草鱼出血病病原的研究

草鱼出血病是草鱼种的一种严重疾病,通常在水温25-30℃时发病,其症状表现为全身性组织器官充血。其病原悬液能通过赛氏滤器(Seitz,EKS石棉滤板),能在草鱼种体内及草鱼鳍单层细胞中传代繁殖,在草鱼肌肉单层细胞和性腺单层细胞中感染并出现细胞病变。病原悬液对脂溶剂乙醚敏感,耐热性强,对四环素类药物不敏感。试验结果,我们认为草鱼出血病的病原是病毒。     

草鱼出血病

草鱼Ctenopharyngodon idella是我国重要的淡水鱼类养殖品种,但养殖过程极易发生出血病导致草鱼大量死亡,给草鱼养殖业带来巨大损失。我国在20世纪70年代开始进行病原的研究,1980年发现病毒颗粒并确认为草鱼出血病病原,1991年国际病毒分类委员会将其命名为草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)。一直以来除呼肠孤病毒感染草鱼引起出血病外,未见有病毒和细菌混合感染的报道。本刊2009年8期介绍了邓国     

稀有鮈鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有鲫对草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ）的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原,用ＧＣＨＶ人工感好１－６月龄的稀有鲫,在水温２２－３２℃时能导致稀有鲫出现出血病症状。在水温２８℃时,病鱼在ｌｄ内死亡,潜伏期为５ｄ,发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有鲫体内传代,并诱导８０％以上的稀行鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有鲫病鱼组织超薄切片,电镜观察,发现在肠道、脾脏、肾脏等组织中存在大小与形态和ＧＣＨＶ相似的病毒颗粒。从稀有鲫出血病病鱼组织中纯化病毒,免疫电镜观察,发现病毒颗粒能被ＧＣＨＶ的特异性抗体聚集成团。由上可知,稀有鲫出血病是由ＧＣＨＶ感染所致,稀有鲫对ＧＣＨＶ是敏感的,可以作为草鱼抗出血病育种的模型。     

一株新的草鱼出血病病毒分离物的特性

从湖南邵阳地区患出血病的草鱼组织中分离到一株病毒,经部分提纯、负染后,电镜观察,揭示为双层衣壳、直径约71nm的球形颗粒。其核酸在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现11条带。经核酸酶消化、吖啶橙染色及核酸的变性试验,证明为双链RNA。病毒在草鱼肾细胞株(CIK)单层细胞上,形成直径约2mm的空斑;对温度有一定稳定性;对乙醚、氯仿不敏感;经pH3、10处理后仍能保持相对稳定的滴价。此病毒不属业已建立的呼肠孤病毒科6个属中的任何一个属,而可能为呼肠孤病毒科中一新成员。     

鳜鱼病毒病原及细胞感染特性的研究

在患暴发流行性发病鳜鱼的脾、肾、肝、鳃组织细胞的超薄切片中观察直径为１２０－１５０ｎｍ的二十面体病毒粒子,其截面呈六角形,有囊膜。将病鱼内脏及１０倍体积的ＰＢＳ缓冲液制成组织匀浆液,过滤除菌后感染对数生长期的草鱼肾细胞。结果表明,该感染液在２８℃条件下,培养３６－４８ｈ,生长旺盛的草鱼肾细胞开始出现ＣＰＥ,５－７ｄ感染的单层细胞逐渐脱落死亡。该细胞病毒悬液具有感染性,可持续稳定地进行传代培养。感染     

稀有Ju鲫对草鱼出血病病毒敏感性的初步研究

本文报道稀有Ｊｕ鲫对草鱼出血病病毒的敏感性。ＧＣＨＶ是草鱼出血病的病原,用ＧＣＨＶ人工感染１－６月龄的稀有Ｊｕ鲫,在水温２２－３２℃时能导致稀有Ｊｕ鲫出现出血病症状。在水温２８℃时,病鱼在１ｄ内死亡,潜伏期为５ｄ,发病高峰期在感染后第６－８ｄ。ＧＣＨＶ能在稀有Ｊｕ鲫体内传代,并诱导８０％以上的稀有Ｊｕ鲫患病死亡。将人工感染ＧＣＨＶ的稀有Ｊｕ鲫病鱼组织超薄切片,电镜观察,发现在肠道,脾脏,肾脏等组织     

