肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布一免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

肾上腺髓质素在正常大鼠脑中的分布-免疫组化及原位杂交分析

目的验证大鼠脑内是否存在ADM及其mRNA。方法取10只健康雄性SD大鼠,体重200-250g,应用免疫组织化学法和原位杂交组织化学法检测正常大鼠脑内ADM及其mRNA的表达情况。结果在大鼠脑内ADM及其mRNA阳性细胞主要表达在大脑皮质、海马结构、齿状回、丘脑、室旁组织、脉络丛、室管膜细胞、基底节、血管内皮细胞,其中脉络丛、室旁组织、丘脑为高表达区,其次为大脑皮质、海马。在大鼠大脑内ADMmRNA的表达与ADM阳性细胞的表达相一致。结论ADM及其mRNA在大脑内广泛表达,提示ADM在中枢神经系统内具有重要的作用。     

生长抑素在齐口裂腹鱼消化道和脑中的定位

采用链霉亲合素一生物素过氧化物酶复合物免疫组化法研究生长抑素（Somatostatin,Som）在齐口裂腹鱼（Schizothorax prenanti）脑和消化道中的定位。在消化道中,口咽腔和食道为阴性反应;肠道有Som强阳性细胞,其中前肠密度最高,后肠最低。这些Som阳性细胞多分布于粘膜上皮,形态多样。肠道巨噬细胞呈Som强阳性反应。Som广泛分布于各脑区的神经元或神经纤维中,呈弱或强阳性反应,其中下丘脑下叶乳头体内Som阳性细胞密度最高,背嗅核、侧嗅核、原始纹体、视前核、内嗅沟旁、缰核下区、前丘脑核、前圆核、下丘脑中叶、下丘脑下叶、中脑室侧次之;小脑分子层和延脑VI、V核较少。端极和脑上腺有阳性神经纤维。这说明Som在肠道中的分布与该鱼食性、消化道结构和功能密切相关;Som在下丘脑中的分布特点为鱼类GH调控提供了形态学证据;Som在脑中广泛分布,提示可能作为一种神经递质或调质,发挥更为广泛的生理功能。     

化学损毁交感神经后大鼠心内神经节生长抑素的变化

应用免疫组织化学和原位杂交方法研究了大鼠心内神经节细胞中SS的分布及其mRNA表达。结果发现,大鼠心内神经节中有SS－IR阳性神经纤维和细胞,心内神经部分细胞浆中有SSmRNA表达,表明大鼠心内神经节细胞有SS合成和贮存。用小剂量6－OH－DA选择性损毁心内交感神经纤维后,心内神经节中SS－IR阳性神经纤维和细胞的积分光密度均有不同程度增强,反映了心内交感神经和付交感神经的相互抑制作用。     

HDAC1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义及与ER、PR的关系

目的：探讨乳腺癌组织中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测78例乳腺癌组织和20例癌旁组织中HDAC1蛋白的表达情况并分析其与ER、PR之间的关系。结果：（1）HDAC1蛋白在78例乳腺癌中的阳性表达率为78.2%（61/78）,在癌旁组织中的阳性表达率为5%（1/20）,两组差异有统计学意义（P〈0.01）（2）乳腺癌组织中的HDAC1蛋白在ER或PR阴性乳腺癌组织中的表达分别高于其在ER或PR阳性乳腺癌组织中的表达（P〈0.01）结论：乳腺癌组织中的HDAC1蛋白过度表达与肿瘤发生发展密切相关。     

HDAC1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义及与ER、PR的关系

目的:探讨乳腺癌组织中组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测78例乳腺癌组织和20例癌旁组织中HDAC1蛋白的表达情况并分析其与ER、PR之间的关系。结果:(1)HDAC1蛋白在78例乳腺癌中的阳性表达率为78.2%(61/78),在癌旁组织中的阳性表达率为5%(1/20),两组差异有统计学意义(P<0.01)(2)乳腺癌组织中的HDAC1蛋白在ER或PR阴性乳腺癌组织中的表达分别高于其在ER或PR阳性乳腺癌组织中的表达(P<0.01)结论:乳腺癌组织中的HDAC1蛋白过度表达与肿瘤发生发展密切相关。     

大鼠脊髓内生长抑素mRNA原位杂交的研究

采用地高辛标记生长抑素反意ＲＮＡ探针经原位杂交和显色后,光学显微镜下观察生长抑素ｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的定位。结果显示：脊髓内含有大量呈紫蓝色的生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经细胞,岍性磷酸酶反应产生     

