绿色荧光蛋白的发光机制

从多管水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）中分离纯化的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是由２３８个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量约２７ｋＤ,１９９２年其ｃＤＮＡ被克隆［１］。１９９４年重组野生型ＧＦＰ（ＷｔＧＦＰ）在异源细胞中表达［２］。野生型ＧＦＰ被紫外光和蓝光激发后能发出绿色荧光,最大荧光吸收／激发峰在３９５ｎｍ,在４７５ｎｍ有一个肩峰,荧光发射峰为５０８ｎｍ。ＧＦＰ的结构和光致荧光非常稳定,而且因ＧＦＰ生色团的形成是自催化的,检测ＧＦＰ的光致荧光不需要外加底物和辅因子,便于活体观察［２］。如今…     

绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用

绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是海洋生物水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）体内的一种发光蛋白,分子量２７ｋＤ,由２３８个氨基酸组成。该蛋白６５～６７位ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ三种氨基酸环化加氧形成特殊的生色团结构。野生型ＧＦＰ发光较弱,而且ｇｆｐｃＤＮＡ含有隐蔽型剪切位点,而加工改造的ＧＦＰ在植物中能够正常表达并且加强了荧光信号。ＧＦＰ作为新的报告基因和遗传标记被广泛应用于植物研究之中。     

EGFP基因在粉纹夜蛾细胞中的高效表达

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是从一种水母体内分离的新型报告基因（ｒｅｐｏｒｔｇｅｎｅ）（Ｃｈａｌｆｉｅ等,１９９４）,其编码的、由２３８个氨基酸组成的ＧＦＰ是一种对光稳定的可溶性蛋白,在长波紫外光或蓝光激发下就能发出绿色荧光,而不需添加任何酶或底物,因而检测十分方便快速,无背景干扰。同时ＧＦＰ也是目前唯一能在异源细胞内表达后自发产生荧光的蛋白质。ＥＧＦＰ基因是由野生型ＧＦＰ基因经人工改造后更适合于在真核细胞中表达的突变体,基因编码区长７１７ｂｐ,编码…     

绿色荧光蛋白在植物细胞生物学中的应用

克隆于海洋动物水母 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉ ａ)的绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)作为一种新型的非酶性报告基因具有检测简便 ,结果真实可靠 ,不需要任何外源底物或辅助因子的特点 ,自出现以来它已引起人们的广泛兴趣 ,目前已经应用于烟草、柑橘、拟南芥、玉米、水稻、大豆、苜蓿等多种植物材料的研究中。ＧＦＰ含有特殊的六肽生色团结构 ,用蓝紫光激发即能发出肉眼清晰可见的绿色荧光 ,而无需任何底物或辅助因子。ＧＦＰ能与多种不同蛋白质的Ｎ端或Ｃ端融合而保持与天然蛋白质相似的荧…     

丝瓜的三聚体G蛋白的初步研究

根据拟南芥（ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｈｌｉａｎａ）ＧＰＡ１的保守区段Ａ设计一对特异引物（５′ｃｔｇｇｇｇａａｔｃｔｇｇａａａａｔｃ３′,５′ｃａｃａｇｃｔｇｔａｃａｃｃｔｃａａａｃ３′）通过ＰＣＲ从丝瓜核基因组中扩增植物的三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因,获得了２个片段（ＬＦＧ１,ＬＦＧ２）,并已克隆和测序（已在ＥＭＢＬ数据库中登记,登记号为：ｙ１５２７０,ｙ１５２７１）．序列分析表明ＬＦＧ１和ＬＦＧ２分别由１５１５ｂｐ和７３２ｂｐ构成,都含有三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因的保守区段Ａ,但也都含有内含子．根据片段的大小及ＰＣＲ的特性,ＬＦＧ１可能是丝瓜三聚体Ｇ蛋白α亚基编码基因上的片段．     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

棕色固氮菌钼铁蛋白的金属原子簇与其构象的关系

棕色固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）固氮酶钼铁蛋白的紫外ＣＤ谱在２０５—２３５ ｎｍ 出现由峰位分别为２０８ 和２２２ ｎｍ 的双负峰组成的负槽;经邻菲口罗啉在厌氧或有氧环境中处理后,在２２２ ｎｍ 的负峰随该蛋白中Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ 和ＦｅＭｏｃｏ 含量的降低而减少。在分别由Ｎａ２ＭｏＯ４、Ｎａ２Ｓ、二硫苏糖醇和高柠檬酸铁或柠檬酸铁组成的重组液重组后,上述两种处理蛋白在２２２ ｎｍ 的负峰又随其Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ和ＦｅＭｏｃｏ含量的恢复而恢复。表明,钼铁蛋白的金属原子簇与蛋白质构象间存在明显的相关性     

文摘

010 112绿色荧光蛋白与黄瓜花叶病毒运动蛋白融合基因的构建及在大肠杆菌中的表达 [中 ]/李睿… / /农业生物技术学报 .-2 0 0 1,9(1) .- 19～ 2 2采用重组 -ＰＣＲ方法 ,扩增获得绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)与黄瓜花叶病毒运动蛋白 (ＣＭＶＭＰ)融合基因 ,将其克隆到ｐＫＥＮ上 ,构建了该融合基因的原核表达载体 ｐＫＥＮＧ -Ｍ。ＳＤＳ -ＰＡＥＧ及免疫印迹分析显示 ,5 7ｋＤ的融合蛋白基因在大肠杆菌ＤＨ5ａ中正确表达。激光共聚焦显微镜分析表明 ,在 488ｎｍ光激发下 ,菌体呈亮绿色 ,表明融合蛋白保持绿色荧光特性。实验结果为进一步研究ＣＭ…     

GFP转基因指示系统建立的研究

ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）是存在于发光水母体内的一种吸收蓝光或紫外光（３９５ｎｍ）后能够发出绿色荧光的天然蛋白质。本文报道了将ＧＦＰ表达质粒导入ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等真核细胞,建立ＧＦＰ真核细胞转基因指示系统。研究表明,ＧＦＰ在ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等传代细胞中表达的最佳条件是３３℃,ｐＨ７．２、５％ＣＯ２和转染后４８ｈ观察等。并对野生型ＧＦＰ和突变型ＧＦＰ的发光强度进行了比较,结果表明,在相同条件下,突变型ＧＦＰ的荧光比野生型的强     

中国人白细胞介素-12 cDNA基因的克隆及序列分析与比较

为研究中国人ＩＬ－１２的基因特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）从中国人脐带血单核细胞中分别克隆了Ｐ３５、Ｐ４０两亚基ｃＤＮＡ基因,包括完整的前体蛋白编码序列,其中Ｐ３５ ｃＤＮＡ编码２１９个氨基酸的多肽,Ｐ４０ ｃＤＮＡ编码３２８个氨基酸的多肽,与国外序列（ＮＫＳＦ、ＣＬＭＦ）比较结果发现：所克隆序列Ｐ３５同ＮＫＳＦ相比,第４４ａａ密友子由ＧＴＣ（Ｖａｌ）→ＧＴＧ（Ｖａｌ）,但未改