体外测定系统替代现行组胺致敏测定用于无细胞百日咳疫苗的评价

<正>组胺致敏试验(HIST)是一项用于无细胞百日咳疫苗批签发的致死性试验,或者是百日咳与其他疫苗联合应用的疫苗批签发的检测试验。这项试验需要使用大量的动物,并且该项试验难以标准化,因此迫切需要开发一种体外替代性试验以取代HIST。一项体外测定系统已经开发出来,用于替代HIST,以期测定百日咳毒素的功能性结构域,这是一项将酶联HPLC(E-HPLC)和碳水化合物结合测     

抗百日咳毒素单克隆抗体及其应用研究进展

疫苗是预防百日咳(pertussis)的最有效措施,但无细胞百日咳疫苗接种后免疫力的迅速衰退是近年来百日咳发病率上升的原因之一。百日咳毒素(pertussis toxin, PT)是由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)分泌的主要毒力因子,具有多种生物学活性。在无细胞百日咳疫苗设计初期,为确保疫苗的有效性,抗PT的单克隆抗体(单抗)常被用来检测PT表面重要的抗原表位。研究表明,与天然PT特异性结合的部分单抗无法识别经化学方法脱毒后的PT,提示化学脱毒会改变疫苗中PT的一些抗原表位,进而影响疫苗保护效果。现结合单抗可用来研究抗体干扰PT功能的分子机制,对机体在感染百日咳后的保护性免疫机制进行综述,以期为无细胞百日咳疫苗的进一步改进及开发人源化抗PT单抗治疗百日咳提供科学依据。     

百日咳免疫保护相关机制及评价指标的研究进展

百日咳是目前世界上普遍采用疫苗可进行免疫预防策略的疾病之一。近十年来包括中国在内的许多国家出现的百日咳发病率上升的现象已引起了全球极大关注。其主要原因可能与疫苗接种尤其是无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine, APV)诱导产生的免疫力不断衰减有关。血清中的抗百日咳毒素特异性IgG抗体检测是最重要的免疫力评价方法之一,但到目前为止,感染百日咳菌或接种百日咳疫苗后的免疫力保护相关机制及评价指标尚无统一的标准。现就国内外百日咳相关研究进展作一概述。     

婴幼儿及学龄前儿童百日咳初免对4岁儿童记忆B细胞免疫应答的影响

<正>由博特百日咳杆菌引起的百日咳疾病在接种过百日咳疫苗的人群中再度发生。接种了全细胞百日咳疫苗(wP)和无细胞百日咳疫苗(aP)之后机体内百日咳抗体会迅速衰退,免疫力则主要来自于B细胞和T细胞的长期保护。荷兰根据计划免疫程序,给2、3、4和11月龄的婴幼儿分别接种wP和aP,4     

百日咳杆菌69KD外膜蛋白的研究进展

<正>百日咳是由百日咳杆菌引起的一种急性呼吸道传染病,严重威胁婴幼儿健康,对它的控制迄今主要依赖于菌苗预防。目前认为,百日咳杆菌有许多生活学活性成份,包括白细胞增多促进因子(LPF)[又称百日咳毒素(PT)]、丝状血凝素(FHA)、腺苷酸环化酶(AC)、外膜蛋白、脂多糖、不耐热毒素等。其中LPF、FHA、69KD外膜蛋白作为保护性抗原成份,是目前国内外学者研究的热点。     

新型百日咳疫苗研究进展

百日咳(whooping cough)是一种由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)感染所引起的急性呼吸道传染病,严重时可导致婴幼儿死亡。近年来百日咳的复发流行表明,百日咳的防控效果不理想,现有疫苗的保护力衰减是其重要的原因,亟需研发新型百日咳疫苗。现从不同研发角度对加强免疫、提高产能和优化工艺以及对全细胞百日咳疫苗(whole-cell pertussis vaccine,w P)、无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine,a P)的改进,新抗原来源形式、应用新运送系统、新佐剂的新型百日咳疫苗作一概述。     

Infanrix~(TM)在学步儿童中的免疫原性和反应原性

正3剂b型流感嗜血杆菌-脑膜炎球菌血清群C/Y结合疫苗(HibMenCY-TT)免疫的15~18月龄的幼儿中,共接种四价脑膜炎球菌血清群A、C、W、Y的破伤风类毒素结合疫苗(MenACWY-TT)与第四剂白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗(DTaP)的研究。     

美国用基因操作改进百日咳疫苗

美国国立卫生研究所(NIH)的Camille L.和Jerry M.K.鉴定了百日咳毒素基因的克隆和碱基序列。这一结果向开发安全的百日咳疫苗迈进了重要的一步。详文请参考“Science”第232卷1258—1259页。百日咳毒素是由百日咳病原菌百日咳博德特氏菌(Bordatclla pcrtussis)产生的。给儿童注射百日咳疫苗之所以常有副作用,推测其原因就是此毒素引起的。     

