LC-MS/MS定量测定人体血浆中氨氯地平浓度

目的:建立定量测定人体血浆中氨氯地平浓度的HPLC-MS/MS的方法.方法:以克林霉素为内标,采用Shim-pack VP-ODS柱(150× 2.0 mm I.D.,5μm,日本Shimadzu Technologies Inc.公司)为固定相;乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(90∶10,v/v)为流动相,流速为0.4 mL/min;通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测模式进行检测.氨氯地平与内标用于检测的离子对分别为m/z409.3 m/z 238.2和rn/z 425.2 m/z 126.3.结果:氨氯地平在0.10～20.00 ng/mL范围内与峰面积比值线性范围良好(r=0.9968),定量下限为0.10 ng/mL,日内日间精密度的RSD均小于7％,平均回收率大于86％.结论:所建方法准确度较高,灵敏度好,专属性强且操作简便,可适用于氨氯地平的血药浓度测定和临床药代动力学研究.     

LC-MS/MS定量测定人体血浆中阿托伐他汀浓度

目的:建立定量测定人体血浆中阿托伐他汀浓度的HPLC-MS/MS的方法.方法:以吲哚美辛为内标,采用Shim-packVP-ODS柱(150× 2.0 mm I.D.,5μm,日本Shimadzu Technologies Inc.公司)为固定相;乙腈-0.5％甲酸溶液(90:10,v/v)为流动相,流速为0.3 ml/min;通过电喷雾离子源(ESI),以正离子多反应监测模式进行检测.阿托伐他汀与内标用于检测的离子对分别为m/z 559.4 m/z 250.3和m/z 358.3 rn/z 139.2.结果:阿托伐他汀在0.10～20.00 ng/ml范围内与峰面积比值线性范围良好(r=0.9962),定量下限为0.10 ng/ml,日内日间精密度的RSD均小于12％,平均回收率大于71％.结论:所建方法准确度高,方法灵敏,专属性强且操作简便,可适用于阿托伐他汀的血药浓度测定和临床药代动力学研究.     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中的野黄芩苷含量

目的:建立LC-MS/MS的分析方法测定大鼠血浆中的野黄芩苷,研究灯盏生脉胶囊中野黄芩苷在大鼠体内的药动学行为。方法:以噻氯匹定为内标,血浆样品经1%甲酸乙腈沉淀蛋白处理后,用LC-MS/MS法测定血浆中的野黄芩苷浓度。结果:野黄芩苷线性范围为1.31～670.00 ng·mL-1(γ0.999),最低定量浓度为1.31 ng·mL-1,回收率、日内、日间考察均符合生物样品分析要求。实验结果显示,野黄芩苷在大鼠体内出现多峰现象。结论:建立的LC-MS/MS定量分析方法灵敏、准确,可用于大鼠血浆中野黄芩苷的测定及其药代动力学研究。     

LC-MS/MS测定小鼠血浆中多靶点抗AD bis-MEP-乙二酰胺杂合物ZLA浓度及药动学研究

目的:建立检测小鼠血浆内新型多靶点抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)药物双美普他酚-乙二酰胺杂合物(ZLA)浓度的高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS),并研究其在小鼠体内的药代动力学。方法:样品经甲醇沉淀去蛋白,应用Waters Xbridge C18色谱柱(2.1×100 mm,3.5μm),以甲醇-水(含5 m M甲酸铵,p H 9.8)(85:15,v/v)为流动相,流速0.25 m L/min;采用电喷雾(ESI)离子源,选择正离子模式多反应监测,待测物分别为m/z 304.3→107.0(ZLA)和m/z 621.7→232.1(内标)。分别给予KM小鼠腹腔和尾静脉注射ZLA 5mg/kg,不同时间点采集血浆用于ZLA定量分析。结果:ZLA和内标保留时间分别为3.2 min和2.5 min。血浆中ZLA线性范围为1-1000 ng/m L。血浆中提取回收率超过91%,日内和日间精密度RSD均小于6%。药动学研究结果显示,腹腔注射时ZLA可快速分布到血浆中,在10.2 min达到峰值,且能达到良好的生物利用度(47.6%)。结论:本研究建立的ZLA血药浓度测定方法快速、灵敏,特异性好,并成功应用于小鼠血浆中ZLA的药代动力学研究。本研究资料将为ZLA在AD治疗中的进一步临床前评估提供依据。     

