LIN28A在GT1-7细胞中过表达对性发育相关基因的影响

[目的]在GT1-7细胞过表达LIN28A,研究其与性发育相关基因表达是否存在调控关系; RNA-seq发现LIN28A参与调控性发育的信号通路和基因。[方法]构建LIN28A慢病毒过表达载体,转染GT1-7细胞,Real-Time PCR检测LIN28A和性发育相关基因在mRNA水平表达变化;将过表达LIN28A的GT1-7细胞进行RNA-seq、生物信息学分析、Real-Time PCR验证,找到影响性发育的信号通路和基因。[结果]与对照相比,LIN28A在GT1-7细胞过表达18倍(P <0. 001),KISS1在mRNA水平显著升高(P <0. 01); KEGG分析,LIN28A相关的差异基因在MAPK信号通路差异显著,MAPK通路筛选到多个性发育相关基因(Fgf21、JUN、Cyp1a1、Rasgrp2),Real-Time PCR验证它们在mRNA水平差异显著(P <0. 05)。[结论]成功构建LIN28A慢病毒过表达载体,LIN28A在GT1-7细胞中过表达会促进KISS1的表达,并且LIN28A可能通过MAPK通路调控性发育。     

过表达Lin28a/Lin28b对let-7家族活性的影响

研究在HeLaS3细胞中过表达Lin28a/Lin28b对let-7家族miRNA表达水平和活性的影响。首先,构建Lin28a和Lin28b的表达载体pAAV2neo-Lin28a和pAAV2neo-Lin28b,分别转染HeLaS3细胞并筛选获得Lin28a和Lin28b的稳定表达细胞株HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b。然后,以pAAV2neo-Gluc-(Fluc)为基本骨架,构建并获得检测let-7家族miRNA活性的8种质粒型载体,并包装为相应的重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV),作为检测miRNA靶序列介导的转录后抑制活性的传感器,命名为Asensor。在此基础上,以HeLaS3细胞为对照,用Western blot检测HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b细胞中Lin28a和Lin28b表达水平,用QRT-PCR测定let-7家族各成员表达水平,用Asensor检测let-7家族各成员活性。Western blot结果显示,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b均能有效地表达Lin28a和Lin28b蛋白;QRT-PCR检测结果显示,相比于HeLaS3细胞,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a细胞中let-7家族各成员表达水平都下降(除let-7e外),但不同成员下降幅度存在差异;Asensor检测结果显示,let-7家族所有成员活性水平都下降,但不同成员下降幅度也存在差异,且同一成员活性水平与表达水平及其下降趋势也不一致。相比于HeLaS3细胞,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b细胞中let-7家族成员的表达和活性水平均明显下降,但表达水平的下降幅度比HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a细胞大,而活性的下降幅度却与之相近。本研究建立了一种检测和比较miRNA靶序列介导的转录后抑制活性的方法,首次研究了过表达Lin28a和Lin28b对细胞中的let-7家族miRNA活性影响,并发现Lin28a和Lin28b对let-7家族miRNA表达水平的影响和对其相应活性的影响不一致性,说明在检测miRNA表达水平的同时检测miRNA活性能更全面揭示miRNA的调节功能,为进一步研究let-7家族的调控机制奠定了基础。     

