无偿献血者ALT异常与戊型肝炎病毒感染的关系

目的 了解无偿献血者ALT异常（按血站标准,以大于25赖氏单位为异常）与戊型肝炎病毒感染的关系。方法 对萧山地区2004年8～11月无偿献血者中,ALT异常的102例血清标本,进行抗-HEV IgM抗体检测;同时对照检测450份ALT正常的无偿献血者血清标本。结果 在102例ALT异常血清中,抗-HEV IgM抗体阳性为6例,阳性率为5.88%,在450份ALT正常血清中,抗-HEV IgM抗体阳性为5例,阳性率为1.11%。结论 在无偿献血者ALT异常血清中,抗-HEV IgM抗体检出比例较高。     

Grp78/Bip介导戊型肝炎病毒衣壳蛋白对宿主细胞的吸附

目的 探讨Grp78/Bip在戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白进入宿主细胞过程中的作用。方法 采用pull-down和免疫共沉淀技术进一步验证p239与Grp78/Bip的相互作用;采用激光共聚焦显微镜技术检测p239与细胞膜表面Grp78/Bip共定位情况;采用原核表达纯化的Grp78/Bip蛋白封闭p239的Grp78/Bip结合位点,检测其阻断p239吸附细胞的效果。结果 p239与Grp78/Bip可以直接结合,而且这种结合是可逆的生理性结合;p239与Grp78/Bip在细胞膜上存在部分共定位;Grp78/Bip能部分阻断p239对肝细胞的吸附。结论 Grp78/Bip参与并介导HEV衣壳蛋白对宿主细胞的吸附。Objective To further investigate the interaction between recombinant hepatitis E virus (HEV) capsid protein p239 and Grp78/Bip and the role of Grp78/Bip in HEV penetration.Methods We utilized pull-down, immunoprecipitation and antibody blocking assays to examine the interaction between p239 and Grp78/Bip. Confocal microscopy was used to investigate the co-localization of these two proteins. Purified Grp78/Bip was used to block the attachment of p239 to host cells.Results p239 directly bound to Grp78/Bip and this binding was sensitive to ATP. Furthermore, antibody blocking results demonstrate that this interaction was indeed conformation-dependent. A partial co-localization of p239 and Grp/Bip was observed on the plasma membrane of HepG2 by confocal microscopy. Pre-incubation of Grp78/Bip with p239 significantly blocked the attachment of p239 to HepG2 cells.Conclusion Grp78/Bip participates in the attachment and/or entry of the HEV capsid protein to host cells. These results further contribute to the understanding of the entry mechanism of the hepatitis E virus after infection. if(document.getElementById('ChDivSummary').innerHTML!="){CutSpan('ChDivSummary',500);DisplaySpanDiv('ChDivSummary');ClearSummaryOnLoad('SummaryLinkChID','SummaryLinkEnID');}else{CutSpan('EnDivSummary',1000);DisplaySpanDiv('EnDivSummary');ClearSummaryOnLoad('SummaryLinkEnID','SummaryLinkChID');}     

不同人类免疫缺陷病毒感染途径群体中戊型肝炎病毒的流行情况

本研究旨在了解不同人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染途径群体中戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)抗体情况,探讨HEV疫苗接种的必要性。采集HIV感染者的血清或血浆,利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HEV IgG抗体、IgM抗体及抗原,荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测HEV核酸,Roche高纯化HIV-1核酸定量检测试剂盒(PCR荧光法)检测HIV感染者的HIV载量。比较分析不同HIV感染途径群体中HEV流行率的差别。结果显示,HIV感染者中HEV IgG抗体的阳性率为37.4%,静脉吸毒、成分献血和传播途径不明HIV感染群体的HEV IgG抗体阳性率分别为49.3%、39.5%和30.4%。HEV核酸荧光PCR检测结果均为阴性。3种HIV感染群体之间HEV IgG抗体阳性率差异无统计学意义(χ~2=2.978,P0.05)。HEV IgG阳性与阴性感染者之间HIV载量差异无统计学意义(P0.05)。结果提示,为保护HIV感染者免受HEV感染,应考虑接种HEV疫苗。     