基于LC-MS/MS分析马缨杜鹃花代谢物的变化

为分析马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)花开花至凋谢过程中的代谢产物差异及其通路,该文采用LC-MS/MS技术对其花苞期、开裂期、传粉期、盛开期、衰老期和凋谢期的化学成分进行非靶向代谢组学分析。结果表明:(1)共鉴定到973种代谢物,主要包含黄酮类、有机酸、酚酸类、氨基酸及其衍生物、脂类、生物碱等。(2)主成分分析(PCA)表明样本间代谢物存在差异,结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)、t检验的P值和单变量分析的差异倍数(fold-change)筛选差异代谢物(VIP>1,P<0.05,Fc>2或Fc<0.5),涉及591种,在马缨杜鹃花期进入衰老期和凋谢期后差异代谢物数量和表达量显著上升,其中花苞期至开裂期差异代谢物的表达主要呈现下调,而进入衰老期和凋谢期后差异代谢物的表达主要呈现上调。(3)KEGG注释到68条代谢通路,其中差异代谢物极显著富集(P < 0.01)通路3条,包括苯丙素类生物合成、植物激素的生物合成和类黄酮生物合成。(4)结合苯丙素类、黄酮类等有效成分生物合成通路共筛选到10种代谢物包括苯丙氨酸(L-phenylalanine)、反式肉桂酸(trans-cinnamic acid)、查耳酮(chalcone)、柚皮素(naringenin)、对香豆酰基莽草酸(p-coumaroyl shikimic acid)、阿魏酸(ferulic acid)、松柏醇(coniferyl alcohol)、芥子酸(sinapic acid)、紫丁香苷(syringin)、槲皮素(quercetin)。此外,有效成分的差异代谢物表明苯丙素类生物合成代谢活动随马缨杜鹃花的发育逐渐增强,而黄酮类化合物生物合成逐渐减弱,这些关键差异代谢物可能对马缨杜鹃花的发育有重要的调控作用。该研究为马缨杜鹃花开花至凋谢进程中的有效成分代谢途径活性物质的研究提供了代谢组学基础,为进一步研究马缨杜鹃花花期调控的分子机理提供参考。     

小型猪血浆中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的LC-MS/MS 同时测定方法的建立及在药动学研究中的应用

目的：建立同时测定小型猪血浆中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的LC-MS/MS 法,并研究小型猪皮肤外用二丙酸倍他米松乳膏后,二丙酸倍他米松及倍他米松的药动学特征。方法：血浆样品经酸化后以乙醚- 环己烷（4 ∶ 1）提取,LC-MS/MS 分析,以Hedera ODS-2（150 mm×2.1 mm,5 μm）为分析柱,流动相为5 mmol?L-1 醋酸铵水溶液（含0.1% 乙酸）– 甲醇,梯度洗脱。二丙酸倍他米松、倍他米松及内标布地奈德的监测离子对分别为m /z 563.2（[M+CH3COO]-）→ 483.1、m /z 451.2（[M+CH3COO]-）→ 361.0 和m /z 489.3（[M+CH3COO]-）→ 357.1。对小型猪外用二丙酸倍他米松乳膏后其血浆中二丙酸倍他米松及代谢物倍他米松的浓度进行测定,并计算主要药动学参数。结果：二丙酸倍他米松血药浓度在26.85~644.4 ng?L-1 范围内线性关系良好,倍他米松血药浓度在10.62~637.2 ng?L-1 范围内线性关系良好。结论：本方法专属性强、简便、灵敏,可用于血浆样本中二丙酸倍他米松及其代谢物倍他米松的测定及药动学研究。     

胃内容物中甲卡西酮LC-MS/MS检验方法研究

目的:建立胃内容物中甲卡西酮及其代谢物卡西酮的LC-MS/MS检验方法。方法:以双苯戊二氨酯(SKF525A)为内标,Column Eclipse Plus C18色谱柱(1.8μm, 100 mm×3 mm)为固定相,流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,流速为0.3m L/min,进样量为1μL。通过电喷雾离子源(ESI),利用正离子多反应监测模式(MRM)进行检测。结果:胃内容物中甲卡西酮检验方法线性范围为1-5000 ng/g,标准曲线方程Y=0.026X+0.4501(R2=0.9998),检出限为0.5 ng/g,定量限为1.0 ng/g;卡西酮的检验方法线性范围为2-5000 ng/g,标准曲线方程Y=0.0099X+0.1576(R2=0.9997),检出限为1.0 ng/g,定量限为2.0 ng/g。结论:该方法操作简便,检测灵敏度较高,可用于甲卡西酮中毒案件胃内容物中甲卡西酮及其代谢物卡西酮的检验。     

