磷脂酰肌醇代谢及其与癌基因转化蛋白的关系

磷脂酰肌醇(PI)不仅是细胞质膜的组成成份,而且其代谢与细胞增殖密切相关。细胞受激动剂刺激后最早出现的反应是 PI 代谢加快,迅速水解生成第二信使 DAG 和 IP_3,后二者能调节细胞蛋白质的磷酸化及细胞的各种生理功能。生长因子、激素等促分裂因子能通过影响 PI 代谢促进细胞增殖,而一些癌基因转化蛋白有的与生长因子、有的与生长因子受体同源。     

兔脑中磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸的分离纯化

多磷酸肌醇磷脂(polyphospholnositides,PPI)包括磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol-4-phosphate,PIP)和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(phosphatidylinositol-4,5-bis-phosphate,PIP_2)。近年来发现它们在细胞跨膜信号传递中起重要作用。为了深入了解其代谢及生理作用,有必要把它们分离纯化。前人报道过几种纯化方法,但操作复杂。目前国外仅几家公司生产,价格昂贵;国内仍无生产,也未见类似报道。本文主要报告一种分离纯化兔脑中PIP_2的新方法及用硅胶板薄层层析法(TLC)分离鉴定兔脑中PIP和PIP_2。     

磷脂酰肌醇系激素的作用机理

以cAMP作为“第二信使”的激素简称CAMP系激素。激素的作用与磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)代谢循环密切相关。以cGMP、Ca~(2 )为“第二信使”的激素简称为PI系激素。PI系激素有独特的作用方式,存在DG-C激酶系、Ca~(2 )-CDR系和cGMP-G激酶系三种传递机理,具有调节各种细胞机能的作用。两类膜受体激素的作用互相拮抗,互相制约,有可能以磷脂酰丝氨酸为交接点互相沟通。     

自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内肌醇磷脂代谢的改变

本研究观察了在基础状态下和Ｇ蛋白激活性,自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内肌醇磷脂代谢的改变。结果显示：在基础状态下自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞内三磷酸肌醇的含量基本正常;ＧＴＰγ激尖Ｇ蛋白后,动脉平滑肌细胞三磷酸肌醇的增加呈剂量和时间依赖性。     

烟碱对M受体与磷脂酰肌醇代谢偶联关系的调节

外周C_6、C_(10)型N受休是离子通道型受体,其生理功能取决于膜对离子通透性变化。脑N受体的某些功能难以与脑M受体区分,以致有“脑N、M混合型受体”概念的提出。本工作研究N受体激动剂烟碱对G蛋白相关脑磷脂酰肌醇(PI)代谢的影响,分析脑N受体功能及其对M受体功能的调节作用。 大鼠急、慢性实验表明,M受体激动剂槟榔碱使大脑皮层及海马肌醇含量升高20％,且为M受体拮抗剂阿     

老化红细胞肌醇磷脂代谢的探讨

本文用密度梯度离心法,将红细胞分成年轻及老化两部分,分别测定了膜磷脂、甘油二酯及磷酸肌醇的含量,蛋白激酶C在膜内及胞浆内的分布及其对膜蛋白的磷酸化。实验结果表明老化及年轻红细胞磷脂含量,除磷脂酰胆碱明显降低外,其他均无差异。老化红细胞甘油二酯含量低于(P<0.01)年轻者,而磷酸肌醇两者含量相似。老化红细胞膜内蛋白激酶C活性远比年轻者高,而在胞浆内活性则相反。说明老化红细胞膜蛋白激酶C活性增高,可使红细胞膜蛋白4.1、4.2、4.5和4.9进行磷酸化,这些膜蛋白与维持红细胞形态及功能有关,可能它们的磷酸化是老化红细胞变形性降低,脆性增加的因素之一。     