靶向Wnt1的miRNA与circRNA及其靶基因间相互作用的生物信息学分析

为对靶向Wnt1的7种mi RNAs进行circ RNAs及其靶基因的预测,同时分析其与circ RNAs及靶基因间的相互作用,分别采用Starbase及mi RWALK软件,对文献报道的靶向Wnt1基因的let-7e、mi R-21、mi R-34a、mi R-122、mi R-148a、mi R-148b与mi R-152等7种mi RNAs的circ RNAs和对应的靶基因进行生物信息学预测.利用Cytoscape 3.2.1对这7种mi RNAs和预测所得到的circ RNAs及对应的靶基因进行网络分析.并进一步对预测到的靶基因通过DAVID软件进行通路分析.Starbase软件对这7种不同mi RNAs所预测的靶circ RNAs的数量分别为58、15、41、20、28、28、28个.分别比较mi RWALK中7~9个以上软件共有的mi RNAs及其与靶基因的关系,发现CHD7基因是唯一一个在三种不同预测范围内与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b和mi R-152等4种mi RNAs相对应的靶基因.CNOT6、NBEA、ZFYVE26与ZDHHC17是在两种不同预测范围内与至少4个mi RNAs相对应的靶基因.在7种mi RNAs所预测靶基因相关的KEGG信号通路中,7~9个软件以上共有的信号通路为Focal adhesion信号通路、MAPK信号通路、Notch信号通路与TGF-beta信号通路.在MAPK信号通路中DUSP1与MRPS35_hsa_circ_001042均分别是与mi R-21、mi R-148a、mi R-148b及mi R-152等4种mi RNAs相互作用的靶基因与circ RNA.本研究对靶向Wnt1的mi RNAs及其相互作用的circ RNAs、靶基因与信号通路等进行了网络分析与预测,为进一步分析它们之间的相互作用奠定了基础.     

miR-365在肿瘤中的研究进展

在了解肿瘤信号通路方面虽已取得了实质性的进展,但由于肿瘤的致瘤通路、耐药性等方面的复杂性,导致仍然缺乏治疗肿瘤的有效手段。micro RNAs(mi RNAs)的发现为解决这个问题提供了新的希望。mi R-365作为mi RNAs中的重要一员,在肿瘤中频繁的异常表达已经证明其与肿瘤的发生发展及预后息息相关。因此深入研究mi R-365在肿瘤中的表达特点及与相关基因的调控关系将为了解肿瘤细胞周期、增殖、凋亡等生物学功能提供更有效的视点,为肿瘤的临床治疗提供潜在的治疗靶点。现就mi R-365在肿瘤中的表达及与信号通路之间的调控作一简要综述,以揭示mi R-365在肿瘤细胞内的表达调控情况。     

YAP/TAZ对发育和肿瘤的调控及其功能的研究进展

Hippo通路是一种在进化中形成的保守的蛋白激酶级联通路,它与发育中器官的大小和肿瘤的形成有关。Hippo通路的中枢是从肿瘤抑制子Hippo到原癌蛋白YAP/TAZ的激酶级联反应。YAP/TAZ是Hippo通路下游的主要的效应分子,它们广泛表达于多种组织器官中。在哺乳动物细胞中,Hippo通路激酶级联反应通过对YAP/TAZ磷酸化作用,促使其从细胞核转入细胞质中,从而抑制了YAP/TAZ的功能作用。TEAD家族转录子被鉴定为YAP/TAZ发挥生物学功能的重要调节因子。YAP/TAZ的失调引起的相关的基因的表达改变,将会影响细胞的增殖,分化,以及凋亡,从而会影响器官的大小以及肿瘤的形成。本文综述Hippo通路的最新进展,重点关注的是该通路中的YAP/TAZ调控的缺失对发育缺陷和肿瘤的影响。这将为我们研究再生医学,组织工程技术,肿瘤的干预防治提供新的思路与策略。     

microRNA及Wnt 信号通路在急性淋巴细胞白血病中的作用研究进展

micro RNAs(mi RNAs)是一种内源性的基因调控元件,参与细胞增殖、分化、凋亡等多种重要生物学过程。在许多实体瘤和血液系统恶性肿瘤中均存在mi RNA异常表达,说明mi RNA可能参与肿瘤的发生及发展。Wnt通路是一条经典的信号通路,其异常激活与多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤的发生发展密切相关。急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)是一种常见的成人血液系统恶性肿瘤,现已发现多种mi RNA在ALL中异常表达,并与发病、治疗效果及预后有关。在ALL中可见Wnt信号通路的异常激活及通路抑制剂的异常失活,并且这些变化与ALL的预后密切相关。本文就mi RNAs和Wnt信号通路在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中的作用相关研究进展作一综述,以提供靶向治疗ALL的新思路。     

circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移

目的 鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA (circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法 通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果 在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论 circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实c...     

