高产壳聚糖酶菌株的筛选及分类鉴定

目的在于筛选一株高产壳聚糖酶的菌株,通过形态学、生理生化及16SrDNA序列测定,对菌株进行分类鉴定。对长白山天池边的土样进行筛选,获得一株产壳聚糖酶活力较高的菌株,最大酶活力达0．325U／mL。经16SrDNA序列比对,该菌株与Beta proteobacterium的同源性高达99％。结合《伯杰细菌鉴定手册》（第9版）,将该菌株鉴定为Beta proteobacterium属的一个种,定名为Betaproteobac-tenure sp．T1。     

高产壳聚糖酶菌株的筛选及分类鉴定

目的：筛选一株高产壳聚糖酶的菌株。方法：通过形态学、生理生化及16S rDNA序列测定,对菌株进行分类鉴定。在培养基中以壳聚糖为唯一碳源,对长白山天池边的土样进行筛选。结果：获得一株产壳聚糖酶活力较高的菌株,最大酶活力达0．325U／ml。结论：经16S rDNA序列比对,该菌株与Beta proteobacterium的同源性高达99％。结合《伯杰细菌鉴定手册》（第九版）,将该菌株鉴定为Beta proteobacterium属的一个种,定名为Beta proteobacterium sp．T1。     

壳聚糖酶

<正>壳聚糖(Chitosan)是由N-乙酰葡糖胺(GlcN Ac)和葡糖胺(GlcN)通过β-1,4糖苷键相连接的多糖,与甲壳素、壳寡糖均被称为甲壳素类物质,被誉为继糖类、蛋白质、脂肪、维生素等生命元素之外的第六大生命物质。壳寡糖由于其生物相容性好、易于被人体吸收等优势,其商业产品已遍布各个领域,主要涉及功能性食品、药品、环保、化工等。通过化学方法降解壳聚糖制备壳寡糖的方法具有污染环境、产物不均一等缺点。利用生物酶法     

产壳聚糖酶菌株的初步筛选

通过大量的筛选,获得了产壳聚糖酶较好的菌株Y2、Y4、Y8。其发酵液所产壳聚糖酶的酶活力分别为2．0U／ml,2．1U／ml,2．2U／ml。     

产壳聚糖酶菌株的分离、鉴定及发酵条件优化

从废弃食用菌培养基周围土壤中分离得到一株产壳聚糖酶的菌株,结合形态学特征与26SrDNA序列进行了分类学鉴定,结果表明,该菌株与高山被孢霉(Mortierella alpina)的同源性较高,达99%,初步鉴定为被孢霉属的一种,命名为KB-1001。并对该菌株的产酶特性进行了研究,结果表明,该菌株液体发酵培养产酶高峰出现在第84h,最适碳源为1%的水溶性壳聚糖,最适氮源为1.87%的(NH4)2SO4,摇瓶培养的最适初始pH值为6.0,最适温度为28℃～30℃,接种量为4%,最佳装瓶量为70 mL/250 mL,150 r/min摇瓶培养,经优化培养后,该菌株发酵液中壳聚糖酶活力最高达到8.130 U/mL。比原始的未经发酵条件优化的产酶活性提高了12.78%。     

产壳聚糖酶菌株的发酵条件优化

方法:通过单因子实验,对保存的1株产壳聚糖酶的菌株C001进行发酵产酶条件优化,确定了最适产酶培养基组分.结果:温度30℃,发酵时间18h,pH5.5,接种量5%优化发酵条件后,产壳聚糖酶活力增长了37.4%.     

