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目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害。方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的。结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL。结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究。 相似文献
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一种快速提取大质粒的方法 总被引:1,自引:0,他引:1
本文介绍一种快速提取大质粒的方法。应用该方法,对含有pTA1,R68.45,RP(?)Tn501,pUB307,RP_4,pJRD215和pTr30质粒的多能硫杆菌(Thiabacillus versius)、氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)和大肠杆菌(Escherichia coli)进行了质粒提取。结果表明,该方法提取的质粒条带清晰,分辨率高,而且重复性好。 相似文献
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碱裂解提取质粒DNA是分子生物学实验中常用的方法,但通常方法所提取的质粒往往含有大量的RNA和其他杂质,本文适时加入较高浓度的RNA和适当延长冰浴时间,结果得到了几乎没有RNA和其他杂质的高纯质粒DNA,不仅达到了分子生物学实验要求,而且可用作抗原检测抗dsDNA抗体,该法揉作简单,经济,实用。 相似文献
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直接用酚和氯仿快速提取质粒 总被引:7,自引:0,他引:7
质粒的提取是分子克隆技术中最关键的步骤之一,在对大量样品的抽提和筛选时工作量很大。提取质粒的方法很多,有碱裂解法、煮沸法等「1」,所用试剂较多,耗时较长,这些方法均要用酚和氯仿抽提以去除菌体蛋白,以免影响酶切分析。Biji,T,Kurien等(1994)提出用乙醇溶菌法快速提取质粒,作者试验多次结果均不理想,经过改进直接用酚和氯仿溶解菌体来快速提取持粒,得到了满意的结果。用该法提取质粒DNA,产量 相似文献
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这里所介绍的方法已成功地用来提取不同菌株中的各种质粒。一般来说,质粒愈小,效果愈好。因为随着质粒分子量的增加,其性质就愈来愈接近宿主DNA的性质。对于大于25kb的质粒分子,用此方法分离是非常困难的,而且得率较低。然而,通常用于克隆的所有质粒相对来说是较小的,因而此方法可获得良好的结果。 相似文献
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应用于乳酸菌的非抗生素抗性选择标记系统 总被引:3,自引:0,他引:3
乳酸菌是一类重要的安全型微生物,在免疫载体疫苗开发及食品菌株改良等医疗、食品领域均有广泛的应用.非抗生素抗性选择标记是乳酸菌基因工程菌株构建中必不可少的关键组成部分,也是目前乳酸菌研究的前沿和热点.根据筛选时质粒和受体菌之间的表型关系及特征,主要分为显性选择标记、互补型选择标记、显性/互补型选择标记、双质粒选择标记4大类.其中显性选择标记中的细菌素抗性/免疫性选择标记及互补型选择标记中的糖类选择标记均有较大的发展潜力及应用空间;双质粒选择标记系统构建的筛选过程新颖独特,为整个选择标记系统的发展开辟了新的途径及思路. 相似文献
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猪源乳酸菌产乳酸及其抑菌特性研究 总被引:13,自引:0,他引:13
研究了5株(L1、12、L3、L5和L7)分离自仔猪肠道的乳酸菌的产乳酸能力及抑菌特性。结果表明:L5菌株产乳酸的速度最快,培养液中乳酸含量最高,L5菌株培养液pH值的下降速度最快,终末pH值最低,而L1菌株产乳酸的速度最慢,培养液乳酸含量最低。5株乳酸菌对大肠杆菌K88、K99、987P、O141和大肠杆菌E1及金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;排除酸的影响后仍有22%~53%抑菌效果;经热处理后保持有92%以上的抑菌效果;蛋白酶处理后保持85%以上的抑菌效果。 相似文献
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一组鸡源乳酸菌产乳酸及其耐受特性研究* 总被引:3,自引:0,他引:3
研究了12株(K9、D17、C1、C12、D11、D14、C2、D9、K6、C21、D1和D7)分离自肉鸡肠道的乳酸菌的产乳酸能力及其中3株产酸能力强的菌株的耐受特性。12株乳酸菌产乳酸结果表明:12h内,K6产乳酸速度最快,其次为K9和C1,24h时,D17乳酸浓度最高,48h时C1终乳酸浓度最高。K9、D17和C1的耐受试验结果表明:C1菌株耐酸能力最强,pH2时,C1菌株培养3h后还能检测到活菌,D17和K9菌株培养1h后就已经检测不到活菌。在胆盐浓度0.08%-0.40%范围内,C1、D17和K9均有一定的耐受能力,随着胆盐浓度的升高,C1、D17和K9的存活数呈现缓慢的下降趋势。3株菌中D17耐热能力最强,经80%处理后仍有10^4.9/mL存活数,而K9和C1已检测不到活菌;C1对热最敏感,65℃处理后存活数由10^8/mL降为10^3/mL。 相似文献
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Recent research in the area of importance of microbes has revealed the immense industrial potential of exopolysaccharides
and their derivative oligosaccharides from lactic acid bacteria. However, due to lack of adequate technological knowledge,
the exopolysaccharides have remained largely under exploited. In the present review, the enormous potentials of different
types of exopolysaccharides from lactic acid bacteria are described. This also summarizes the recent advances in the applications
of exopolysaccharides, certain problems associated with their commercial production and the remedies. 相似文献
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《Bioscience, biotechnology, and biochemistry》2013,77(5):1016-1018
In this study, we attempted to establish a novel method of screening anti-allergic lactic acid bacteria (LAB). We cloned the human histidine decarboxylase (HDC) promoter into the promoter-less pPhi-Yellow-RPL-dest1 vector and established KU812F cells transduced with this vector (pHDCp-Phi-Yellow/KU812F). After adding LAB to these cells, the change in fluorescence intensity was monitored by flow cytometry. After screening, we identified several LAB strains that downregulated HDC promoter activity. Functional analysis of these LAB strains indicated that two LAB strains inhibited histamine release from KU812F cells, indicating that this assay system can be used to screen for anti-allergic LAB in a high-throughput manner. 相似文献