雷公藤对哮喘大鼠气道重构及磷脂酰肌醇3激酶表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对哮喘气道重构及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组(n=8):A组(正常对照组);B组(哮喘4周组);C组(哮喘6周组);D组(给药4周组);E组(给药6周组)。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞浸润;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K蛋白及mRNA表达。结果:①B组、C组PI3Kp85α的蛋白及mRNA表达水平显著高于A组(P均<0.01),E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05);②B组及C组支气管壁厚度、支气管壁平滑肌厚度、支气管壁平滑肌细胞核数量均较A组明显增加(P均<0.01),而E组上述指标较B组、C组、D组均显著降低(P均<0.01);③B组、C组的气道反应性均高于A组(P均<0.01),E组较B组、C组、D组均显著降低(P<0.01、P<0.01、P<0.05)。结论:气道平滑肌增生是气道重构的一个显著特征,PI3K可能在此起促进作用。雷公藤内酯醇可能通过下调PI3K的表达而减轻哮喘气道高反应性及抑制气道平滑肌增生,对哮喘气道重构有一定治疗作用。     

磷脂酰肌醇特异的磷脂酶C的研究进展

磷脂酰肌醇特异的磷脂酶Ｃ的研究进展吴兴中,陈惠黎（上海医科大学生化教研室,上海２０００３２）关键词磷脂酶Ｃ,细胞增殖,分化１,４,５－三磷酸肌醇在细胞的磷脂信息传导中起着第二信使作用,参与许多代谢过程。磷脂酰肌醇特异的磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）是催化磷...     

高效液相色谱法测定大麦虫磷脂酰胆碱含量

建立高效液相色谱法测定大麦虫体内磷脂酰胆碱含量的方法。样品经甲醇提取、净化后,经高效液相色谱分析。采用外标法定量,磷脂酸胆碱标准溶液质量浓度在250～2 000 μg/mL范围内呈良好的线性相关,相关系数为0.999 6,样品加标回收率在97%～109%之间,相对标准偏差小于2.4%。对不同生长阶段大麦虫体内磷脂酰胆碱含量测定结果表明,大麦虫体内卵磷脂含量随个体重量的变化符合二项式曲线的变化规律,相关系数R2=0.865(P＜0.01)。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的原核表达及单克隆抗体制备

人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)是一个肝癌潜在的诊断标志物和治疗靶点。为获得抗GPC3单克隆抗体,用PCR方法克隆GPC3基因,利用酶切位点将该序列插入pGEX-2T载体,构建了pGEX-2T-gpc3表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,获得高效表达。经纯化后获得分子量为58 kD的蛋白。以该重组蛋白为免疫原,通过免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和筛选获得1株抗该重组蛋白的单克隆抗体1F3。Western blot分析显示,该抗体具有较好的特性,可用于GPC3蛋白的功能和应用研究。     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的研究进展

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇（GPI）结构的膜蛋白,称为GPI锚定蛋白;此后不久又鉴定出一种GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶D（GPI-PLD）。GPI-PLD能特异性地水解GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等,本文概述了近年来有关GPI-PLD的研究状况,包括它的组织和器官来源,生理功能、病理条件下的活性改变,分子结构以及cDNA克隆等。     

结核分枝杆菌磷脂酰肌醇甘露糖苷的研究进展

磷脂酰肌醇甘露糖苷(phosphatidyl-myo-inositol mannoside,PIM)在结核分枝杆菌细胞膜内外含量丰富,靠磷脂酰肌醇(phosphatidyl-myo-inositol,PI)锚定在细胞膜上,并含有1-6个甘露糖和最多4个酰链。PIM不仅是结核分枝杆菌重要的组成物质,也是合成脂甘露聚糖(lipomannan,LM)和脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan,LAM)的结构基础。本文就PIM的合成途径、相关酶、与脂蛋白的关系,及PIM在细菌生理和免疫调节中的作用作一简要综述。     

