疫苗

<正> 考虑了用鸡细胞生产人病毒疫苗问题。使用30个11日龄Spafas Cofal种的无马立克病毒的有胚鸡蛋的鸡胚为原始细胞悬液,并使用Cutodex3微载体。培基中含胎牛血清,或胎牛血清、鸡血清和tryptose pho-sphate肉汤,以及组织培养瓶或     

β-溶血型链球菌与银屑病发病、发生及发展的研究现状

银屑病的发病与链球菌感染的相关性近年来得到人们的密切关注.银屑病是一类由T细胞介导的自身免疫性疾病,链球菌抗原可在易感人群中诱发或加重银屑病并使银屑病慢性持续存在.从β-溶血型链球菌诱发银屑病相关的细胞壁、细胞膜、CpG DNA序列及其他相关蛋白的自身抗原及β-溶血型链球菌通过活化T细胞、抗原抗体反应途径、通过作用机体的基因改变遗传易感性诱发银屑病的可能作用途径几方面,阐述β-溶血型链球菌与银屑病发病、发生及发展的研究现状.     

细菌蛋白的免疫学特性及其作为多糖蛋白结合疫苗载体的可行性

多糖蛋白结合疫苗(polysaccharide-protein conjugate vaccine)是将病原菌的荚膜多糖与载体蛋白通过共价结合的方式制备而成的疫苗。在上市的多糖蛋白结合疫苗中,载体蛋白(carrier protein)预先接种或共同接种时可能介导免疫干扰,降低结合物中多糖的免疫应答,影响疫苗接种效果。另外,多糖作为疫苗抗原有血清型别的限制,疫苗中所含的血清型别无法保护所有型别的细菌感染。因此,考虑将细菌自身具有保护性的抗原蛋白作为载体蛋白,其中,肺炎链球菌溶血素蛋白、金黄色葡萄球菌蛋白、B群链球菌菌毛蛋白和沙门菌表面蛋白都是目前经过实验室证实的具有免疫原性的载体蛋白。现对这些细菌蛋白的免疫学特性及其作为多糖蛋白结合疫苗载体的可行性作一概述。     

肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控作用

摘要:【目的】研究肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)的调控作用。【方法】利用大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化蛋白。利用纯化后的CcpA蛋白免疫昆明小鼠并制备多克隆抗体;采用ELISA法测定抗CcpA抗体效价。随后,利用Westertn blot方法分析CcpA蛋白在肺炎链球菌中的保守性。另外,利用EMSA方法分析CcpA与cps基因座启动子区域片段的结合。最后,构建ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株;利用ELISA法测定野生D39菌 株、ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株的荚膜多糖含量。【结果】Western blot结果显示CcpA蛋白在多种血清型的肺炎链球菌均有表达,CcpA蛋白可与cps基因座启动子区域结合,且呈剂量依赖性;ccpA基因缺失时,细菌CPS含量升高,回复表达CcpA蛋白后,CPS含量显著降低。【结论】CcpA是肺炎链球菌中一种保守表达的蛋白,可通过调节cps基因座启动子负性调控肺炎链球菌荚膜多糖的表达。     

两种基于肺炎球菌蛋白质的观察性疫苗的安全性、反应原性和免疫原性:来自婴儿Ⅱ期临床随机研究的结果

正接种含有肺炎球菌蛋白抗原诸如肺炎球菌溶血素类毒素(d Ply)和组氨酸-三联体蛋白D(Pht D)的配方制剂,可扩大抗肺炎链球菌的肺炎球菌结合疫苗(PCVs)血清型相关的保护作用。在欧洲进行的这项多中心、观察者盲的Ⅱ期临床试验(NCT01204658),评估了两种含10种血清型特异性多糖结合物的观察性疫苗PHi D-CV,其分别含有10μg或30μg的d Ply和Pht D。按1∶1∶1∶     

化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白的制备

生物信息分析化脓性链球菌溶血素O(streptolysin O,Slo)蛋白结构表明,Slo蛋白除含有由461氨基酸残基组成的溶血活性结构域Thiol_cytolysin外,在N端还有一跨膜结构域。利用pET101-GENE蛋白表达系统,成功构建出表达具有Slo活性重组蛋白的重组子,采用镍柱亲和层析分离技术,纯化目的蛋白;纯化蛋白SDS-PAGE检测分析表明,重组蛋白与预测的溶血活性结构域的分子量相一致;溶血实验显示,纯化重组蛋白具有溶血活性。以纯化的重组蛋白为免疫原,对大鼠进行4次免疫,所获得免疫血清经 Elisa检测,抗Slo血清效价达到 1 ∶12 800;Western blot检测猪链球菌、马链球菌和化脓性链球菌中的链球菌溶血素结果显示,抗Slo多克隆抗体仅能与化脓性链球菌溶血素O发生反应,表明研究制备的化脓性链球菌溶血素O活性结构重组蛋白抗原具有较好的特异性,所制备的抗原Slo 可用于进一步开发抗链球菌溶血素O(ASO)试剂盒。     