产壳聚糖酶内生真菌的筛选、鉴定及酶活力初步研究

植物内生真菌是挖掘不同类型壳聚糖酶及发现新酶的资源宝库。该研究从122株柑橘和血散薯内生真菌中筛选能产生壳聚糖酶的菌株,对其进行鉴定/初步研究酶活力影响因素,为后期其酶学性质及产壳聚糖酶内生真菌与宿主植物病害防御互作关系的研究奠定基础。通过透明圈法初筛结合液体发酵法进行复筛,得到2株可产生壳聚糖酶的内生真菌Stdif9和Stdif9-4,并发现Stdif9-4最高酶活力(0.968 U·mL^-1)显著高于Stdif9(0.780 U·mL^-1)。采用形态学和分子生物学结合的方法将菌株Stdif9-4鉴定为青霉属菌株,即Penicillium sp.Stdif9-4。通过DNS试剂法初步研究影响该菌株产壳聚糖酶活力的因素,发现不同培养时间对菌株壳聚糖酶活力具有显著影响,在培养96 h时,壳聚糖酶活力达到最大值。9种金属离子对菌株的酶活力具有不同影响,其中Mn²⁺和Ca²⁺对壳聚糖酶活力具有明显的激活作用;Ag⁺、Zn²⁺、Cd²⁺、Ba...     

产壳聚糖酶菌株的分离筛选及其诱变育种

利用以壳聚糖为唯一碳源的选择性培养基,从自然界中筛选得到一株壳聚糖酶活较高的菌株 ,其壳聚糖酶活为0.59U/mL.经初步鉴定,该菌株为芽孢杆菌属,以A表示.以该芽孢杆菌为出发菌株,经硫酸二乙酯(DES)诱变处理50 min后,筛选得到壳聚糖酶活明显提高的突变株DES-4,其壳聚糖酶活为1.60U/mL,是出发菌株的2.7倍.该突变株经连续传代5次后仍稳定产酶.研究表明,突变株DES-4的壳聚糖酶产生与芽孢形成之间关系密切,当芽孢充分形成后发酵液的壳聚糖酶活力不再增大.     

产壳聚糖酶菌株的生物学特性及抑菌性能研究

采用透明圈法,通过大量筛选得到8株产壳聚糖酶的野生菌株,对产壳聚糖酶最高的菌株Y8的菌株形态特征和生理生化特征、生长曲线、培养时间、培养起始pH等生物学特性进行了试验并对该菌所产壳聚糖酶进行了抑菌实验比较,Y8菌株产壳聚糖酶酶活力达0.50U/mL,依据《伯杰细菌鉴定手册》(第九版),初步鉴定为似单胞菌(Pseudomonas)属的一个种。菌株Y8的适宜培养pH值为6.0～7.0,最适pH值6.5。适宜养温度为28～32℃,最适值32℃。Y8所产的壳聚糖酶对细菌和真菌都有一定的抑制作用,对细菌的抑制作用要优于真菌。浓度为0.1％的壳聚糖酶抑菌能力高于1％壳聚糖,比0.1％壳低聚糖的抑菌效果略高。     

一株产纤维素酶细菌的分离鉴定及酶学特性研究

从采集的含腐烂树叶的土壤中,筛选到1株产纤维素酶能力较高的菌株JJ-3,经16S r RNA基因序列分析,鉴定该菌株为产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)。产酶条件及酶学特性研究表明:以滤纸为碳源、蛋白胨为氮源、初始p H为8.0的培养基中发酵3 d更利于纤维素酶的合成;菌株发酵液在中性和碱性条件下均有较高的滤纸酶活力,分别可达118.7 U/m L(p H7.0),167.8 U/m L(p H8.0)和120 U/m L(p H9.0);所产纤维素酶的最适酶反应p H为7.0,最适酶反应温度为40℃,对温度比较敏感,在p H7.0-8.0的范围内具有较好的稳定性,能满足中性和碱性纤维素酶的要求。     

低温淀粉酶菌株C2的分离鉴定及其产低温淀粉酶的酶学性质

获得低温淀粉酶高产菌株,确定该菌株所产淀粉酶的酶学性质.从大黑山(大连)污泥中筛选菌株,通过菌株的形态特征、生理生化和16S rDNA序列鉴定确定其种属,对其酶学性质进行初步研究.获得1株低温淀粉酶高产菌株C2,经鉴定其为微小杆菌属,C2所产低温淀粉酶最适反应温度为25℃,酶的热稳定性比较差,最适pH为7.5,Ca2+和Fe2+对该酶有激活作用,Cu2+、Ni2+、Go2+等抑制酶活性.经薄层层析(TLC)鉴定酶解产物为葡萄糖,说明该菌株具有产生低温淀粉糖化酶的能力.菌株C2所产淀粉酶符合低温淀粉酶性质,值得进一步研究.     