Skp2相关衰老信号通路的抗肿瘤机制

Skp2蛋白属于F盒蛋白家族的成员,在泛素蛋白酶体降解通路中起到特异性识别底物的作用.大量研究表明,Skp2在多种恶性肿瘤中高表达,具有原癌基因功能.通过抑制肿瘤细胞中Skp2的活性,启动衰老信号通路而抑制肿瘤的生长,Skp2有望成为抗肿瘤的新靶标.     

Hippo信号通路核心组分lats1:一种新的肿瘤分子标记和潜在治疗靶点

大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,lats1)是hippo信号通路中的关键组分之一,通过下调靶基因yap抑制肿瘤的发生和发展。研究发现,lats1在多种肿瘤组织中表达下调或缺失,被认为是一个抑癌基因。因此,lats1很可能成为一个新的恶性肿瘤分子标记和治疗靶点,该文就lats1在该领域的研究进展作一综述。     

LIN28基因对人胰腺癌细胞PANC1和SW1990增殖和迁移的影响

该文目的为研究LIN28基因对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,揭示其在胰腺癌发生发展中的作用。实验发现,胰腺癌细胞中LIN28的表达模式与细胞增殖和迁移能力有关,将干扰质粒LIN28 sh RNA转染入LIN28高表达的PANC1细胞,将过表达载体3×Flag-LIN28转染入低表达的SW1990细胞中,采用RT-PCR和Western blot实验验证基因沉默或过表达的效果,并运用CCK-8法分析细胞的增殖能力并绘制细胞生长曲线,Transwell实验检测细胞迁移率。结果显示,下调LIN28后,PANC1细胞中LIN28基因的表达量明显降低,细胞增殖减慢,迁移减少;而上调LIN28后,SW1990细胞中LIN28基因的表达量明显增高,细胞增殖加快,迁移增加。由此说明,沉默LIN28基因可以抑制PANC1细胞增殖和迁移,过表达LIN28基因可以促进SW1990细胞增殖和迁移,这为阐明LIN28在胰腺癌演化过程中的机制奠定了实验基础。     

miR-124 在消化系统肿瘤研究中的进展

消化系统肿瘤严重危害人类健康,是导致死亡的主要原因,其一直是科学研究的一个重点,也是难点。Micro RNA(mi RNA)是一类广泛存在于生物体内的内源性、非编码、单链小分子RNA,参与调控生物体的几乎所有生命活动,包括多种生理和病理活动。目前研究认为,mi RNAs参与肿瘤的发生和进展。mi R-124是mi RNAs家族的一员,是一个相当保守的mi RNA,在多种肿瘤包括消化系统肿瘤的细胞或组织中均表达下调,扮演着类似抑癌基因的角色,在该类肿瘤的发生、发展以及预后中发挥重要作用。本文就mi R-124在消化系统肿瘤研究中的进展作一综述。     

Let-7a下调k-Ras和c-Myc癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

目的：MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现,1et-7a 在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过程中,let-7a扮演着不可替代的角色。本文主要研究let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因,寻求肾癌新的治疗途径有重要意义。方法：应用化学合成的let-7a 模拟物（mimics）用脂质体Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染786-O 和Caki-1肾癌细胞株,转染48 小时后采用荧光定量RT-PCR的方法检测let-7a 及c-Myc、k-Ras mRNA的表达情况,Western blot 检测这两株肾癌细胞转染了let-7a mimics 后c-Myc 及k-Ras 蛋白的表达变化;转染let-7a mimics 后分别在24、48、72 小时三个时间点用CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。结果：786-O 和Caki-1 肾癌细胞株中let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞株HK-2（P〈0.05）; 转染了let-7amimics的786-O 和Caki-1 肾癌细胞株,RT-PCR 及Western blot 结果显示c-Myc、k-Ras 在基因及蛋白的表达水平明显下调（P〈0.05）;CCK-8 检测结果显示转染了let-7a mimics的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制,与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异,let-7a 通过调控c-Myc、k-Ras的表达能抑制肾癌细胞增殖。Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的一种有效治疗手段。     