微生物代谢组学的前处理及分析技术

微生物代谢组学主要研究细胞生长或生长周期某一时刻细胞内外所有低分子量代谢物。分析技术的不断发展促进了微生物代谢组学研究的进展。本文结合微生物样品前处理方法, 综述了目前研究中所采用的各种分析技术的特点与应用, 并展望微生物代谢组学研究中分析技术的发展趋势。     

LC-MS/MS法检测人头发中利培酮及其代谢物9-羟利培酮含量的实验研究

目的:建立高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(LC-MS/MS)法检测人头发中利培酮(RIP)及其代谢物9-羟利培酮(9-OH-RIP)含量的方法。方法:采用同位素内标氘4-利培酮(RIP-d4)及氘4-9-羟利培酮(9-OH-RIP-d4),流动相A为10 mmol/L醋酸胺溶液(甲酸调p H值为4.0),流动相B为乙腈,A/B=70/30,流速为0.3 m L/min,等度洗脱4.00 min。色谱柱为安捷伦Zorbax SB C18(2.1×50 mm,1.8μm),柱温30℃。准确称取20 mg丙酮清洗过晾干剪碎成粉末的头发样本,加1N氢氧化钠(Na OH)超声2 h,等量酸中和后,加200μL1N氢氧化钠溶液及5.0 m L的甲基叔丁基醚(MTBE)提取涡旋1分钟,3000×g离心5 min后取上清液在40度水浴下氮气吹干后用100μL流动相复溶,进样2μL经LC-MS/MS检测。MRM监测离子对:RIP:m/z 411.2→191.0,9-OH-RIP:m/z 427.2→207.1,RIP-d4:m/z 415.2→195.2,9-OH-RIP-d4:m/z 431.2→211.1。结果:利培酮及9-羟利培酮线性范围分别为0.5-25 ng/mg,0.0025-0.15 ng/mg,提取回收率均70.0%,方法回收率均在85.0%-115.0%之间,线性r均0.999,精密度和重现性RSD均15%。结论:本研究建立了采用LC-MS/MS法检测人头发中利培酮及9-羟利培酮含量的方法,该法快速、简单、准确、重现性好。     

泊沙康唑药动学-药效学及其治疗药物监测研究进展

泊沙康唑为新一代三唑类广谱抗真菌药,临床主要用于侵袭性曲霉菌病、念珠菌病的预防和难治性口咽念珠菌病的治疗,具有抗菌 活性高、耐受性好、不良反应少等特点,但其口服后生物利用度具有较大的个体差异。综述泊沙康唑混悬液的药动学影响因素、不同患者 人群的药动学特征以及群体药动学特征、药动学 / 药效学特性、治疗药物监测对临床疗效和不良反应的重要影响,以指导临床个体化用药, 提高用药的有效性和安全性。     

LC-MS/MS分析人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量

目的：采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量。方法建立人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型并于不同时间段检测共培养模型中胶霉毒素的含量。以支气管上皮细胞单独培养为对照组,分别于12h、24h、36h收集对照组、AF293（烟曲霉标准株）共培养组、AFB5233WT（烟曲霉野生株）及AFB5233ΔGlip（烟曲霉胶霉毒素基因敲除株）共培养组细胞培养上清液,采用LC-MS/MS检测胶霉毒素的含量。结果共培养模型中胶霉毒素水平随培养时间增加而逐渐升高（P〈005）,胶霉毒素回收率为687%~726%。结论该方法快速、灵敏、结果准确,适用于测定人支气管上皮细胞与烟曲霉共培养模型中胶霉毒素的含量。     

