赤霉素对烟草叶组织培养中芽形成的抑制效应

本文研究了赤霉素(GA)对烟草叶组织培养中芽形成的影响。单加GA 能明显促进叶组织膨大,叶肉细胞明显增大,但无细胞分裂发生。在诱导成芽的培养基中(2毫克/升BA)加入不同浓度的GA(0.5—5.0毫克/升),均强烈抑制芽的形成。在培养的不同时间进行的不同培养基之间的转移培养试验说明,GA 的作用主要发生在第一个星期内。组织细胞学观察表明,在加有GA 和BA 的培养基上,叶组织中极少形成分生细胞团。GA 抑制芽形成的作用显然与此密切相关。一旦培养的组织中形成了有一定结构的分生细胞团,这一成芽过程似不再为GA 所逆转。     

普通烟草ATⅢ氨基转移酶家族序列鉴定与表达分析

氨基转移酶是5'-磷酸吡哆醛依赖酶,在植物的生长发育和非生物胁迫的反应中起重要作用。ATⅢ氨基转移酶家族(classⅢ aminotransferase family)是转氨酶家族中一个非常重要的亚家族。本研究利用普通烟草(Nicotiana tabacum)基因组序列信息,鉴定出26个ATⅢ家族成员,对烟草ATⅢ家族进行理化性质分析表明,普通烟草ATⅢ家族成员之间的理化性质差异较大;系统进化和结构域分析显示,烟草ATⅢ家族成员可形成4个分支,同一分支内ATⅢ家族成员的保守结构域的种类和组织形式高度一致;将19个家族成员定位在12条染色体上;分析普通烟草转录组数据,结果显示大多数家族成员在不同组织中都有表达,主要集中在叶脉、打顶后茎和叶、离体叶片等组织。对NtATⅢ1和NtATⅢ2基因的qRT-PCR分析显示,这两个基因主要在植物地上组织中表达。本研究为普通烟草ATⅢ基因的功能研究提供依据。     

渐狭叶烟草高效基因编辑体系的建立

渐狭叶烟草(Nicotiana attenuata)是烟草属植物中研究植物与昆虫、植物与病原菌互作的模式植物。本研究以八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)为靶标基因,建立一套以pHSE401为基因编辑载体,以潮霉素为抗性筛选标记的渐狭叶烟草高效基因编辑体系。利用该体系,获得PDS基因约80%的基因编辑效率,远远超过目前在渐狭叶烟草中报道的约30%的基因编辑效率。进一步使用WRKY70基因为靶标,对该体系对进行编辑效率验证,经测序发现WRKY70基因编辑材料中的基因编辑效率为83%,其中发生大片段缺失突变的频率为50%。因此,本研究成功建立了渐狭叶烟草高效基因编辑体系,为以后渐狭叶烟草的基因功能研究奠定基础。     

Pttkn1基因异位表达对烟草叶片形态的影响

以红花烟草(Nicotiana tabacum L.)叶片为材料,利用农杆菌介导的叶盘转化法将Pttkn1基因整合到烟草基因组中,获得了转基因植株,研究了该基因对植物形态发生和维管形成的影响,并对其进行了RT-PCR分析。结果表明,转基因烟草植株的叶片形态和叶脉发生了多种变化,包括叶片对称性丧失、出现裂片、皱缩、异位茎、杯状叶片、瘤状结构、叶脉脉序紊乱等。RT-PCR分析表明,该基因仅强烈表达于转基因烟草植株中,而在野生型和组织培养材料中均未检测到该基因的存在。表明Pttkn1基因已经成功转入烟草中,而且在叶片形态发生和维管形成过程中发挥一定的作用。     

美国烟草G140细胞工程育种初报

本研究以美国烟草G_(140)(Nicotiana tabacum)和野生波缘烟草[(Nicotiana undulata)。抗花叶病]为材料,在组织水平上进行烟草G_(140)髓细胞离体培养,进行体细胞无性系变异和再生植株筛选;在细胞水平上进行两种烟草的原生质分离、培养及植株再生,外源基因导入及体细胞融合,选育优质抗病毒病的烟草新品种。试验结果及分析一、G_(140)髓细胞脱分化和再分化成苗 9-15叶期的G_(140)植株的髓组织切成0.5cm~2方块,接种于M S+2,4-D2mg/L+水     