一株产漆酶细菌的分离鉴定及酶学性质研究

[目的]分离获得产漆酶的细菌菌株,研究漆酶的酶学性质并应用于染料脱色.[方法]利用含铜的富集培养基筛选产漆酶细菌;通过形态特征、生理生化试验及16SrDNA序列分析等方法进行鉴定;以丁香醛连氮为底物测定漆酶的酶学性质;通过测定染料在最大吸收波长下吸光值的变化评价漆酶对染料的脱色效果.[结果]从森林土壤中筛选到一株漆酶高产菌株LS05,初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);菌株LS05的芽孢漆酶以丁香醛连氮为底物的最适pH为6.6,最适温度为70℃;该酶具有较好的稳定性,经70℃处理10h或在pH 9.0条件下放置10d后可保留活性.对抑制剂SDS和EDTA具有一定的抗性,在碱性条件下可有效脱色不同的工业染料,RB亮蓝、活性黑和靛红1h内的脱色率达93％以上.[结论]Bacillus amyloliquefaciens LS05的芽孢漆酶在高温和碱性条件下稳定性强,相对于真菌漆酶具有更好的工业应用特性,可有效用于工业染料废水的处理.     

土壤中产壳聚糖酶真菌的筛选

在以壳聚糖（Chitosan）为唯一碳源和氮源的培养基上,利用透明圈筛选法,从不同地区采集的105份土样中,共分离到26株产生透明圈较大的菌株,结合酶活力测定结果,获得产酶能力较高的菌株HF-1、HF-5,为进一步的研究提供了条件。     

微囊藻毒素降解菌的筛选、鉴定及其降解活性研究

采用从巢湖水华蓝藻细胞中提取、提纯的藻毒素（Microcystins,MCs）为微生物生长的唯一碳源和氮源,通过平板分离纯化,从巢湖底泥中分离出5株能够降解藻毒素的菌株,并对其中降解活性较高的一株进行分子鉴定。应用PCR技术克隆到16S rDNA片段,核苷酸序列分析结果表明,该菌的16S rDNA的全序列与吉氏库特菌kurthia gib-soniistrain HC050630C-1的相似性达99%。微囊藻毒素降解实验结果表明,用15mg/L乙醇作为外加碳源时可显著提高菌株M9降解MCs的能力,在48h内对初始浓度分别为17.1mg/L的MC-RR和11.3mg/L的MC-LR的降解率分别达到70.0%和81.6%。而葡萄糖对菌株M9的生长有明显抑制作用。     

一株产生淀粉酶杆菌Bacillus sp. GEL-09的筛选、鉴定及发酵条件优化

【背景】生淀粉酶可以水解生淀粉颗粒,在酒精发酵、白酒、黄酒和食醋的生料酿造工业中具有广阔的应用前景。【目的】从自然环境中筛选产生淀粉酶的菌,对其发酵条件及酶性能进行考察,为淀粉生料发酵过程提供优良菌种和酶资源。【方法】取木薯田土壤,经过稀释、热处理、富集培养以及木薯淀粉平板筛选培养基初筛,摇瓶复筛得到产高效降解生淀粉酶的菌株;经过菌落形态、细胞染色观察以及16S rRNA基因序列比对进行鉴定;对筛选菌株的发酵培养基和发酵条件进行优化,并对酶蛋白进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】分离到一株具有较高生淀粉酶水解活力的菌株GEL-09,经鉴定为芽胞杆菌Bacillus sp.GEL-09;该菌在最优发酵条件下培养96 h,胞外酶活力达到430.6 U/m L,是优化前的2.8倍;酶学性质分析发现该酶为中温、中性酶,最适温度和p H为50°C和7.0;生淀粉降解能力对比发现,该酶的生淀粉降解能力值为62.3%,显著高于细菌α-淀粉酶、生麦芽糖淀粉酶和甘薯β-淀粉酶对生淀粉的降解能力。【结论】Bacillus sp.GEL-09在生淀粉酶生产方面具有良好的开发应用前景。     