肺炎链球菌TCSs中WalR的克隆表达、保守性及抗原表位分析

通过构建PET28a-WalR表达载体并在大肠杆菌BL21中表达WalR重组蛋白,以评价其对C57小鼠的免疫原性;并分析其在不同血清型肺炎链球菌中的保守性和B细胞的抗原表位。以肺炎链球菌D39血清型WalR基因为模板,构建重组质粒PET28a-WalR并转入BL21诱导表达目的蛋白质。采用Clustal X 2.1软件对WalR蛋白在不同血清型S.pn中的保守性进行分析;利用DNASTAR软件对其B细胞抗原表位进行分析。结果显示,成功构建PET28a-Wal R重组表达载体,经IPTG诱导后有大量高纯度的目的蛋白质,但其主要以包涵体形式存在;Wal R蛋白在不同血清型肺炎链球菌中高达99.4%,其B细胞抗原表位可能位于9-16、35-42、95-111、113-135、150-161、200-218等氨基酸序列位点。成功获得大量以包涵体形式表达的肺炎链球菌Wal R重组蛋白,并对其保守性和抗原表位进行了系统分析。     

细胞工程

<正> 853881 区别poly(ADP-Rib)不同结构的单克隆抗体[英]/Kawamitsu,H.…//Biochemistry.-1984,23(16).-3603～3609[译自DBA,1984,3(24),84-11867]以混于甲基化牛血清白蛋白中、并用弗氏完全佐剂乳化的多聚腺苷二磷酸核糖[po-ly(ADP-Rib)]为抗原,对BALB/c小鼠进行3次腹腔免疫注射。用聚乙二醇(PEG)     

14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中两种去除蛋白方法的比较

目的苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除14型肺炎链球菌荚膜多糖中蛋白质的效果比较。方法将3批次14型肺炎链球菌发酵培养液经超滤、乙醇沉淀等方法初步纯化后,平分成两份,分别采用苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除蛋白,通过比较多糖收获量、多糖组分检定结果、多糖分子质量、多糖抗原活性、多糖核磁共振图谱,以此评价这两种蛋白去除方法的效果。结果与苯酚抽提法相比,脱氧胆酸钠沉淀法制备的14型肺炎链球菌纯化荚膜多糖除收获量较高,蛋白和核酸杂质含量较低外,氨基己糖含量、多糖分子质量、抗原活性和多糖核磁共振图谱的检定分析结果无显著性差异(P>0.1)。结论作为14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中的除蛋白方法,脱氧胆酸钠沉淀法优于苯酚抽提法。     

肺炎链球菌粘附和毒力因子A研究进展

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）普遍定植于呼吸道,是人类重要的侵袭性病原菌之一,是社区获得性肺炎、中耳炎、脑膜炎、菌血症、鼻窦炎的主要病原菌。肺炎链球菌粘附和毒力因子A（pneumococcal adherence and virulence factor A,PavA）是肺炎链球菌早期感染和侵袭过程中关键的毒力因子。体外试验表明,缺失PavA的肺炎链球菌的突变株其粘附和侵入上皮细胞和内皮细胞的能力明显下降。作为一种保护性抗原,其诱导的细胞和体液免疫可以有效的抵抗肺炎链球菌的感染,是肺炎链球菌新一代疫苗的候选蛋白。但是,PavA在肺炎链球菌与人肺上皮细胞交互对话中作用机制的研究尚属空白,本文就肺炎链球菌粘附和毒力因子A得最新研究进展作一综述。     

产尿激酶原CHO工程细胞无血清培基的研究

近年来随着无血清培基研究的日益深入及其应用的逐步推广,无血清培基(SFM)的优点已普遍地人们所认识。就SFM在生产生物活性蛋白的应用而言,SFM成分明确、质量一致、蛋白含量低,不仅有利于提高细胞产品生产的稳定性,使产品易于纯化,同时也可使不同细胞株能各自在最有利其生长或最有利于表达目的产物的环境中持续高密度培养。因而,随着越来越     

肺炎链球菌溶血素衍生物PlyD1的安全性和免疫原性

背景：基于保守蛋白抗原的肺炎球菌疫苗具有提供扩大的抵抗肺炎链球菌的保护作用的潜力。     

含有两种常见肺炎球菌蛋白的疫苗的安全与免疫原性

<正>背景:为了提供抗肺炎球菌性疾病的广谱保护,新型的含有保守的肺炎链球菌蛋白的疫苗正在被人们开发出来。该研究评价了含有肺炎链球菌蛋白肺炎链球菌溶血素类毒素(dply)和三联组氨酸蛋白的Pht D的4种配方制剂在学步儿童中的安全和免疫原性。方法:在这项Ⅱ期临床试验中,采取了多中心,观察者盲性,在捷克的学步儿童(12~23月龄的儿童)中进行。按照随机原则(1∶1∶1∶1∶1)接受     

动物细胞无血清培基及其应用

动物细胞无血清培养是当今生物科学领域中的重要研究课题之一。无血清培基可以是完全采用已知分子结构和构型的成分组成的低蛋白或无蛋白培基,因而它不仅为研究和阐明细胞生长、增殖和分化的调节机制提供有力的工具,而且也为现代生物技术,尤其是细胞工程的应用准备了更好的条件。近几年来,有关动物细胞无血清培基的研究和应用的发展很快,本文就其现状作一概述。     