从葱的愈伤组织诱导再生植株

以葱属植物为材料研究离体条件下器官分化及植株再生的工作可以提到:Fridborg研究洋葱的一个变种(Allium cepa L.var.proliferum)芽和小植株的再生;Havranek 和Novak 研究大蒜鳞茎外植体上苗的再生;Hu.C.Y.和 T.Su 研究大蒜分生组织的培养及鳞茎的形成;Kehr 和 Schaeffer 及周云罗等研究大蒜贮存叶愈伤组织的诱导以及从愈伤组织再生小植株。我们以葱(Allium fistulosum)为材料,从鳞茎诱导出愈伤     

烟草叶外植体分化和脱分化过程中几种内源激素变化(简报)

普通烟草及胶烟草叶外植体分化及脱分化所要求的外源激素的激动素/生长素的比值不同,在脱分化过程中,前者的iPA含量达 720.0 ng g~(-1)FW,而后者未检测到。分化时期的ZR/GA_(4 7)或iPA/GA_(4 7)含量均高于脱分化的。     

基因工程

<正> 用给体一受体原生质体融合技术研究了叶绿体和线粒体控制的性状在种间的转移。野生烟草或普通烟草白化系(V BW)用作受体原生质体,下一射线照射的花烟草、印度烟草和波状叶烟草原生质体用作细胞器给体。融合细胞经培养后再生成胞质杂种植株。     

烟草根培养的植株再生

菸草是通过组织培养研究形态发生极为良好的试验材料,以往利用烟草的叶片和茎段等培养曾作过不少工作。但利用烟草根段进行培养则未见报道。为了进一步扩大烟草材料的试验范围及探讨烟草根的脱分化能力、要求的条件及植株再生的规律,本试验用烟草根段进行了培养并经愈伤组织或直接分化出芽两种形式获得植株。     

烟草叶组织培养中器官形成的研究

用MS培养基培养烟草叶组织,研究了不同激素及有机附加成分对培养组织增殖及器官分化的影响,发现BA在所试浓度范围内(0.2～5.0毫克/升)明显促进芽的形成,但较高浓度的BA对芽的进一步生长及根的形成有抑制作用。不同细胞分裂素的比较表明:玉米素促进芽形成的活性最高,BA次之,KT较弱。细胞分裂素为烟草叶组织形成芽所必需,但其作用时间仅需保持5～6天即可,此时如移到MS基本培养基上,即能形成芽,并促进茎叶及根的形成。NAA与较低浓度的BA结合使用时,明显促进根的形成。有机附加物水解乳蛋白(1000毫克/升)、硫酸腺嘌呤(100毫克/升)和椰乳(10％)在有BA存在时,明显促进芽的形成以及愈伤组织的增殖。10~(-4)M6-氮杂尿嘧啶(AU)和2-硫尿嘧啶(TU)抑制BA对芽形成及愈伤组织增殖的促进作用,AU的作用尤为明显;但在较低浓度下(10~(-5)和10~(-6)M)无明显影响。细胞学观察表明,培养后叶肉细胞明显增大,细胞分裂形成分生组织,由之形成芽原基。     

烟草合子与二胞原胚在离体培养中的发育

用酶解-研磨法分离烟草与大叶烟草受精后的胚囊,继之以显微解剖分离合子与二胞原胚。将3—5个合子或二胞原胚置于微室的琼脂糖小滴中,以预先培养3—4天、分裂1—2次的烟草、大叶烟草或黄花烟草叶肉原生质体饲养。培养基为KM8p与其它附加成分。在25℃与黑暗下静置培养。培养3—4天,约60%合子完成第一次分裂。多数行不等分裂产生大小两个细胞。12天后形成少数原胚或多细胞团。二胞原胚培养亦分裂为多细胞原胚。研究了合子分离方法、合子发育时期、饲养细胞种类与培养天数等因素对合子离体发育的影响。     