大鼠尾壳核头部生长抑素mRNA的区域性表达

目的　观察尾壳核 (CP)头部背内侧区、背外侧区、腹内侧区和腹外侧区生长抑素 (SOM )mRNA阳性神经元分布特点。方法　采用原位杂交组织化学方法。结果　CP头部不同区域SOMmRNA阳性神经元的密度存在差异 ,腹内侧区SOMmRNA阳性神经元的密度明显高于其他区 (P <0 0 1)。结论　CP头部不同区域的SOMmRNA阳性神经元密度存在差异 ,这可能是CP头部不同区域机能差异的形态学基础之一。     

ATP7B和PCNA在大鼠、小鼠空肠及肾的表达

随机选取6只SD大鼠(Rattus norvegicus)和7只昆明小鼠(Mus musculus),用免疫组织化学单标和双标法检测其空肠及肾ATP7B与PCNA的表达,并分析表达的相关性。结果发现,对于大鼠及小鼠,ATP7B主要表达于小肠腺与空肠上皮的纹状缘、近腔面和近基底部,肾小管与集合管;PCNA在空肠腺及小肠绒毛中轴的结缔组织中表达,在肾小管、集合管及肾小球的少数细胞表达;ATP7B与PCNA虽在空肠上皮、肠腺、肾小管和集合管有共表达现象,但二者在大鼠与小鼠空肠及肾的免疫反应阳性物积分光密度间均无显著相关性(P0.05)。提示ATP7B与PCNA在正常大鼠与小鼠空肠及肾的表达相似,ATP7B的表达与组织增殖活跃程度间的相关性不明显。     

大鼠生后发育过程中胃肠胰生长抑素基因的表达

本实验采用地高辛精标记ｃＲＮＡ探针原位杂交技术和ＡＢＣ免疫组织化学方法,研究了大鼠生后发育过程中胃肠胰组织生长抑素（ＳＳ）基因的表达。结果显示,大鼠生后发育过程中,胃腺ＳＳ杂交阳性细胞及ＳＳ－ＩＲ细胞的密度（细胞数／ｍｍ粘膜肌长）均随天龄增长而增大,至第１５天前后达高峰,随后开始下降,至成年时,与出生时水平接近;十二指肠则在生后初期细胞密度较高,５天以后开始降低,第２０天后降至成年水平。胰腺的ＳＳ杂交阳性细胞及ＳＳ－ＩＲ细胞密度（细胞数／ｍｍ２）变化规律与胃腺相似,随天龄增大,至第１０天前后达高峰,第２０天左右降至成年水平,与出生水平接近。研究结果表明,胃肠胰组织ＳＳ基因表达与胃肠胰的生长发育具有一定的相关性。     

乳腺增生病的治疗现状

乳腺增生病是最常见的乳房疾病,发病率高,占全部乳房病的75%。目前,其治疗方面,单用中药治疗虽疗效肯定,但起效较慢,如单用西药治疗虽起效快,但作用难于持续,长期服用毒副反应多,复发率较高。目前在临床上对乳腺增生病尚无疗效肯定、起效快、毒副作用小的治疗方法,本文就当前乳腺增生病的治疗及临床应用进行概括。     

乳腺增生病的治疗现状

乳腺增生病是最常见的乳房疾病,发病率高,占全部乳房病的75%。目前,其治疗方面,单用中药治疗虽疗效肯定,但起效较慢,如单用西药治疗虽起效快,但作用难于持续,长期服用毒副反应多,复发率较高。目前在临床上对乳腺增生病尚无疗效肯定、起效快、毒副作用小的治疗方法,本文就当前乳腺增生病的治疗及临床应用进行概括。     

基因打靶方法制备乳腺生物反应器

基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷,并随着第一例基因打靶家畜的诞生而成为这一研究领域的热点。本文从制备乳腺生物反应器过程中基因打靶策略、打靶细胞到打靶位点的选择等各个方面,详细分析了其中的技术难点、解决问题的对策、国内外研究进展以及应用前景。     

乳腺注射法表达人组织型纤溶酶原激活剂的研究

目的 :构建tPA乳腺定位表达载体 ,使其在牛乳汁中高效表达 ,观察目的基因表达的规律及其影响因素 ,为建立新型牛乳腺生物反应器提供理论基础。方法 :RT-PCR法克隆目的基因 ,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含tPA-cDNA的乳腺定位表达载体 ;采用乳腺注射法将融合基因转入小鼠及牛的乳腺组织中。结果 :乳腺注射外源基因后 ,tPA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 :乳腺注射法可使目的基因在乳腺组织中稳定地表达较长的时间 ,其表达量与显微注射法没有明显的差异 ,表明外源基因的表达不受转基因方法的影响。但tPA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量 ,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异 ,可能受着不同的因素或调控系统的影响。     

