抗的杂交瘤细胞制备的鼠源单链抗体亲和力相同 .它有可能成为一种研究Ⅳ型胶原酶与肿瘤转移相互关系的工具以及用于肿瘤免疫诊断和治疗 .     

人血浆α_2-巨球蛋白的研究概况

α_2-巨球蛋白(α_2-Macroglobulin,简称α_2-M)是人体中重要的血浆蛋白之一,能与多种蛋白水解酶反应,是血浆中含量最多的蛋白酶抑制剂。α_2-M通过对蛋白酶水解活性的调节而参与凝血、纤溶、激肽释放、炎症及免疫等一系列生理及病理过程。因此,α_2-M的研究对某些疾病发病机制的了解具有重要的意义。 1953年,Jacobsson首先报道了α_2-M。此后对其组成、结构、理化性质及生物活性等方面的研究都有较详细的报道和论述。国内这     

猪血浆制备研究—正交设计法

按照多因素多水平的正交实验结果,制备猪血浆的最佳条件是猪血与8％柠檬酸三钠溶液体积比19:1,离心时间10分钟,转速1200转/分。用此条件制备的猪血浆与羊血浆进行对比试验,证明猪血浆可以用于肝素钠抗凝血效价测定。     

HPLC-MS/MS法快速测定人血浆中美利曲辛及生物等效性研究

目的:建立测定人血浆中关利曲辛浓度的高效液相串联质谱法(HPLC-MS/MS),用于氟哌噻吨美利曲辛片的生物等效性研究.方法:以Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6mm× 150mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈(含1%甲酸):0.02mo·L-1甲酸铵水溶液(80∶20,V∶),流速:0.8mL·min-1;柱温:40℃,以醋酸乙酯:二氯甲烷(4∶1,V∶V)为提取剂.样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对美利曲辛(m/z 292.2→232.2)和阿米替林(m/z 278.1-91.0)进行测定.结果:美利曲辛的高(50μg·L-1)、中(20μg·L-1)、低(0.5μg·L-1)3个浓度的平均回收率分别为97.53%、104.03%和106.87%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15%;分析方法的最低定量限为0.2μg·L-1.线性范围为:0.2～60μg·L-1,回归方程为:F=1.8691ρ+0.0555,r=0.9986(n=9),权重为1/ρ2.结论:该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究.     

伞形科中药的研究 Ⅳ.法落海素的结构

我们已报道了法落海(Angelica apaensis Shan et Yuan)的化学成份,但其中尚有香豆素(Ⅵ)的结构未确定。该成份经薄层层析于不同的溶剂系统中反复比较,证明为一含有两种成份的混合物,但在硅胶或氧化铝柱上很难加以分离,最后经高压液相层析[条件:吸附剂,PARTISIL-10;洗脱剂,丙酮:石油醚=15:85(V/V);流量,1毫升/分;压力,30公斤]得到分离。二种化合物的熔点分别为136—138℃(1)和143—145℃(2),经结构测定,证明(1)为已知成份pabulenol,(2)为一新的香豆素成份,命名为法落海素(apaensin)。结果如下:     

人Ⅳ型胶原的提纯及其抗血清制备

采用胃蛋白酶限制性消化,NaCl分级盐析,还原和烷基化反应,纤维素离子交换层析从人胎盘组织分离纯化Ⅳ型胶原.经SDS-PAGE电泳鉴定符合Ⅳ型胶原α肽链电泳带.用纯化的Ⅳ型胶原免疫兔制备出高效价的特异抗血清.     

人血浆载脂蛋白E的分离提纯

利用仅2.5h的不连续密度梯度超速离心,可自人血浆分离获得纯净的极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDL脱脂后,其可溶成分经Heparin-Sepharose CL-6B亲和层析柱,可分为低盐洗脱峰Ⅰ和高盐洗脱峰Ⅱ。峰Ⅱ经SDS-PAGE鉴定为单一染色带,测定其分子量为33 900。此即为纯净的人血浆载脂蛋白E,载脂蛋白E的分离提纯为制备其羊克隆抗体和进行血浆浓度及表型测定提供了有利条件。     

人肝二氢蝶啶还原酶的三个活性组分

本文测定了人肝二氢蝶啶还原酶三个活性组分(Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ)的动力学常数。对NADH来说,这三个组分几乎具有相同的Km值,对组分Ⅱ来说,二氢蝶啶还原酶对蝶啶的Km值顺序如下:醌型6,7一二甲基二氢蝶啶(qDMPH_2)>醌型6-甲基二氢蝶啶(q6MPH_2)>醌型生物喋呤(qBH_2)。以qDMPH_2为底物,组分Ⅰ和Ⅱ的Km值大约比组分Ⅲ的Km值高2.5倍。所有三个组分具有不同的Vmax值,因而催化效应也不相同。每一个组分的SDS凝胶电泳均为单一谱带,相当于分子量26kD亚基。这些结果告诉我们,不同组分的DHPR在结构上有某种联系但催化效应却有差别。