一株产生淀粉分解酶犁头霉的分离鉴定及其酶学性质

从保宁麸醋醋曲中定向筛选得到一株产生淀粉分解酶的菌株CQB43,其酶活力为105.2 U/mL,RDA值达到27.9%。通过形态观察和分子生物学鉴定确定该菌株为伞枝犁头霉Absidia corymbifera。对该菌株分泌生淀粉酶酶学性质的研究结果表明,该酶在pH为4.0-5.6的范围相对稳定,最适pH是5.0;在60°C以下的范围内具有较好的热稳定性,最适作用温度为40°C。研究金属离子对其活力影响的结果表明,Co2+对该生淀粉糖化酶有激活作用,Fe3+和Ca2+对该酶有抑制作用。     

土壤中高产蛋白酶菌株产酶条件及酶学性质

【背景】微生物蛋白酶已经成为工业用蛋白酶的主要来源,筛选具有特殊环境适应性的微生物成为生物酶资源的开发热点。【目的】通过对青藏高原土壤微生物产蛋白酶菌株的筛选、优化及相关特性研究,寻找新的蛋白酶资源,为高原菌种资源利用提供科学依据。【方法】采用形态学和分子生物学对筛选菌株进行菌种鉴定,利用单因素试验和正交试验对菌株进行发酵条件优化及酶学性质的探究。【结果】筛选出一株高产蛋白酶菌株XC2,经鉴定菌株XC2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。XC2最优产酶条件:可溶性淀粉4.0%,牛肉膏1.0%,K~+0.6%,培养温度34°C、初始pH 7.0、接种量2.0%的条件下200 r/min振荡培养13 h,所产蛋白酶活力最高为638.5 U/mL。XC2所产蛋白酶最适反应温度60°C,最适pH9.0;40-50°C、pH8.0-10.0条件下酶活稳定性较高;Mn~(2+)对酶活力有明显激活作用,而Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(2+)、Fe3+对酶活力有明显抑制作用。【结论】枯草芽孢杆菌XC2有较强的产碱性蛋白酶的能力,具有较好的应用前景。     

不对称还原苯乙酮的酵母菌株筛选与分子鉴定

利用苯乙酮作为模式底物,对145株菌株进行初筛和复筛,获得一株具有高效立体选择性的酵母菌株YS6-2,能够不对称还原苯乙酮生成(S)-1-苯基乙醇.在苯乙酮浓度为70mmol/L时,底物的初始转化率达26.8%,产物(S)-1-苯基乙醇的对映体过量值为98.8%.基于形态学、生理生化特征、18S rDNA和26S rDNA D1/D2区域的分析表明,YS6-2为胶红酵母(Rhodotorula muci-laginosa).     

红曲霉变异株A6产色素发酵条件研究

本文对红曲霉变异株Ａ６进行了产红曲色素发酵条件试验,发现在以６％饴糖为碳源,以０３％ＮａＮＯ３为氮源的培养基,初始ｐＨ４０～４５,接种量为１５％时产色素浓度最高。同时,考察了整个发酵过程中ｐＨ,残糖量与色素生成浓度的关系,认为发酵周期拟控制在８０～８５ｈｒ为宜。本试验还发现在发酵过程中补加适量饴糖有利于产红曲色素