百合查尔酮合成酶基因克隆及其转化烟草的花色表达分析

以‘西伯利亚’百合为试材,利用PCR技术克隆了查尔酮合成酶基因(CHS),构建了CHS基因的正义和反义植物表达载体,采用农杆菌介导法转化烟草叶盘,获得了转正义CHS基因的本明烟草18株,转反义CHS基因的普通烟草21株,总转化率为26.0%。高效液相色谱法(HPLC)检测结果显示,正义CHS转基因的本明烟草类黄酮含量升高14.0%～59.7%,反义CHS转基因的普通烟草类黄酮含量降低44.5%～76.4%。花色观察结果显示,正义转基因烟草的花瓣颜色未见变化,反义转基因烟草部分植株的花瓣颜色变浅。研究表明,CHS基因遗传转化是进行花色调控的有效手段之一。     

漂浮育苗剪叶传播烟草丛顶病风险研究

为了评估漂浮育苗剪叶传播烟草从顶病的风险, 以剪刀剪病叶后再剪苗和剪刀蘸取病烟汁液后再剪苗2种剪叶方法研究了漂浮育苗剪叶对烟草丛顶病和烟草普通花叶病的传播效果。调查数据显示, 2种剪叶方法均不能传播烟草丛顶病, 但能传播烟草普通花叶病, 其平均发病率分别为36.67%和63.33%。实验结果表明, 漂浮育苗剪叶不易传播烟草丛顶病, 但易于传播烟草普通花叶病。     

6-苄氨基嘌呤对小麦叶片中脱落酸降解速率的影响

细胞分裂素(CTK)与脱落酸(ABA)对于植物的许多不同代谢过程都有相反的生理效应。(Fo—untain等1976;Krawiarz等1977;Biddington等1977)。用含有CTK和ABA的溶液处理植物材料时,常可以在多种植物中观察到拮拉作用(Longo等1978,1981,黄海等1984)。这一现象引起了一些研究者的兴趣(Longo等1981)。很明显,这种拮抗作用可以从两个方面来解释:1、CTK和ABA可能对植物的某些代谢过程有相反的作用。2、这两种激素之间可能有相互作用,即彼此加速对方的降解或转化。Even—chen等(1975)发现,用CTK处理烟草叶时,可以降低组织中ABA含量。Gepstein等(1980)发现,大麦叶片在黑暗中进行离体培养时,ABA含量上升7倍,预先用激动素处理可以阻止叶片中ABA含量的增加。然而这些工作都未能说明,在植物体内CTK的作用究竟是抑制了ABA的合成还是加速了ABA的降解。本文以小麦叶片为材料,人工喂入ABA,观察了喂入的ABA在组织中的降解以及6—苄氨基嘌呤(6BA)对喂入的ABA体内降解的影响,并对6BA促进ABA降解的机理进行了讨论。     

人参原生质体培养再生愈伤组织

人参原生质体培养未见报道成功。Harn(1974)曾用人参幼叶,幼根和上胚轴进行原生质体分离,但得到的数量很少,无法进行培养。本实验以人参培养细胞为材料,通过培养再生了愈伤组织。     

漂浮育苗剪叶传播烟草丛顶病风险研究

为了评估漂浮育苗剪叶传播烟草从顶病的风险,以剪刀剪病叶后再剪苗和剪刀蘸取病烟汁液后再剪苗2种剪叶方法研究了漂浮育苗剪叶对烟草丛顶病和烟草普通花叶病的传播效果.调查数据显示,2种剪叶方法均不能传播烟草丛顶病,但能传播烟草普通花叶病,其平均发病率分别为36.67%和63.33%.实验结果表明,漂浮育苗剪叶不易传播烟草丛顶病,但易于传播烟草普通花叶病.     