无细胞百日咳疫苗全球孕期接种的现状

近年来百日咳(pertussis)再现引起了广泛关注,其中婴幼儿是主要的高风险群体,感染后可导致严重后果。孕期接种无细胞百日咳疫苗被认为是预防婴幼儿感染百日咳最经济有效的办法,其安全性已得到充分认可。有些国家已将其纳入免疫规划,但在中国目前仍未实施。迄今为止无细胞百日咳疫苗的最佳孕期接种时间及孕期接种是否会影响婴儿主动免疫应答仍需进一步研究并加以明确。现就无细胞百日咳疫苗(acellular pertussis vaccine, aPV)全球孕期接种的现状作一概述。     

一株减毒百日咳鲍特菌的构建及生物学特性分析

百日咳是传染性强、感染率高的急性呼吸道传染病,主要感染婴幼儿,是婴儿死亡的主要原因之一。百日咳鲍特菌（Bordetella pertussis）是引起百日咳的最主要病原菌。近年来世界各地多次出现百日咳暴发,迫切需研制更加有效的新型百日咳疫苗。本研究构建了一株减毒百日咳活疫苗BPTM1,利用同源重组方法敲除编码百日咳鲍特菌主要毒力因子百日咳毒素（pertussis toxin,PTX）和皮肤坏死毒素（dermonecrotic toxin,DNT）的基因,并用大肠埃希菌的同源基因置换了负责气管细胞毒素（tracheal cytotoxin,TCT）转运的基因ampG。通过聚合酶链反应验证了毒素及相关基因的敲除和置换,蛋白免疫印迹法检测表明PTX的S1亚基未表达。体外生长曲线和体内定植曲线均表明,相比于野生型百日咳鲍特菌BPMM,减毒BPTM1的生长和定植能力未受影响,其所致肺部病理效应减轻,而所诱导的百日咳鲍特菌特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体保持高水平。本研究表明,减毒百日咳鲍特菌BPTM1有可能成为百日咳疫苗的候选疫苗。     

鲍特氏百日咳杆菌纯组分在测试百日咳菌苗毒性的体重增加试验中的作用

<正>大多数通用的百日咳菌苗是灭活的全细胞制剂,这种制剂中的百日咳杆菌已通过加热或用适当的化学试剂处理过。所以这些菌苗含有许多百日咳杆菌的组分,如百日咳毒素(PT)、脂多糖(LPS)和丝状血凝素(FHA)。百日咳毒素是一种具有广泛生物活性的物质,它曾被命以不同的名称:淋巴细胞增多促进因子、胰岛激活蛋白、组氨敏感因子、百日咳原及百日咳毒素。     

响应面法建立层析纯化去除百日咳丝状血凝素中内毒素工艺

【背景】无细胞组分百日咳疫苗在人群中接种后不良反应发生率大大降低,是未来百日咳疫苗的发展方向,但是新的抗原纯化方式需要工艺中加入内毒素的去除。【目的】使用响应面法优化层析纯化法去除无细胞百日咳疫苗中百日咳丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin,FHA)中内毒素的工艺。【方法】通过单因素试验,确定响应面设计范围;根据响应面法设计原理,使用Mini TAB软件,以FHA的回收率和收获的FHA蛋白浓度,同时兼内毒素合格为考察指标,对上样样品量、样品p H、样品电导Cond进行优化,最终确定去除FHA内毒素的层析纯化工艺。【结果】使用目前的层析纯化条件获得的Capto adhere去除FHA的内毒素的最佳工艺条件:p H 5.3,Cond 9.6,Mass 3.0。【结论】用响应面法优化了去除百日咳丝状血凝素中内毒素的层析纯化工艺,这种方法效率高、耗时少,为后续生物制品工艺扩大再生产提供参考。     

无细胞百白破联合疫苗腺苷酸环化酶毒素液质联用定量检测方法的建立和应用

目的 建立不同工艺配方的无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular Pertussis combined vac-cine,DTaP)中腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin,ACT)的液质联用(liquid chromatography-tande...     

