地衣芽孢杆菌YP1A耐有机溶剂蛋白酶基因的克隆与功能表达

根据B．licheniformis YP1A来源的碱性蛋白酶具有的高强度耐有机溶剂性能及相关数据库分析,采用PCR克隆B．licheniformis YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因,序列分析显示该基因（1264bp）包含启动子与编码380个氨基酸的开放阅读框（ORF）,ORF包括信号肽、前肽及编码254个氨基酸的成熟肽序列。相关基因分析表明,YP1A耐有机溶剂碱性蛋白酶基因与地衣芽孢杆菌ATCC14580的碱性蛋白酶基因仅有6个氨基酸残基差异：构建2种含YP1A碱性蛋白酶CDS的组成型穿梭表达载体pHY／aprYP与pHY／aprP43,前者采用YP1A蛋白酶自带的启动子,后者则采用来自于质粒pP43NMK的P43强启动子。利用这2种表达载体在枯草芽孢杆菌WB800中成功进行蛋白酶的功能表达．其中P43强启动子的表达能力明显优于碱性蛋白酶自带的启动子,表达的蛋白酶比酶活为395U／ml。重组菌表达的碱性蛋白酶在体积分数50％的亲水及疏水有机溶剂中表现出了很好的耐受性,验证了克隆基因为地衣芽孢杆菌YP1A的高强度耐有机溶剂碱性蛋白酶基因.     

溶剂稳定性蛋白酶产生菌的筛选和鉴定

自油污土样等样品中分离获得一株具有产胞外溶剂稳定性蛋白酶的耐有机溶剂极端微生物,经BIOLOG系统鉴定及16S rDNA序列(GenBank,EF105377)分析,该菌株为Bacillus licheniformis YP1。该菌株能耐受中浓度盐、强碱性环境(pH12)及多种不同浓度的有机溶剂,但对多种抗生素敏感。在YP1产蛋白酶发酵过程中添加各种有机溶剂结果表明,丙酮虽抑制了菌体生物量的生长却促进了单位菌体的蛋白酶分泌,而长链烷醇如辛醇、十二醇等能强烈抑制该蛋白酶的分泌。该菌株所产蛋白酶经11种50%(V/V)有机溶剂处理后均能保留高活力。该溶剂稳定性蛋白酶在有机相生物催化等领域具有良好的应用前景。     

微生物碱性蛋白酶的研究进展

碱性蛋白酶可源于动物、植物和微生物。微生物来源的碱性蛋白酶因其具有培养简便、产量丰富而应用尤为广泛,同时菌种筛选、纯化、诱变乃至重组工程菌技术的应用为其大规模工业化生产提供了坚实的基础。本文对微生物碱性蛋白酶产生菌的种类、高产菌株选育工作进展以及碱性蛋白酶的分类、性质、基因结构及功能等方面进行了简要概述。     

我国碱性蛋白酶的应用及研究进展

碱性蛋白酶（AkallneProteilse）指在PH值碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类,最早发现在猪胰脏中。19门年R0dri首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用［1］。 1945年瑞士的Dr．Jeq等发现了微生物碱性蛋白酶［2］,使蛋白酶有可能广泛用于洗涤剂工业。近20年来对碱性蛋白酶的研究更加广泛［3］。我国碱性蛋白酶的研究近十年才有较大的发展,特别是近几年取得了可喜的成果,及时转化为生产力,具有很大的经济和社会效益。1我国碱性蛋白酶研究的近况及其应用1．且用于周性蛋白酶生产的主要微生物目前用于碱性蛋白酶的生产菌和研究对象主要是枯草…     

酱油曲霉蛋白酶活力的提高

蛋白酶在工业上被广泛地应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品和酿造等行业。霉菌生产的蛋白酶在豆酱和酱油生产上的应用已经具有相当悠悠的历史。曲霉菌,例如米曲霉、黄曲霉、栖土曲霉等,一般能分泌2～3种蛋白酶(酸性、中性及碱性),其中以中性和碱性酶为主。黑曲酶则以产酸性蛋白酶为主。酱油曲霉所产的蛋白酶也以中性     