磷脂酰肌醇3- 激酶对心脏的调节

磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinosito1 3-kinase,PI3K)是体内很多生理过程中起关键作用的信号分子,PI3K介导的信号转导通路调节细胞的增生、分化、凋亡等活动。以往研究较多的是PI3K与肿瘤发生发展的关系,最近很多研究发现PI3K介导的信号转导通路对心脏具有重要的调节功能。本文就近年来关于PI3K的结构和功能以及PI3K对心脏的调节的研究作一综述。     

磷脂酰肌醇—4—激酶的免疫分析

在化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上,制备该酶的免疫血清,提纯ＩｇＧ,并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ,进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或抗体ＩｇＧ可沉淀猪肾和猪肺的微粒膜,猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶液（ＴＸＳＭ）中的ＰＩ４－Ｋ表明不同组织,不同亚细胞和不同种属的ＰＩ４－Ｋ有相似的抗原性。猪肝     

磷脂酰肌醇3-激酶对心脏的调节

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatklylinositol 3-kinase,P13K）是体内很多生理过程中起关键作用的信号分子,P13K介导的信号转导通路调节细胞的增生、分化、凋亡等活动。以往研究较多的是P13K与肿瘤发生发展的关系,最近很多研究发现P13K介导的信号转导通路对心脏具有重要的调节功能。本文就近年来关于P13K的结构和功能以及P13K对心脏的调节的研究作一综述。     

人参茎叶皂甙对创伤小鼠活化T细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响

研究了人参茎叶皂甙（ＧＳＬ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的影响。结果显示,ＧＳＬ体内应用（５０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）·ｄ￣（－１）,伤后０─３ｄ）对创伤小鼠活化Ｔ细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）、游离Ｃａ￣（２＋）、钙调素（ＣａＭ）、ＣａＭ依赖的蛋白激酶（ＣａＭ－Ｐｋ）、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）水平的降低具有明显的逆转效应,并可明显降低创伤小鼠血清、巨噬细胞、Ｔｓ细胞对各指标的抑制活性。ＧＳＬ（１．０─１００ｍｇ／Ｌ）在体外也可明显提高创伤小鼠活化Ｔ细胞内ＩＰ＿３、Ｃａ￣（２＋）、ＣａＭ、ＣａＭ－ＰＫ及ＰＫＣ水平。上述结果表明,ＧＳＬ可逆转创伤小鼠活化Ｔ细胞内磷脂酰肌醇代谢的降低。     

磷脂酰肌醇－4－激酶的的免疫分析

在纯化猪肝微粒体磷脂酰肌醇－４－激酶（ＰＩ－４－Ｋ）的基础上,制备该酶的免疫血清、提纯ＩｇＧ,并建立了ＰＩ４－Ｋ的ＥＬＩＳＡ,进行不同组织中ＰＩ４－Ｋ的免疫沉淀分析和免疫定量。结果证明：猪肝微粒体ＰＩ４－Ｋ的抗血清或抗体ＩｇＧ可沉淀猪肾和猪肺的微粒体膜、猪肝细胞膜和人中性粒细胞细胞膜ＴｒｉｔｏｎＸ－１００增溶液（ＴＸＳＭ）中的ＰＩ４－Ｋ,表明不同组织、不同亚细胞器和不同种属的ＰＩ４－Ｋ有相似的抗原性。猪肝、肾、肺、胃、小肠和大肠ＴＸＳＭ中ＰＩ４－Ｋ的活力和酶蛋白含量相仿,急性中性粒细胞白血病患者的中性粒细胞膜上ＰＩ４－Ｋ的含量和活力都增加３．５倍左右．加上ＰＩ４－Ｋ抗体沉淀各组织ＰＩ４－Ｋ活力和酶蛋白的百分率基本相同,支持文献报道组织中微粒体或细胞膜中的ＰＩＫ主要是ＰＩ４－Ｋ,而免疫性不同的ＰＩ３－Ｋ含量极少的观点．