四价脑膜炎球菌结合疫苗或第四剂流感嗜血杆菌-脑膜炎C/Y结合疫苗对婴儿期曾接受HibMenCY-TT三剂免疫的儿童具有免疫原性

正背景:在幼儿接种流感嗜血杆菌-脑膜炎C/Y结合疫苗(HibMenCY-TT)疫苗的第二年进行单剂四价脑膜炎球菌结合疫苗(Men ACWY-TT)或第四剂Hib Men CY-TT的安全性和免疫原性的评价。方法:健康婴儿被随机(5∶1)分组,在2、4和6个月龄接种Hib Men CY-TT和白喉-破伤风-无细胞百日咳-乙肝-灭活脊髓灰质炎病毒(DTa PHBV-IPV)疫苗;或Hib-TT和DTaP-HBV-IPV疫苗(对照组)。     

中国百日咳疫苗的现状及研发趋势初探

百日咳是许多国家的严重公共卫生问题,目前预防百日咳最有效和最经济的方法是接种百日咳疫苗,百日咳组分疫苗由于其保护效果好、不良反应低、质量稳定可控而成为新一代无细胞百日咳疫苗的首选。本文简要介绍百日咳的病原学、传播途径及流行病学特点,并对中国的百日咳疫苗研发趋势进行初步探讨。     

发光杆菌碳端截短的Mcf毒素杀虫活性研究

发光杆菌能产生很多毒素杀死昆虫宿主.这些毒素中有一种叫Mcf致软因子.可以在大肠杆菌中表达并毒杀毛虫.通过同源性比对分析.在Mcf氨基酸序列中N端有一个BH3的区域,拥有BH3结构域的蛋白具有细胞凋亡的功能,推测保留N端BH3结构域的碳端截短Mcf毒素具有杀虫毒力.从发光杆菌属(Photorhabdus luminescens subsp.laumondii)中克隆了杀虫毒素基因mcf的5'端3 960 bp的核酸序列(包含BH3结构域).将该基因连接到E.coli表达载体pET28a上,并转入BL21(DE3).经IPTG诱导后,在SDS-PAGE上发现145 kD的目的蛋白条带.利用亲和层析纯化得到纯毒素,分别对甜菜夜蛾一龄幼虫喂食生测和对甜菜夜蛾四龄幼虫(Spodoptera exigua)注射生测,显示该毒素具有喂食毒力和血腔毒力,证明含有BH3区域的碳端截短Mcf毒素有杀虫的生物活性.     

人类期待新的百日咳疫苗问世

<正>尽管有效的百日咳疫苗有很高的接种覆盖率,尚未有一个国家将百日咳得到控制。百日咳初免有两种疫苗可用,白喉/破伤风/全细胞百日咳疫苗和白喉/破伤风/无细胞百日咳疫苗,除此之外还有抗原含量较低的推荐用于加强免疫的疫苗。利用这些疫苗,正在探索几种应对当前百日咳问题的免疫策略,包括多次接种、"蚕茧策略"(注:是指对产妇和其他所有与<12月龄婴儿有密切接触的人接种     

无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌液氮保存的稳定性

为了考察无细胞百日咳疫苗效价检定用攻击菌在液氮中保存的稳定性,对液氮保存1~7年的4~9代百日咳攻击菌随机抽取7~11批次样品,采用LD50检测并经统计学处理,分析其样品的毒力变化。试验结果显示,4~9代的百日咳攻击菌液氮保存5年,毒力仍能达到《中华人民共和国药典》三部(2005版)的要求;保存6年和7年,4~7代的百日咳攻击菌毒力仍符合上述要求,8、9代的攻击菌毒力的合格率分别为84%和40%。试验证实,无细胞百日咳效价检定用攻击菌液氮保存5年具有良好的稳定性,可用于无细胞百日咳疫苗的效价检定。     

无细胞百日咳菌苗的效力试验

<正>近十年来,已研究开发了若干种无细胞百日咳菌苗,并有望取代当今使用中的全细胞菌苗。百日咳菌苗有多种抗原,如百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、菌毛混合物(Fim2+3)及69KDa外膜蛋白是无细胞菌苗之所需组分。最近在美国开展了旨在比较全细胞和13种无细胞菌苗免疫原性和反应原生力2期临床试验。这些无细胞菌苗或只含有PT,或由PT与上述的1种或1种以上的抗原组合而成,并已通过化学处理或对其菌体作遗传学修饰消除了毒注。进入2期临床试验的无细胞菌苗,不     

初免DTaP的青少年对两种Tdap疫苗免疫应答及与初免DTwP的青少年应答的比较研究

<正>据报道,与初免全细胞百日咳疫苗(DTwP)的人相比,接种无细胞(DTaP)百日咳疫苗的人百日咳保护期缩短。然而,由于向无细胞疫苗的快速过渡,试图直接比较初免DTaP和初免DTwP的个体之间的保护作用的研究受到年龄和生态学研究等其他限制因素的影响。使用来自多个Tdap的研究已验证检测结果和存储的血清,作者在初免DTaP的青少年中评估了两种取得许可的Tdap疫苗,以允许与同一实验室早期初免DTwP的青少年研究中获得的结果进行比较。在7岁