乳腺生物反应器表达载体的检测方法

乳腺生物反应器研究和开发的周期长 ,成本大 ,风险高 ,在生产转基因动物之前有必要对乳腺特异性表达载体构建的合理性和有效性进行检测。综述了国内外载体检测研究的进展 ,以及这些检测方法在转基因小鼠、动物乳腺内表达法和细胞培养中的应用     

Construction and Characterization of a Goat Mammary Gland cDNA Library

A lactating goat mammary gland cDNA library was constructed by using a modified commercially available cDNA library construction kit protocol. The resulting clones were sequenced and functionally analyzed through cross-species genomic comparison to assess (1) the capacity and functional quality of the constructed library for subsequent research and (2) the efficiency of the procedural modifications. The study resulted in the construction of a high-quality mammary gland cDNA library, which was characterized by (1) the total recombinants number of 1.4 × 10⁷ colony-forming units (cfus) that was at least 10 times greater than the number expected from the application of the standard kit protocol, (2) the recombinants rate of 96%, and (3) the average insert size of 1,082 bp. BLAST analysis of sequenced clones against GenBank databases determined 55.7% of clone redundancy, 22 known function gene clusters, and 29 novel gene clusters. The analysis of the primary gene expression profile showed that 59% of the tested clones were genes that coded for milk proteins while 16% of the clones coded for ribosomal, metabolism, immune response, and translation proteins. The remaining 25% of the tested clones were described as novel genes. Cross-species comparison showed that 77% of characterized gene clusters were successfully identified by using resources from other ruminants and unrelated species. This outcome is in consonance with the common belief that the genomic resources that have been generated across species are potentially powerful tools that could be used for enhancing the molecular understanding of less genomically studied species, such as goat.     

利用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白

动物乳腺生物反应器是利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达,并从转基因动物奶液中获取重组蛋白。应用动物乳腺生物反应器生产药用蛋白具有生产方式简单,产量大,蛋白能进行翻译后修饰等优点,是具有广阔前景的生物医药产业。本文仅就动物乳腺生物反应器的建立、检测、目的蛋白的分离纯化以及存在的问题等作一综述。     

小鼠乳腺细胞凋亡及瘦素对凋亡的影响

目的系统的研究小鼠乳腺发育周期中乳腺细胞凋亡情况,并阐明瘦素对乳腺细胞凋亡的影响。方法以小鼠乳腺为实验材料,采用TUNEL法系统地研究小鼠乳腺在青春期、妊娠期、泌乳期和退化期的整个发育周期中的细胞凋亡情况,并通过培养基中添加瘦素的方法研究瘦素对乳腺细胞凋亡的影响。结果在青春期50～60d、妊娠期10～16d、退化期1～10d检测到较多的细胞凋亡,其中退化期细胞凋亡最为显著。添加瘦素培养的乳腺细胞凋亡信号明显增多。结论小鼠乳腺发育不同时期细胞凋亡同结构和功能发育之间相互联系。同时通过小鼠乳腺组织体外培养的方法,证明瘦素在退化期乳腺组织中可明显诱导组织凋亡。     

Matrix Metalloproteinase in Mammary Gland Remodeling-Modulation by Glycosaminoglycans

Mammary gland which undergoes proliferation, differentiation and involution in adult life is a useful model system to study the role of extracellular matrix (ECM) in regulating tissue specific functions. The involution that follows weaning results in the suppression of casein gene expression, collapse of alveolar structures and degradation of basement membrane as evidenced by biochemical analysis of matrix components like proteoglycans and collagen. Differential expression of three different MMPs viz. 130 K, 68 K and 60 K with varying specificity to Col IV of basement membrane and Col I of stroma, their selective inhibition by TIMP and proteoglycans and modulation by estrogen highlight the importance of these in the remodeling of the ECM in the mammary gland. The inhibition of these MMPs by glycosaminoglycans, particularly CS and change in the concentration of CS at different stages of mammary gland development suggests the existence of a novel mechanism for the regulation of the activity of MMPs at extracellular sites.     

转基因动物乳腺生物反应器相关技术及研究进展

转基因动物乳腺生产人类重组蛋白人血清白蛋白(h SA)、人纤维蛋白原(h FIB)、人蛋白C(h PC)、人凝血因子(h F-Ⅷ)和(h F-Ⅸ)等具有较高市场潜力,使其在医学领域获得广泛应用。对转基因动物乳腺生物反应器的优势、目的基因选择、载体构建、基因工程技术、重组蛋白在肿瘤治疗上的应用、当前困境和未来前景等方面进行较为全面的综述,以期能有助于转基因动物生物反应器的研究。此外较详细地探讨了利用CRISPR-Cas基因打靶技术生产高表达量的人类重组蛋白的可能性。