重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白p239特异性吸附、侵入HepG2细胞并阻断野病毒对肝细胞的感染

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的戊型肝炎在临床症状上与甲肝相似,但病死率更高,妊娠晚期病死率可高达15%～25%[1].近年来,戊肝在世界各地暴发不断;而我国戊肝发病迅速增长,已经成为普遍流行、危害严重的疾病之一[2].     

pLKO.1-shSIRT7重组质粒的构建及其对人肝癌PLC/PRF/5细胞系增殖的影响

基于近年来研究发现sirtuin 7 (SIRT7)与肝癌密切相关,为此,本研究获取SIRT7基因敲除小鼠的肝细胞基因表达谱数据,在m RNA整体水平上分析SIRT7在肝细胞中的作用;另外,构建特异性下调人SIRT7基因的短发夹RNA (shRNA)表达质粒,并初步研究SIRT7基因沉默对肝癌PLC/RPF/5细胞系的影响。应用DAVID、GSEA、Cytoscape等生物信息学相关工具分析基因表达谱数据。基于pLKO.1空载质粒构建p LKO.1-sh SIRT7重组质粒并通过酶切和测序鉴定。使用Lipofectamin 2000转染重组质粒进入PLC/RPF/5细胞,并通过PCR和Western blotting验证SIRT7基因的沉默效率。通过MTT实验检测细胞增殖能力的改变和流式细胞术检测细胞周期的变化,并使用PCR检测鉴定CDC4、TK1、CDC34、BCL2等基因表达水平的变化。基因表达谱分析结果显示,SIRT7基因敲除后,基因mRNA整体水平变化主要集中在与细胞周期、细胞凋亡等相关的通路中。重组质粒酶切与测序结果显示,成功构建了pLKO.1-shSIRT7重组质粒。转染后PLC/RPF/5细胞SIRT7基因的表达得到有效沉默,与对照组相比,沉默SIRT7基因的表达可导致细胞的增殖能力降低并引起G0/G1期的细胞比例增多,PCR实验显示CDC4与BCL2表达水平增高,TK1与CDC34表达水平降低。以上研究结果提示,在肝癌PLC/RPF/5细胞系中沉默SIRT7的表达可使更多的细胞阻滞在G0/G1期,从而降低其增殖能力,其机制可能与引起细胞周期相关基因的表达改变有关。     

猪戊型肝炎核酸疫苗的构建及在BAL B/C小鼠免疫效应

将含有kozak序列及BamH I的上游引物和带有终止密码子及EcoRV酶切位点的下游引物,以猪HEVDQ1 ORF2为模板,进行PCR。将扩增片段和pcDNA3.1质粒以BamH I/EcoRV进行双酶切后进行连接。连接产物转化至大肠杆菌DH5α,经测序证明该序列正确,命名为pcDQ1。进行pcDQ1质粒提取,以Vero细胞为表达细胞进行转染,以间接免疫荧光试验进行验证。以100μg/次/只剂量的pcDQ1对BAL B/C小鼠进行免疫以获取单因子血清。共免疫3次,采集血清,进行ELISA效价测定。结果表明,该核酸疫苗可以免疫使小鼠产生抗体。     

钙、镁离子在活化HL-60细胞核酸内切酶中的作用不同

EGTA ,EDTA抑制游离HL- 6 0细胞核中核酸内切酶的活化 .EDTA对游离HL -6 0细胞核中核酸内切酶活性的抑制可被外加Ca ²⁺逆转 ,而EDTA对该酶活性的抑制却不能被外加Mg ²⁺逆转 .用CHELEX 1 0 0去除游离核孵育缓冲液中存在的Ca2 ²⁺,Mg ²⁺后 ,外界Ca2 ²⁺( 1～ 1 0mmol/L)单独可诱导游离HL -6 0细胞核中的核酸内切酶活化 ,且强度一致 ;而外加Mg ²⁺则不能诱导该酶活性 .只有在钙存在( 0 1～ 1 0mmol/L)的条件下 ,该酶活性才随Mg ²⁺浓度增高而增高 .这说明HL- 6 0细胞中核酸内切酶的活化必须有Ca ²⁺存在 ,在Ca ²⁺存在的条件下 ,其活性可被镁增强 ,Ca ²⁺和Mg ²⁺在核酸内切酶活化中的作用是不同的 .     