包衣微丸型碱性蛋白酶的制备

开发了一种包衣微丸型碱性蛋白酶的制备工艺,结果表明:30 L发酵中罐发酵50 h比酶活可达4.26×104 U/mL,发酵液经絮凝处理、板框压滤、膜浓缩后可制成酶活达300 000 U/mL的酶浓缩液.经流化后制得含酶颗粒,再包裹薄层后,得包衣微丸型碱性蛋白酶.对制备的包衣微丸型碱性蛋白酶的稳定性、去污效果等指标进行了评估.制备的包衣微丸型碱性蛋白酶产品在严苛条件下的稳定性与国外产品( Savinase 8.0T、PuraFast 2000HS)相当,产品暴露在37℃、75％湿度下8周后仍可保持74％的酶活力,产品的去污效果优于国外产品.制备的包衣微丸型碱性蛋白酶颗粒大小均匀,流动性和分散性好,对外界高温、高湿等不良环境具有很强的抵抗能力,适于工业化生产.     

怀头鲇早期发育阶段消化酶及碱性磷酸酶活性变化(英文)

采用动物性饵料和人工饲料培育1～10日龄怀头鲇(Silurus soldatovi)仔稚鱼,分析测定了全鱼酸性、碱性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶以及碱性磷酸酶的活性。结果表明:孵化后3天开口期仔鱼已具有较高的碱性蛋白酶活性,5日龄时碱性蛋白酶比活力达到较高值,8日龄时出现低值,总体变化呈波动上升趋势;酸性蛋白酶活性在1～8日龄处于较低水平,8日龄后开始迅速升高;淀粉酶活性在5日龄左右达到最高值,随后酶活性开始下降至较低水平;脂肪酶活性变化波动较大,表现为双峰型,两个峰值分别出现在3～4日龄和6～8日龄。摄食动物性饵料仔稚鱼消化酶活性和碱性磷酸酶活性均高于摄食人工饲料。在整个早期发育过程中,碱性蛋白酶比酸性蛋白酶活性高,碱性蛋白酶、淀粉酶比活力在约8日龄仔稚鱼转变期明显下降,而酸性蛋白酶活性开始迅速升高,这说明消化酶活性的变化与仔稚鱼发育过程中消化机能转换具有相关性。怀头鲇在10日龄内碱性磷酸酶活性呈上升趋势,表明怀头鲇胃肠道功能的逐步发育完善。     

水稻耐盐/碱性鉴定评价方法

土壤盐/碱化是盐/碱稻作区水稻生产稳定发展的主要限制因素.为了提高水稻耐盐/碱性,扩大水稻种植面积,减轻盐/碱胁迫导致的水稻减产,许多学者广泛开展了水稻耐盐/碱性的基因型差异、生理生化、遗传及定位等研究,并取得了显著成绩.但国内在耐盐/碱性鉴定评价方法方面还缺乏统一标准,这影响着水稻耐盐/碱性研究的深入开展.本文阐述了国内外至今所采用的水稻耐盐/碱性鉴定方法、耐盐/碱指标和分级标准等,以期为我国水稻耐盐/碱性鉴定评价技术规范的制定以及水稻耐盐/碱性种质资源鉴定、生理生化分析和遗传育种提供参考依据.     