以核糖体蛋白L7/L12为分子标志物精准检测肺炎链球菌的研究

目的:以核糖体蛋白L7/L12为标志物,探索一种胶体金免疫层析法快速检测肺炎链球菌的方法。方法:分析核糖体蛋白L7/L12基因序列,构建原核表达载体,表达纯化重组蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体;利用无标记分子相互作用仪检测抗原抗体亲和力;以双抗夹心法研制胶体金免疫层析检测试纸条,并对其特异性、敏感性及稳定性进行验证分析。结果:筛选得到两株高效分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,两种单克隆抗体均与抗原有高的亲和力并且无竞争,制作的试纸最低检出限为1. 0×105CFU/ml;其与肺炎链球菌有特异性反应,而与其它9种常见呼吸道病原菌均无交叉反应;试纸条在25℃下保存12个月仍具有良好的重复性和稳定性。结论:RP-L7/L12可作为肺炎链球菌的检测标志物,以其单抗制备的胶体金免疫层析试纸可适用于肺炎链球菌的快速检测。     

疫苗

<正>本文报道了无细胞及脂多糖的抗原成分,为一多糖组分(I)和蛋白组分(Ⅱ)的复合物。(I)包含脑膜炎双球菌B血清组特异的英膜多糖。(11)包含脑膜炎双球菌血清型 2和6特异的外膜蛋白,具单一的主要成分,分子量为42000士300。这些成分对制备脑膜炎疫苗是很有     

邻苯二甲醛(OPA)法检测铝吸附疫苗中抗原含量

目的:建立快速测定铝胶吸附的疫苗中抗原含量的OPA荧光检测法。 方法:利用邻苯二甲醛(OPA)在2-巯基乙醇存在下与氨基酸的N端或L-谷氨酸侧链反应,在460nm处生成荧光衍生物的原理,建立了无需进行抗原蛋白提取的检测方法,并对该方法的特异性、线性、精密度、回收率、重复性进行考察。同时,配合钠十二烷基的硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),研究在配制过程中抗原蛋白与佐剂是否分离。结果: OPA荧光法,在抗原蛋白含量为0.02~0.16mg/ml时,线性良好,准确度达90%~115%,批内和批间相对标准偏差≤15%。电泳结果显示,CpG的加入可能会导致少量抗原蛋白从铝胶中解离。结论:该方法快速、准确、灵敏度较高,重复性好,可以应用于含铝胶疫苗制剂的实验室甚至生产质控过程。     

美国宣布制成个体基因型疫苗

<正> 位于美国布法罗的纽约州立大学中的Roswell Park Memorial Institute(RPMI)探索出一种制备疫苗的新方法,这为制备疫苗防治癌症之类的疾病开辟了新途径。以往用疫苗防治癌症未获成功。常规疫苗以弱的或死的致病微生物为基础,这些致病微生物是全部抗原或抗原的一部分,而新的疫苗却不是这样,新疫苗是以抗体防治个体决定簇。个体决定簇是     

基因工程

<正>发展了奶制品发酵生产中的重要乳酸链球菌质粒DNA的快速纯化方法。将Strepto coccus cremoris wg2一2和Streptococcus lactis MG1216在含酵母膏和DL一苏氨酸的培养基中分别在25℃和20℃培养24小时,然后离心收集细胞,加人溶菌酶和Mutanolysin溶液以除外壳。再加入Tris-HC1蔗糖溶液混均,培养于37℃经3.5分钟,将制备物冷却,     

乳房链球菌GapC蛋白的表达及其B细胞抗原表位的预测与鉴定

乳房链球菌Streptococcus uberis的GapC蛋白是一种位于该菌表面的具有甘油醛-3-磷酸脱氢酶活性的蛋白,其参与细胞活动,表现出多种生物学活性,此外还具有良好的抗原性。文中旨在对乳房链球菌GapC蛋白可能的B细胞抗原表位进行预测,分析和验证候选表位肽的免疫原性。利用S. uberis分离株RF5-1克隆gapC基因,构建重组表达质粒pET-28a-GapC,诱导表达GapC重组蛋白,并以纯化蛋白免疫家兔,获得抗GapC多抗。利用生物信息学软件预测并分析GapCB细胞抗原表位的三维结构和空间位置及对GapC蛋白及表位的同源性比较。结果表明,表达纯化了44kDa的GapC蛋白具有良好的反应性。利用表位预测软件筛选并合成针对S.uberisGapC蛋白的6个线性和3个构象优势B细胞表位多肽,三维结构的分析显示,筛选的多肽具有良好的抗原表位形成条件。以纯化的S.uberis GapC蛋白免疫家兔制备多抗,通过间接ELISA对抗原表位进行鉴定。ELISA检测结果显示,9条抗原表位肽均可不同程度地与抗GapC多抗反应,其中表位266AANDSYGYTEDPIVSSD282与多抗反应...