氯化钾或谷氨酸对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞钙离子通透性的影响

用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为研究对象,通过测定细胞存活率(MTT法)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA),探讨了氯化钾(KCl)或谷氨酸分别对入神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤作用。结果发现在含Ca     

镁离子对培养细胞紫外线辐射损伤的防护作用研究

通过观察镁离子对紫外线辐射损伤后细胞活性与光产物产量的影响,以明确镁离子对UVB辐射细胞损伤的防护作用.在实验中,选择成人成纤维细胞(HDF-a)和角质形成细胞(HaCaT)进行细胞培养,筛选小剂量UVB辐射进行诱导性损伤,观察不同浓度镁离子(0.1 mmol/L,0.2 mmol/L,0.4 mmol/L,0.8 mmol/L,1.2 mmol/L)对辐射损伤的细胞活性、基因组断裂情况及光产物产量的影响.研究结果显示,在UVB辐射后,两个细胞系细胞活性显著下降,镁离子培养液孵育的细胞活性均比UVB辐射损伤对照组显著升高,而镁离子孵育后细胞光产物嘧啶二聚体(CPDs)量明显减少.实验研究证实,镁离子对UVB辐射损伤的培养细胞具有防护作用,为UV辐射所致的DNA损伤的修复提供理论基础.     

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2多肽对恒河猴的免疫保护研究

在大肠杆菌中表达的一段戊型肝炎病毒（HEV）结构蛋白NE2,纯化后以弗氏佐剂,按0d,10d,30d的方案10μg/针的剂量免疫3只恒河猴,在第2周抗体阳转,第6周时1只滴度达1∶100 000,另2只滴度1∶20 000,此时以106 PCR滴度的HEV病毒粪悬液攻击。对照组3只均出现血清转氨酶（ALT）升高,抗体阳转,粪便持续排毒1月以上;疫苗组无一发病,未检出非疫苗来源的抗体,其中1只始终未检出粪便排毒,另2只仅出现短暂排毒。以一份NE2免疫后猴血清（滴度1∶20 000）与103 PCR滴度的病毒混匀后感染2只恒河猴,结果对照组2只均持续排毒3周以上,抗体阳转,1只ALT明显升高;而抗体中和组2只猴始终未检出粪便排毒,抗NE2抗体缓慢下降,ALT正常。这些结果表明NE2具有良好的免疫原性和免疫保护性,有可能成为有效的戊肝疫苗。     

戊型肝炎病毒细胞培养模型的研究进展

戊型肝炎病毒（ HEV）体外细胞培养模型的建立有助于阐明HEV的感染、复制及其致病机理,有利于新型抗病毒药物和疫苗的研发与评估。近年来国内外对HEV细胞培养模型的报道很多,但所用细胞系、感染方法及病毒的复制效果等不尽相同。因此,对近年来HEV细胞培养模型的研究进展进行了综述。     

CD63在戊型肝炎病毒感染中的作用机制

本研究旨在寻找戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)衣壳蛋白ORF2的相互作用蛋白,探讨其在HEV感染中的作用。采用酵母双杂交方法从人肝细胞文库中筛选与HEV ORF2相互作用的蛋白,结果显示CD63与HEV ORF2相互作用。Pull-down实验提示原核表达的ORF2与CD63结合较弱,而免疫共沉淀实验提示真核表达的ORF2能与CD63结合。流式细胞术检测结果显示,HEV易感细胞PLC/PRF/5细胞膜表面的CD63表达水平普遍低于HEV非易感细胞。过表达CD63抑制PLC/PRF/5细胞的HEV感染,而小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CD63表达则促进HEV感染。结果提示,CD63能与HEV ORF2相互作用,可能抑制HEV感染肝细胞。     