奶糖的样品前处理优化与微生物检测结果影响因素相关性讨论

本文的主要研究目的是找到针对不同奶糖样品最适合的前处理方法、快速有效的检测方法以及影响检测结果的相关性因素。通过溶化温度、溶化方式、溶化时间等不同实验条件,找出了能满足不同奶糖菌落总数检测要求的样品前处理方法,即将25 g奶糖样品称取到预温至45℃的225 m L灭菌生理盐水中,在45℃气浴恒温振荡器中以220 r/min振荡11 min,使奶糖完全溶化。同时由于奶糖中有些菌落会蔓延生长,为了不影响计数结果,在倾入平板计数琼脂培养基冷却后再在其表面覆盖一层5 m L培养基抑制菌落蔓延,对抑制效果不佳的使用光学放大菌落计数器计数,以保证最终检测结果的准确性。不同奶糖中水分、营养含量及pH相差不大,实验结论表明与其菌落总数检测结果高低无相关性。通过36℃培养24 h与48 h菌落总数检测结果没有明显差异,可以将培养24 h的检测结果作为参考。     

长效化融合蛋白药物及其药动学分析技术的研究进展

融合蛋白技术应用于生物制药行业已超过25年,其目的为改善原来天然蛋白的性质,从而具有新的理化特征和生物学功能,其中最为显著的特点是改善了小分子蛋白及多肽半衰期短的缺陷。基于该技术所诞生的融合蛋白类药物已成为当前生物药研发的热点。结合已上市融合蛋白类药物,通过与传统多肽蛋白类药物比较,重点突出融合蛋白类药物自身特点,主要从融合抗体Fc段和人血清白蛋白以延长小分子蛋白及多肽半衰期的角度对融合蛋白药物长效化策略进行评述;对融合蛋白类药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄的显著特征进行概述;综述该类药物在体内的分析技术并指出当前分析技术的优缺点及发展方向,为长效化融合蛋白药物的设计、分析研究与开发提供依据和思路。     

生物质谱分析法在脂质组学的应用

脂质与许多慢性病(如糖尿病、高血压)和精神系统疾病(如阿尔茨海默病)等有关。脂质组学是以现代生物技术为手段,对生物体中的全脂质进行定性和定量的一门新兴学科。目前,生物质谱分析法是对脂质谱进行分析和定量的最有效方法,国内对脂质组学的系统研究还比较匮乏。综述脂质组学的概念与分类,探究不同的生物样品前处理方法,系统介绍近几年国际上生物质谱分析法在脂质组学的应用,并对脂质组学的发展趋势进行展望。     

UPLC-MS/MS测定小麦茎秆木质素单体交联结构的方法

建立一种利用UPLC-MS/MS对小麦茎秆木质素单体交联结构进行定性与定量分析的方法,为木质素的开发利用提供科学依据。采用ACQUITY UPLC^?BEH C₁₈(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱分离,以超纯水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,选择MRM(多反应监测模式)进行检测。结果表明,9种木质素单体交联结构在相关线性范围内线性良好(R²=0.998 9),回收率为91.67%-100%,相对标准偏差(RSD)为0.24%-2.10%。将该方法应用于拔节后14 d小麦茎秆中9种木质素单体交联结构特性的检测,结果显示,样品中9种木质素单体交联结构的保留时间与标准品的保留时间相同,G(8-8)G是检出质量浓度最高的木质素单体交联结构,质量浓度范围为9.53-10.12 ng/g。该方法专一性强,灵敏度高,适用于对小麦茎秆9种木质素单体交联结构进行准确定性定量。     

瘤胃微生物RNA提取中样品前处理方法的优化

通过优化瘤胃液前处理方法,提高瘤胃微生物RNA提取数量与质量。试验优化4个前处理条件,共组合形成5个处理组。前处理完成后,利用Trizol进行RNA提取,检测RNA浓度和完整度(RIN)。结果显示,提取瘤胃内容物和瘤胃菌体RNA浓度和完整度的影响没有显著差异(P0.05)。液氮保存的样品提取的RNA浓度和完整度均显著(P0.05)高于RNA保护液保存的样品。解冻处理对RNA浓度的影响无显著差异(P0.05),但是不解冻处理提取的RNA完整度显著高于解冻处理(P0.05)。液氮冷冻研磨提取的RNA浓度(P0.05)显著高于常温研磨,但是对RNA完整度的影响没有显著差异(P0.05)。瘤胃内容物、液氮速冻、不解冻处理结合冷冻研磨方法所提取RNA的RIN值为9.43,完整度最高。瘤胃内容物、液氮速冻、解冻离心收集菌体结合冷冻研磨方法所提取的RNA浓度为1 048 ng/μL,为最高浓度。因此,瘤胃内容物直接液氮速冻并在不解冻条件下冷冻研磨,所提取的RNA效果最好,可用于后续宏转录组学试验。     