草鱼出血病病毒的生长特性及高滴价培养

草鱼出血病病毒感染鱼肾(Clk)单层细胞后,产生明显的细胞病变,其繁殖周期为2—3天。病毒增殖的上升期在感染后的12—48小时。28℃下,当感染复数(Multiplicityof Infection简称MOI)为0.05PFU/cell时,病毒滴价可达1.78×10~(11)PFU/ml,不同温度(25℃、28℃、30℃)下通气培养,测定病毒滴价略有差异。感染病毒的细胞培养液经ELISA检测和电子显微镜观察均为阳性结果,并且能感染健康草鱼。     

草鱼出血病混合感染的嗜水气单胞菌的分离、鉴定与理化特性

从患出血病草鱼的肝脏病灶中分离筛选出2株致病菌。取病鱼样品组织过滤液接种CIK细胞、培养, 电镜下观察到细胞质中含有草鱼呼肠孤病毒样颗粒和包涵体, 病毒颗粒大小65 nm~ 70 nm, 包涵体0.46 μm~1.81 μm。人工回归感染实验显示分离的菌株及细胞毒悬液均能使草鱼致病死亡。对分离菌株进行细胞形态学、理化特性分析及药敏试验, 初步判定所分离的2株菌均为嗜水气单胞菌。进一步对菌株进行DNA分子鉴定, 结果显示2株菌的16S rRNA基因、促旋酶亚单位蛋白(gryB)基因均与GenBank上的嗜水     

鳜鱼病毒病原及细胞感染特性的研究

在患暴发流行性发病鳜鱼的脾、肾、肝、鳃组织细胞的超薄切片中观察到直径为120-150 nm的二十面体病毒粒子,其截面呈六角形,有囊膜.将病鱼内脏与10倍体积的PBS缓冲液制成组织匀浆液,过滤除菌后感染对数生长期的草鱼肾细胞.结果表明,该感染液在28 ℃条件下,培养36-48 h,生长旺盛的草鱼肾细胞开始出现CPE,5-7 d感染的单层细胞逐渐脱落死亡.该细胞病毒悬液具有感染性,可持续稳定地进行传代培养.感染细胞的病毒培养液,经差异离心纯化,负染制片,电镜下观察到大量的病毒粒子,对照培养物中未发现任何病毒颗粒.     

人IFN-α诱导草鱼肾细胞对草鱼出血病毒抗性作用的研究

人α-干扰素是一种广谱抗病毒的生物活性物质,对各种病毒性疾病均有较显著疗效1。草鱼出血病是由草鱼出血病毒(Hemorrhagic virus of Grass carp, GCHV)引起,该病流行范围广,发病季节长,发病率及死亡率高,给水产养殖业带来很大的损失。 近年来应用干扰素防治草鱼出血病已有研究报道。2本试验在细胞水平上进一步研究了Human-IFN-α对GCHV的抗性作用,为进一步从分子水平上探讨草鱼出血病防治机理累积资料。       