广西地区野鼠戊型肝炎病毒感染情况调查

从广西壮族自治区5个市采集256份野鼠肝脏和对应的血清211份,采用HEV抗体(HEV-Ab)酶联免疫试剂盒(双抗原夹心法)对血清样本进行抗-HEV检测,并对不同地区HEV抗体阳性率进行χ2检验。采用HEV核酸荧光PCR试剂盒对肝脏样本进行HEV核酸检测。结果显示,211份野鼠血清抗-HEV的抗体阳性率为6.6%,其中百色市的抗体阳性率最高,为14.1%,其他地区抗体阳性率均在10%以下。256份野鼠肝脏中未检测到HEV核酸。由此可见,广西壮族自治区5个市的野鼠中存在HEV感染,但其是否为HEV的自然宿主及在戊型肝炎传播中起何作用需进一步研究。     

中国西藏部分地区猪戊型肝炎病毒流行病学调查

戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)感染是一个重要的全球公共卫生问题,而猪被认为是HEV的天然宿主。HEV可以跨种间传播,且已经证实生吃感染的猪肉会导致人感染。在中国西藏许多地区仍然有生吃猪肉、猪肝等的习惯,且不同种家畜混合饲养,极易造成HEV感染和传播。然而中国西藏地区猪HEV流行情况报道甚少。文中对中国西藏5个地区市(拉萨、日喀则、山南、那曲和昌都)猪血清进行HEV Immunoglobulin-M(Ig M)和Ig G抗体检测,并通过逆转录巢氏PCR(RT-n PCR)进行HEV RNA检测和定量RT-PCR(q RT-PCR)进行病毒拷贝计算,首次报道了藏猪血清HEV RNA阳性率。结果显示,在西藏猪中HEV有较高的流行趋势。猪血清HEV Ig M抗体阳性率高达7.6%(26/340),HEV Ig G抗体阳性率为1.8%(6/340),HEV RNA阳性率高达7.6%(26/340),血清中病毒拷贝高达1.7×107 copies/m L,而且5个地区有不同的流行趋势。结果表明西藏猪HEV感染情况严重。有关部门应加强管理,以避免人与动物之间的交叉感染和暴发。     

Lipid droplets and hepatitis C virus infection

Lipid droplets play an important part in the life cycle of hepatitis C virus and also are markers for steatosis, which is a common condition that arises during infection. These storage organelles are targeted by the viral core protein, which forms the capsid shell. Attachment of core to lipid droplets requires a C-terminal domain within the protein that is highly conserved between different virus isolates. In infected cells, the presence of core on lipid droplets creates loci that contain viral RNA and non-structural proteins involved in genome replication. Such locations may represent sites for initiating assembly and production of nascent virions. In addition to utilising lipid droplets as part the virus life cycle, hepatitis C virus induces their accumulation in infected hepatocytes. The mechanisms involved in this process are not understood but evidence from patient-based studies and model systems suggests the involvement of both viral and host factors.     

Molecular biology and pathogenesis of hepatitis E virus

The hepatitis E virus (HEV) is a small RNA virus and the etiological agent for hepatitis E, a form of acute viral hepatitis. The virus has a feco-oral transmission cycle and is transmitted through environmental contamination, mainly through drinking water. Recent studies on the isolation of HEV-like viruses from animal species also suggest zoonotic transfer of the virus. The absence of small animal models of infection and efficient cell culture systems has precluded virological studies on the replication cycle and pathogenesis of HEV. A vaccine against HEV has undergone successful clinical testing and diagnostic tests are available. This review describes HEV epidemiology, clinical presentation, pathogenesis, molecular virology and the host response to HEV infection. The focus is on published literature in the past decade. Equal contribution     

Phylogenetic analysis of the first complete hepatitis E virus (HEV) genome from Africa

Hepatitis E virus (HEV) is globally distributed, transmitted enterically and between humans and animals. Phylogenetic analysis has identified five distinct HEV genotypes. The first full-length sequence of an African strain (Chad) is presented and compared to 31 complete HEV genomes available, including the fulminant hepatitis strain from India, swine strains and a strain from Morocco. The two African strains are more closely related to genotype 1 than to any other genotypes and together they possibly form a sub-genotype or sixth genotype. The first evidence for recombination between divergent HEV strains is presented.