基于UPLC-MS/MS技术的代谢组学方法研究麸皮对杨树桑黄代谢的影响

桑黄孔菌属.Sanghuangporus是一类具有重要药用价值的大型真菌,目前被国际公认为抗肿瘤效果最好的药用真菌之一.本研究以添加麸皮栽培的杨树桑黄Sanghuangporus vaninii子实体为研究对象,基于液质联用技术的广泛靶向代谢组学研究,从杨树桑黄子实体中检测出355种代谢产物,差异代谢物86种,上调51...     

基于机制的生理药动- 药效学模型研究进展

生理药动- 药效学模型通过对生物学过程的描述,可预测体内药物的吸收、分布、代谢、排泄以及进一步的生理生化反应。这类模型是通过已知的生化/ 生理基础来构建,采用了一种“自下而上”的建模方法,并利用数学方法对生理过程及药物的作用机制作出准确的描述。其中药效学部分,根据预测目的和药物作用的复杂性,可进一步分为基于经验的和基于机制的效应模型,这两种模型均可与基于机制的生理药动学模型相连接,最终预测药物的体内处置和效应。基于机制的生理药动- 药效学模型的优势在于：可外推性、新的影响因素的可纳入性以及可用于未知领域的预测等。随着实验技术的不断革新,药物作用机制的逐渐明确,这类模型越来越多的被成功应用于药物研发及风险评估中。综述生理药动- 药效学模型的构建策略与分类以及在药物研发和风险评估中的应用研究。     

万氏牛黄清心缓释胶囊在比格犬体内药动学研究

目的:研究比格犬单剂量交叉口服万氏牛黄清心缓释胶囊和市售普通丸给药的药动学.方法:采用高效液相色谱法测定10只比格犬单剂量口服万氏牛黄清心pH-依赖型梯度释药胶囊和市售丸后血浆中盐酸小檗碱的血药浓度.血浆样品采用碱化后乙醚萃取浓缩方法制备.以青藤碱为内标物质,流动相采用乙腈-0.1 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-磷酸(30:70:0.01),检测波长为262nm,流速为1.0mL·min-1.结果:血浆中内源性物质对盐酸小檗碱及青藤碱的测定无干扰;最低检出限为1.25ng·mL-1;盐酸小檗碱在1.25～250ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,r=0.9990;绝对回收率为82.94%～88.36%,方法回收率为89.28%～92.29%;日内精密度RSD≤4.87%、日间精密度RSD≤7.03%.缓释胶囊和普通丸药动学参数AUC0∞分别为668.02和809.95 h·ng·ml-1,MRT分别为5.27和4.34h,缓释胶囊相对于普通丸的生物利用度为84.6%.结论:建立的测定方法处理简单,无干扰,灵敏度高,适合测定中药缓释制剂的药物动力学研究.万氏牛黄清心缓释胶囊具有明显的缓释作用,药物在体内呈梯度释放.     

茉莉酸及其前体12-氧-植物二烯酸的HPLC-MS/MS检测方法

茉莉酸是植物体内重要的伤反应特异激素,含量极低,但作用较大。当植物受到机械伤害时,茉莉酸调控一系列应激反应。12-氧-植物二烯酸(OPDA)是茉莉酸合成途径中的重要前体,与茉莉酸有密切的关系。该研究建立了一种HPLC-MS/MS分析检测方法,可同时检测植物材料中茉莉酸及其前体OPDA含量。利用该方法建立的标准曲线具有良好的线性相关性,相关系数达0.991 9–0.999 5,回收率范围为91.91%–101.56%。该方法同时具有较好的检测灵敏度,2种化合物的最低检测限为3.218和34.129 pmol。研究结果说明该方法切实可靠且具有较好的适用性。利用该方法检测了4种不同植物样品中目标化合物的含量,结果表明该方法能够用于不同植物材料中这2种活性化合物含量的检测分析。