一种新型草鱼呼肠孤病毒人工感染方法

研究从患病草鱼中新分离到一株草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）,对其进行了病毒纯化与电镜观察、基因组RT-PCR分型以及病毒量定量分析等,并在此基础上探索了一种新的病毒人工感染方法。取病鱼肌肉组织进行病毒纯化与电镜观察,观察到大量病毒粒子,直径在70-80 nm。病毒基因组RT-PCR扩增结果表明,该草鱼呼肠孤病毒新分离株属基因型Ⅱ型GCRV;通过绝对定量的方法,对病毒悬液的浓度进行了测定,为2.97×103 copy/μL。通过灌胃法,对3个组别的实验鱼分别感染不同浓度的病毒液,同时设置灌胃PBS的组别作为对照组。结果显示,3个实验组死亡率均在80%左右,而对照组仅出现一例死亡个体。实验组死亡个体体表发黑,腹部、鳍条基部以及鳃盖处均有明显的出血症状,为草鱼出血病的典型症状。随机选取死亡的个体进行RT-PCR检测,均能检测出Ⅱ型GCRV的条带。以上结果说明,灌胃法可以作为一种新的方法,用于草鱼的GCRV人工感染实验。     

青鱼Mylopharygodon piceus出血病的初步研究

青鱼出血病是危害青色最严重的疾病之一,尤以二龄为甚。通过人工注射免疫后,可使青鱼的成活率由原来20％左右提高至60—90％,个别的可达98.98％。通过病鱼肾脏组织超薄切片电镜观察,首次发现病毒颗粒(直径为50—56毫微米)的存在,经0.15微米孔径的滤膜过滤的病原悬液可反复在鱼体内传3—4代,使健康鱼发病。因此,认为青鱼出血病是病毒引起的疾病。     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属。草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鲅鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鲅鱼病毒病病原。本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究。结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异。此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型。在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与。FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性。Westem blot检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇。     

抗出血病草鱼子代抗病力的分析

草鱼出血病（Grasscar’phemorrhagicvirus,GCHV）是草鱼鱼种养殖阶段危害最为严重的病毒性疾病I’一’］,抗出血病草鱼新品种的培育是解决该病危害的根本途径［‘］。作者等从“七五”开始,开展了基因转移进行草鱼抗出血病育种的研究,建立了鱼类总DNA介导基因转移的实验模型I’］。将抗草鱼出血病的团头勤的总DNA转移到草鱼的受精卵,用GCHV人工攻毒方法,筛选出一批抗出血病草鱼个体。这批抗病个体已经成熟并繁殖子代。l材料与方法1．回实验草鱼实验用亲代草鱼为1990年经转移团头饬总DNA后,经GCHV攻毒筛选存活的草鱼【Cten…     

几种鱼类细胞对草鱼呼肠孤病毒敏感性的研究

比较研究了鲫鱼异倍体细胞系(CAB-80)、团头鲂尾鳍细胞系(BCC)、大鳞副泥鳅雌核发育单倍体胚胎细胞系(PHG)、草鱼胚胎细胞系(GCE)、草鱼尾鳍细胞系(GCRF-2)、草鱼肾细胞系(GCK-84)及其四个克隆对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的敏感性。证实了这些细胞(PHG除外)在不同程度上对GCRV敏感,其中以GCK-84的敏感性最强。这表明,在体外培养条件下,GCRV并无严格的种族特异性。用经GCK-84传代的病毒感染草鱼种,能复制出典型的出血病症状。用GCK-84检测了病毒在GCK-84、GCRF-2、CAB-80、BCC和PHG中的滴度(TCID_(50/ml)),其值分别为8.24,7.36,2.90,2.15和1.33。4个克隆与肾细胞系对病毒的敏感程度亦不尽相同,其滴度在6.3到9.32之间变化。上述结果对细胞工程抗病育种预示有较大的潜在意义。在电镜下可见GCRV对被感染的细胞造成了严重的破坏。病毒为平均直径58nm的球形颗粒,具有一个高度电子密度的核心,平均直径约为38nm。病毒在细胞中的分布方式有三种:即散布于细胞质中的、呈晶格状包于一膜状结构中的和整齐或不整齐地聚集在一起但无膜包裹的。     