应用蛋白质组学技术筛选胃癌SGC-7901细胞中的let-7a功能相关蛋白

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC-7901/let-7a细胞的蛋白质表达谱改变的研究,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定了10个差异表达蛋白质.这些差异表达蛋白质可能是let-7a功能相关蛋白质,其中抗氧化蛋白2、胰岛素样生长因子结合蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、四氢叶酸合成酶、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Rho-GTPsae激活蛋白4表达上调,Skp2蛋白、血小板黏附蛋白CD41、纤维连接蛋白、Cks1蛋白表达下调.部分差异表达蛋白质如细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Skp2蛋白和纤维连接蛋白经蛋白质印迹分析进行了验证.在SGC-7901/let-7a中鉴定的10个差异表达蛋白质涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为let-7a功能相关蛋白质,为阐明let-7a表达下调在胃癌发病中的机制提供了重要线索.     

Let-7a 下调 k-Ras 和 c-Myc 癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

摘要 目的： MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子 RNA, 对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现, 1et-7a 在细胞内 影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用, 尤其是在肿瘤的发展过程中, let-7a 扮演着不可替代的角色。本文主 要研究 let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、 抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因, 寻求肾癌新的治疗 途径有重要意义。 方法： 应用化学合成的 let-7a 拟物（ mimics ）用脂质体 Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染 786-O 和 Caki-1 肾 癌细胞株, 转染 48 小时后采用荧光定量 RT-PCR 的方法检测 let-7a 及 c-Myc、 k-Ras mRNA 的表达情况, Western blot 检测这两株 肾癌细胞转染了 let-7a mimics 后 c-Myc 及 k-Ras 蛋白的表达变化;转染 let-7a mimics 后分别在 24、 48、 72 小时三个时间点用 CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。 结果： 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株中 let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞 株 HK-2 （P<0.05 ） ; 转染了 let-7amimics 的 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株, RT-PCR 及 Western blot 结果显示 c-Myc、 k-Ras 在基因及 蛋白的表达水平明显下调 （P<0.05 ） ; CCK-8 检测结果显示转染了 let-7a mimics 的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制, 与 阴性对照组比较差异有统计学意义 （P<0.05 ）。结论： Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异, let-7a 通过调控 c-Myc、 k-Ras 的表达能抑制肾癌细胞增殖。 Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调 Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的 一种有效治疗手段。     

程序性死亡配体PD-L1在肿瘤中调控机制的研究进展

肿瘤新发病例逐年增长，严重影响居民身体健康并带来了沉重的医疗负担。肿瘤免疫治疗近年来异军突起，目前肿瘤免疫治疗的主要思路是通过抑制剂或对应抗体来干扰PD-1/PD-L1轴，从而解除对T细胞免疫状态的抑制，发挥杀伤肿瘤细胞的功能，因此以PD-1/PD-L1为靶点的免疫调节对抗肿瘤有重要意义。PD-L1通常在各种恶性肿瘤中表达上调，最新证据表明存在多种潜在机制或信号通路调控PD-L1表达，基于此开发特异的小分子抑制剂在抑制关键致癌信号通路的同时，还能抑制PD-L1表达，从而实现免疫检查点抑制剂联合靶向药物疗法的突破，发挥协同抗肿瘤效应。本文就癌症中PD-L1在基因突变、表观遗传修饰、转录和翻译后修饰水平的调控机制展开论述，为进一步开展联合靶向疗法提供理论基础。     

Notch途径与宫颈癌细胞系的增殖调控

近年来在许多肿瘤细胞系中发现Notch基因的表达失常,失控的Notch信号对维持肿瘤细胞表型性起着重要作用。在宫颈癌细胞中,异常上调的Notch信号通路由人乳头瘤病毒(HPV)相关蛋白“E6/7”介导,并能与之发生协同作用维持肿瘤的生长及异型性,另一方面,激活的Notch1又能通过抑制Fos蛋白家族进而抑制“E6/7”的表达,并能通过抑制E47蛋白引起细胞增殖抑制。结合对不同时期宫颈癌细胞的研究结果,目前认为低水平的Notch1表达对维持发生癌变的角质细胞的生存相当重要,过多或过少的Notch1信号都会对细胞增殖造成负面影响。     

