东北地区保护地土壤真菌多样性研究I

20 0 3年4月至2 0 0 4年7月在辽宁、吉林、黑龙江三省的2 0多个市县共采集不同年限的保护地土样15 0多份,采用稀释平板法在孟加拉红培养基上分离近千个真菌菌株,通过纯化培养和形态鉴定,将各菌株鉴定到种。本文报道了部分可培养的子囊菌和有丝分裂孢子真菌的研究结果,其中子囊菌5属6种,包括两个中国新记录种(Lophotrichusbrevirostratus和Microascuscinereus)和一个国内记录但未正式发表的子囊菌(Emericel lopsisterricola) ;有丝分裂孢子真菌7属10种。     

玉米种子携带真菌的多样性研究

作者于2004年3月至2005年6月期间采集辽宁省广泛栽培的38个品种的玉米种子进行种子带菌分析。利用保湿培养检验法和分离培养检验法分别对种子表面粘附的真菌及内部寄藏真菌进行检验,通过纯化培养和形态鉴定,将几百个菌株鉴定到种。本文报道了从供试的玉米种子上分离得到的共16属的真菌,其中接合菌3属3种;子囊菌2属5种;有丝分裂孢子真菌11属18种,其中金黄色毛壳(Chaetromium aureumChivers)为中国新记录种。     

一株南海指海绵共附生真菌多样性及其抗菌活性

本研究通过采用6种不同的培养基对南海指海绵上的共附生真菌进行平板涂布法分离培养,结合ITS-rDNA基因序列特征和形态学特征进行鉴定来研究海绵共附生真菌多样性。共分离培养出55株(21种)真菌菌株,优势菌属为木霉菌属Trichoderma sp.(31株),其中的哈茨木霉Trichoderma harzianum 22株作为优势菌种,占真菌菌株总数的40%。其余真菌则属于枝孢菌属Cladosporium、迈耶氏酵母属Meyerozyma、茎点霉属Phoma、红酵母属Rhodotorula、青霉菌属Penicillium、曲霉属Aspergillus等10个属,还有两株未鉴定到种的子囊菌。选取金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus等7种病原指示菌,采用琼脂扩散法对21种真菌的代表性菌株进行抗菌活性筛选,其中有3种真菌至少对一种指示菌表现出抑菌效果,占菌株种类总数的11%。     

分离自冬虫夏草可培养真菌的多样性研究

冬虫夏草是生长于青藏高原的一种名贵中药材。天然冬虫夏草及其微环境中生活着多种真菌。作者使用常规分离培养方法对冬虫夏草的真菌区系进行研究。从天然冬虫夏草的子座、菌核和菌膜3个部位共分离到572个真菌菌株,并根据形态特征将大部分菌株鉴定到37个不同的属。这些菌株经SSCP(single-strand conformation polymorphism)分析后,再根据nrDNAITS序列的相似性(以97%为阈值)共区分出92种不同的分类单元(operational taxonomic unit,OTU)。其中,属于子囊菌的菌株数及OTU数均比接合菌和担子菌多。从菌膜分离的菌株数及OTU数都明显多于子座和菌核。分离自子座的优势真菌是产黄青霉Penicillium chrysogenum,而分离自菌核和菌膜的优势真菌均为玫红假裸囊菌Pseudogymnoascus roseus。尚未最终鉴定的部分真菌可能为新的真菌物种。     

滇西太保山森林公园子囊菌门虫生真菌物种多样性及其消长动态

云南及青藏高原存在着丰富的虫生真菌资源。本文选择云南省保山市省级城市森林公园太保山森林公园为研究区域, 对子囊菌门虫生真菌物种多样性及其季节消长动态开展了系统研究。在2016年每月采集土样和罹病昆虫, 分离虫生真菌菌株, 采用多基因(nrSSU, nrLSU, EF-1α, RPB1和RPB2)系统发育分析进行物种鉴定, 通过α多样性分析来研究虫生真菌的数量特征和种群消长动态。太保山森林公园子囊菌门虫生真菌全年均有分布, 共获得395个菌株, 包括3科9属24种; 优势属为虫草属(Cordyceps) (6个种199个菌株), 白僵菌属(Beauveria) (5个种80个菌株), 优势种依次为Akanthomyces sp.、Cordyceps tenuipes、C. cicadae、C. fumosorosea和Beauveria bassiana。7月菌株检出率最高(85株, 占总数的21.4%), 8月物种丰富度(15种)和多样性指数(2.35)最高。在5个优势种中, 只有Cordyceps cicadae受季节变化影响较大, 集中分布于5-9月, 7月分布最丰富(35株, 占该月菌株总数的41.2%); 其他4个种一年大部分时间(11或12个月)都能检测到。结果表明, 太保山森林公园子囊菌门虫生真菌资源丰富, 多数优势种对季节变化适应能力较强。     

一株Monacolin K高产菌株生理特性

根据丝状真菌的常用鉴定方法,对实验室保存的一株Monacolin K高产菌株进行形态和生理特性实验。结果表明该菌株属于真菌门(Eumycophyta)、子囊菌纲(Asomycetes)、真子囊菌亚纲(Eurotiaceae)、曲霉目(Eurrotiales)、曲霉科(Eurotiaceae)、红曲霉属(Monascus)。     