一株产蛋白酶嗜碱菌株的分离、鉴定及酶学特性

【目的】筛选产蛋白酶嗜碱菌并对其进行鉴定和特性分析。【方法】利用碱性脱脂牛奶培养基分离纯化产蛋白酶嗜碱菌,通过形态特征、生理生化、16S rRNA基因序列分析以及DNA-DNA杂交实验确定菌株的分类地位,利用酪蛋白水解法分析所产蛋白酶的pH和温度作用范围、稳定性和耐氧化剂能力。【结果】从我国西藏盐碱湖样品中分离到一株产碱性蛋白酶的菌株ZL223,该菌株为革兰氏阳性菌,最适生长温度为37℃,最适生长pH9.0,16S rRNA基因序列分析显示,菌株ZL223与假强芽孢杆菌Bacillus pseudo firmus OF4亲缘关系最近,16S rRNA基因序列相似性为98.6%,DNA-DNA杂交结果显示与B.pseudofirmus OF4同源性为86%。菌株ZL223产生的蛋白酶作用的最适pH为12.0,最适温度为40℃。【结论】结合生理生化指标测定的结果,鉴定菌株为假强芽孢杆菌ZL223(B.pseudofirmus ZL223)。该菌株产生的碱性蛋白酶具有较高的pH适应性,值得进一步研究。     

南极海洋产耐有机溶剂变性剂氧化剂蛋白酶链霉菌菌株XE-1的初步鉴定及酶学性质

摘要:【目的】从南极海泥土壤中分离得到一株高产蛋白酶的放线菌(XE-1),对所产蛋白酶进行纯化以得到具有特殊性质的酶产物。【方法】通过对XE-1的生理生化和16S rRNA 基因序列分析,初步将其确定为灰红链霉菌的变种。利用乙醇沉淀、离子交换、凝胶等方法纯化后,利用冻干浓缩获得其胞外蛋白酶,用SDSPAGE测定分子量并进行性质表征。【结果】得到一种对高浓度的有机溶剂、变性剂、氧化剂耐受的,表观分子量为14 kDa的碱性丝氨酸蛋白酶,进一步分析,其最适pH 8.2,温度为55℃,米氏常数Km和Vmax分别为1.9 mg/mL和973 u/mL 。此蛋白酶活性于25%的有机溶剂为50%－180%的初始活性;在不同浓度的氧化剂中为110%－140%的初始活性,在0.2 mol/L到4 mol/L的变性剂中表现为100%－150%的初始活性。【结论】从南极海洋链霉菌XE-1中分离得到一种耐有机溶剂、变性剂、氧化剂,大小约为14 kDa碱性蛋白酶,其特殊的酶学性质可用于工业生产或药学等领域。     

Recent advances in the study of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus replication and pathogenesis

It has now been over twenty years since a novel herpesviral genome was identified in Kaposi's sarcoma biopsies. Since then, the cumulative research effort by molecular biologists, virologists, clinicians, and epidemiologists alike has led to the extensive characterization of this tumor virus, Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus(KSHV; also known as human herpesvirus 8(HHV-8)), and its associated diseases. Here we review the current knowledge of KSHV biology and pathogenesis, with a particular emphasis on new and exciting advances in the field of epigenetics. We also discuss the development and practicality of various cell culture and animal model systems to study KSHV replication and pathogenesis.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布.结果表明(1)HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40%(55/136)和82%(112/136).HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;(2)HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81%(133/164)及86%(141/164).C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内;核心抗原既定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中.C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细     

Selection with two alleles and complete dominance

For a plant selection model with frequency-independent viabilities, fertilities and selfing rates, it is shown that apart from global fixation, for certain parameter combinations a protected polymorphism and facultative fixation (either allele may become fixed according to initial frequencies) may both occur. Facultative fixation requires different selling rates for the dominant and recessive type. Protection of the polymorphism requires resource allocation for male and female function. In this connection the problem of purely genetically caused population extinction is discussed.
For general frequency dependence and regular segregation, the chances for establishment of a completely recessive gene are compared to those of a completely dominant gene. It is proven that the process of establishment of the recessive gene, despite a fitness advantage, may be considerably endangered by drift effects if random mating prevails. The recessive gene may reach the same effectivity in establishment as a dominant gene, only if the recessive homozygote mates exclusively with its own type during the period of establishment.