耐高温亚硝酸盐降解菌的分离、鉴定及降低雪茄烟叶亚硝胺的应用

【背景】烟草特有亚硝胺(tobacco-specific nitrosamines, TSNAs)是烟草于调制和发酵阶段产生的一类致癌物质,由烟草生物碱与氮氧化物发生亚硝化反应生成,生物碱和亚硝酸盐是TSNAs的直接前体物质。【目的】发掘适用雪茄高温发酵且显著降低TSNAs形成与积累的微生物。【方法】以TSNAs前体物质亚硝酸盐的高效降解为目标,对从雪茄烟叶分离得到的烟草源微生物菌株进行高温培养、亚硝酸盐降解及亚硝酸盐耐受能力研究,得到可于50℃高效降解亚硝酸盐及耐受高浓度亚硝酸盐的微生物菌株,将菌株应用于雪茄烟叶高温发酵35 d,对发酵前后亚硝酸盐、TSNAs、常规化学成分和中性香味成分含量进行测定,分析菌株在雪茄烟叶发酵中对TSNAs含量及烟叶品质的影响。【结果】获得了3株于50℃高效降解亚硝酸盐的菌株NY7、NY8和NY9,分别鉴定为莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis) NY7、耐盐芽孢杆菌(Bacillus halotolerans) NY8和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) NY9,其中B. halotolerans NY8亚硝酸盐降解能...     

烟草花叶病毒几个分离物的比较研究

本文从血清学关系、外壳蛋白亚基分子量、氨基酸组成和放射性碘标记酶解肽谱等方面比较研究了广州和上海地区的烟草、茄子、辣椒、番茄上分离到的烟草花叶病毒几个分离株。试验结果指出,它们与烟草花叶病毒普通株(TMV_c),长叶车前花叶病上海株(RMV_gh)都有所不同。并对放射性碘标记酶解肽谱在病毒诊断鉴定上的应用进行了讨论。     

利用原生质体融合获得普通烟草与黄花烟草种间体细胞杂种植株

我们在高国楠方法的基础上,进一步改良。 使用培养皿沉降法,使人工有性杂交很少成功 的普通烟草（Nicotiana. tabacum）和黄花烟草 (N. rustica）的原生质体融合成功。融合处理后 共得到四十三株再生植株。目前（b月23日） 已开花的有7株。其中两株与“亲本”之一普通 烟草品种CYNo.4 (Copus Yeusuheku No.4）的株 型、叶型、花型、花色无差别。推测可能是没有 产生融合的普通烟草CY No. 4的原生质体再生 植株。另外一株从株型、叶型、花型均相似于普 通烟草CY No. 4,但是花色为粉红。估计可能是 普通烟草和黄花烟草两个种的原生质体发生了 部分融合的结果。其余四株,从株型、叶型、花型、花色都介于两“亲本”之间。黄花烟草的叶 型为卵圆型,有叶柄。普通烟草为长卵圆型,有 叶托无叶柄,而这四株的叶型虽近似黄花烟草, 但无叶柄也无叶托,而且叶缘也不整齐（图1)o 从花型来看也是两“亲本”的中间型：花冠小 于普通烟草而大于黄花烟草（图2)。普通烟草 CYNo.4的花色为深红色,黄花烟草为黄绿色。 而这四株花色为淡紫色。明显地与“两亲”本不 同。推测这四株是普通烟草（N. tabacum）和黄 花烟草（N. rustica)的种间体细胞杂种。 过氧化物酶同功酶的初步鉴定,支持了上 述看法。进一步的观察和研究正在进行中。     

烟草叶肉细胞原生质体培养成植株的研究

应用自制的纤维素酶从三个烟草品种的叶肉组织获得大量完整的有活力的原生质体,阐述了影响原生质体活力的某些因素。详细叙述了烟草原生质体的培养过程和方法,由于培养技术的改进,试验所用三个烟草品种的叶肉原生质体已经生长分裂形成愈伤组织,并分化成再生植株。此外,观察到“金星”的双倍体与单倍体叶肉原生质体在同一培养基上生长的差异。并对自制纤维素酶与日本纤维素酶(Onozuka)进行了比较。讨论了烟草原生质体从体积增大到细胞分裂形成愈伤组织过程中必须移贴的原因。