Frizzled-7靶向治疗的抗肿瘤研究进展

Wnt信号通路在物种进化过程中高度保守,并在肿瘤的发生发展中发挥至关重要的作用。Frizzled(Fzd)蛋白是Wnt受体家族,该家族中有10个成员蛋白,Frizzled-7 (Fzd7)为成员之一。研究表明,Fzd7在多种恶性肿瘤中被显著上调,通过激活Wnt通路调控细胞增殖、肿瘤侵袭与迁移,并影响肿瘤细胞干性。Fzd7的上调与肿瘤化疗耐受以及患者的低生存率显著相关,靶向Fzd7在体内外均表现出了良好的抗肿瘤效果。因此,Fzd7是恶性肿瘤潜在的治疗靶点。该文对Fzd7在癌症中的表达与功能以及Fzd7的靶向治疗作一综述。     

磷脂酰乙醇胺结合蛋白的基础和临床研究

磷脂酰乙醇胺结合蛋白 ( phosphatidylethanolamine-binding protein, PEBP )是一类高度保守的多功能蛋白质,广泛存在于不同物种中.在同一物种的多种组织和不同类型细胞中均有表达.PEBP在多条信号转导通路中具有重要的调控作用.PEBP通过与Raf-1相互作用抑制MAPK信号通路的活性,因此也被称为Raf-1激酶抑制蛋白(RKIP);同时,PEBP还参与了PKC、G蛋白偶联受体和NF-κB信号通路的调控.在临床医学研究中发现,PEBP作为海马胆碱神经刺激肽(HCNP)的前体蛋白在阿尔采末病(AD)的形成过程中发挥重要作用.由于PEBP可以抑制肿瘤转移和促进肿瘤细胞凋亡,因此也被认为是一种肿瘤转移的抑制基因.新近研究表明,PEBP参与细胞周期的纺锤体检查点的调控,PEBP的缺失可导致染色体异常.在直肠结肠癌,PEBP基因启动子区的高甲基化可导致其不表达,这可能是癌症转移的分子基础.     

SOCS-1基因与宫颈癌关系的研究新进展

SOCS-1基因定位在染色体16p13.3,编码的SOCS-1蛋白是细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)家族的成员之一,最初研究认为SOCS-1主要通过对JAK/STAT信号通路的负性调节从而对多种细胞因子、激素的进行调节,近来有研究表明SOCS-1同样能下调TLR信号通路的活性.细胞因子及TLR信号通路在细胞的生长、成熟、分化及机体的免疫调节中发挥了重要的作用.在多种恶性肿瘤中研究显示SOCS-1呈现基因广泛甲基化及蛋白表达缺失,致JAK/STAT通路的持续活化,与肿瘤的发生发展有关,提示SOCS-1的作用类似于抑癌基因,而在一些肿瘤中则见SOCS-1的高表达,SOCS-1在肿瘤中的作用机制仍存在争议.近年来SOCS-1在宫颈癌中的作用得到重视,但其作用机制尚未明确.而HPV感染可能促进了SOCS-1基因的异常表达,SOCS-1的沉默在宫颈癌的发生发展中可能发挥了重要作用.     

Dkk-1在肿瘤中的研究进展

DKK-1是一种分泌型糖蛋白,通过结合细胞表面受体LRP5/6、Kremen1/2在Wnt通路中起负调控作用。Dkk-1的表达受p53、MYCN、β-catenin等基因调控。Dkk-1在细胞内的异位表达能抑制多种肿瘤细胞的增殖,但有时能在促凋亡因子存在时诱发凋亡。Dkk-1在一些肿瘤中低表达,而在另一些肿瘤中高表达。Dkk-1在不同肿瘤的发生、发展以及转移这几个阶段中的表达和功能表现出复杂多重的差异。该文就Dkk-1在肿瘤中表达和功能的研究进展作一综述。