两株水生呼肠孤病毒部分特性的比较

水生呼肠孤病毒为感染水生动物的一类病原体,隶属于呼肠孤病毒科新建水生呼肠孤病毒属.草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是引起中国南方淡水养殖草鱼暴发性出血病病原,鮁鱼呼肠孤病毒(Threadfin reovirus,TFV)是引起海水养殖鮁鱼病毒病病原.本研究将GCRV与新加坡TFV分离株进行了部分特性比较研究.结果表明,GCRV与TFV均能感染CIK细胞,但对其它鱼类细胞系的敏感性有所差异.此外,凝胶电泳与逆转录聚合酶链式扩增显示,GCRV与TFV核酸属不同的基因型.在多肽特性上,证实了GCRV的5条主要结构多肽具有与FTV及水生呼肠孤病毒相似的特性.Western blot 检测显示,草鱼呼肠孤病毒与TFV结构蛋白拥有部分相同的抗原决定簇.     

团头鲂Toll样受体3基因的克隆及特征研究

由草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovlrus,GCRV)引起的草鱼出血病,是对草鱼危害最大的传染性疾病之一.GCRV是双链RNA病毒,属呼肠孤病毒科(Reoviridae),水生呼肠孤病毒属(Aquareovirus),G亚型[1].GCRV主要引起草鱼、青鱼等在鱼种阶段发生出血病.     

草鱼(Ctenophar yngodon idellus)出血病与生态环境的关系

对一龄草鱼种培育池的水质数据采用生物统计法,以其单因子或多因子与草鱼病毒性出血病的关系进行分析比较。结果表明,出血病与某些生态因子密切相关。当水温逐渐升高时,溶氧和透明度的下降或总氮和有机氮等的升高,均易引起出血病的发生和流行。其中溶氧是诸因素中主要的发病因素,水温是发病的首要条件,其它理化因素也可成为发病因素;与水质密切相关的浮游生物量的升高或剧变对出血病有一定影响;底质含氮物高会引起水质恶化,继而导致发病。     

几种鱼类细胞对草鱼呼肠孤病毒敏感性的研究

比较研究了鲫鱼异倍体细胞系(CAB-80)、团头鲂尾鳍细胞系(BCC)、大鳞副泥鳅雌核发育单倍体胚胎细胞系(PHC)、草鱼胚胎细胞系(GCE)、草鱼尾鳍细胞系(CCRF-2)、草鱼肾细胞系(CCK—S4)及其四个克隆对草鱼呼肠孤病毒(CCRV)的敏感性。证实了这些细胞(PHG除外)在不同程度上对GCRV敏感,其中以GCK-84的敏感性最强。这表明,在体外培养条件下,GCRV并无严格的种族特异性。用经GCK-84传代的病毒感染草鱼种,能复制出典型的出血病症状。用GCK-84检测了病毒在GCK-84、GCRF-2、CAB-80、BCC和PHG中的滴度(TCID50/mt),其值分别为8．24,7．36,2．90,2．15和1．33。4个克隆与肾细胞系对病毒的敏感程度亦不尽相同,其滴度在6．3到9．32之间变化。上述结果对细胞工程抗病育种预示有较大的潜在意义。在电镜下可见GCRV对被感染的细胞造成了严重的破坏。病毒为平均直径58nm的球形颗粒,具有一个高度电子密度的核心,平均直径约为38nm。病毒在细胞中的分布方式有三种-即散布于细胞质中的、呈晶格状包于一膜状结构中的和整齐或不整齐地聚集在一起但无膜包裹的。     

谈谈鱼类免疫

鱼类在脊椎动物中是比较低等的一类,其免疫系统和免疫反应与高等脊椎动物比较也是较原始的。鱼类免疫在国际上最早研究的时间是1942年。我国研究的时间较晚,1977年才开始系统的研究,取得了可喜的成绩,经过免疫的草鱼,病毒性出血病的发病率大为减少,草鱼的成活率可稳定在85％左右。草鱼种免疫防病已在全国范围内推广,已给草鱼生产带来明显的效益。