少见尖端赛多孢子菌致脑组织感染1例及系列研究

目的报道尖端赛多孢子菌脑脓肿感染1例,并探讨真菌的鉴定及其对抗真菌药物体外药敏试验。方法取患者颅内引流物标本进行真菌培养和形态学鉴定,对分离菌做基因测序和抗真菌药物体外药敏试验。结果根据菌株的形态学特点和基因测序结果鉴定为尖端赛多孢子菌,药敏试验显示对两性青霉素B、氟康唑耐药,对伏立康唑敏感。结论尖端赛多孢子菌导致的真菌感染较少见,其鉴定主要依靠形态学特征和基因分析。伏立康唑对该菌株有较好的治疗作用。     

分离自青海湖可培养耐盐真菌的多样性研究

青海湖位于青藏高原东北部,属于典型的高原盐湖沉积环境。作者以常规的分离培养方法对青海湖中的耐盐真菌多样性进行了研究。从黑马河、耳海和尕海共分离得到617株耐盐真菌,结合形态学和分子生物学的方法将菌株鉴定到18个属和45个种。子囊菌的菌株数比接合菌和担子菌多,枝孢菌和青霉菌为优势耐盐真菌。在这45种耐盐真菌中,轻度、中度和极端嗜盐真菌分别有19、25和1种。分离自黑马河地区的耐盐真菌,其物种丰富度指数Ma（3.12）、多样性指数H′（1.11）和均匀度指数J（0.267）均比耳海和尕海的高。从1.5%浓度下     

西弗射盾子囊霉研究进展

正西弗射盾子囊霉(Stephanoascus ciferrii)属子囊菌类酵母,与孢子丝菌属和念珠菌属同源,但在形态特征上差别较大,除单细胞的酵母菌外,营养体菌丝中有隔膜,可通过有性繁殖在子囊中产生子囊孢子[1-2]。该菌可造成健康个体的浅表感染,在免疫缺陷或免疫低下人群可造成侵袭性感染且结局较为严重[3]。近年随着激素及其他药物的广泛使用,西弗射盾子囊霉等少见真菌引起的临床感染逐年增多[4]。对该菌的鉴定方法有传统的培养表型分析,     

云南干巴菌子实体内可培养微生物

【背景】微生物在菌根真菌的孢子萌发、菌丝体生长、菌根形成以及子实体发育等过程中起到一定作用。【目的】对采自云南省昆明市嵩明县和楚雄彝族自治州禄丰县的8个干巴菌子实体内的微生物进行分离培养鉴定,为后期研究微生物与干巴菌之间的相互作用奠定基础。【方法】采用传统平板分离法从干巴菌子实体内分离获得微生物群落,t检验分析不同地区采集的干巴菌子实体内微生物菌落总数的差异,16S r RNA基因和ITS序列进行系统发育树构建和微生物多样性分析。【结果】采自嵩明县和禄丰县的8个干巴菌子实体内共分离获得282株可培养的细菌,两个地区的细菌菌落总数无显著差异(P=0.22)。所有细菌分属2门12属15种。其中80%的细菌属于变形菌门,且以γ-变形菌为优势菌群,假单胞菌属(Pseudomonas)为优势菌属。其余20%的细菌属于拟杆菌门。从干巴菌子实体中分离获得114株真菌,两个地区的真菌菌落总数无显著差异(P=0.65)。所有真菌分属2门10属10种。其中62%的真菌属于子囊菌门(Ascomycota),并以分离自禄丰县干巴菌子实体内的Lophiostoma为优势属。38%的真菌属于担子菌门(Basidiomycota),并以Asterotremella为优势属。【结论】两个不同地区采集的干巴菌子实体内细菌和真菌在菌落总数上无显著差异。所有细菌都以γ-变形菌为优势菌群,假单胞菌属为优势菌属。嵩明干巴菌子实体内真菌以担子菌门为优势菌群,Asterotremella为优势属。而禄丰干巴菌子实体内真菌则以子囊菌门为优势菌群,Lophiostoma为优势属。     

中国青岛沿岸潮间带海藻中的可培养真菌多样性（英文）

从中国青岛沿岸潮间带采集9种海藻,包括3种褐藻、4种绿藻和2种红藻,通过传统培养方法共分离获得92株真菌。根据形态学特征和真菌转录间隔区(ITS)r DNA序列分析对所得菌株进行鉴定,结果显示:92株真菌隶属子囊菌门56种,担子菌门1种及接合菌门1种;优势属为枝顶孢属、曲霉属、枝孢属、青霉属和帚霉属;无性型真菌40种,占总菌株数量的75%;绿藻门刺松藻的真菌多样性最高,其次为褐藻门鼠尾藻,红藻门珊瑚藻的真菌多样性最低。本研究首次对中国沿岸潮间带海藻中的真菌多样性进行报道,为进一步研究藻生真菌生态功能提供参考。     

罗汉果内生真菌多样性研究

该文采用传统形态学方法结合r DNA-ITS序列分析,对我国重要药用植物罗汉果中的内生真菌进行了鉴定并研究其多样性。结果表明:采用组织培养法从罗汉果健康植株中共分离得到150株内生真菌,包括罗汉果中雌株的内生真菌96株、雄株的内生真菌54株。122株内生真菌经形态学结合r DNA-ITS序列分析鉴定为9个属,均归属为子囊菌门,包含座囊菌纲(Dothideomycetes)和子囊菌纲(Sordariomycetes)。其中,座囊菌纲(Dothideomycetes)真菌包含3科、3属;子囊菌纲(Sordariomycetes)真菌包含6科、6属。优势属为刺盘孢属(Colletotrichum)和镰刀菌属(Fusarium)。罗汉果雌、雄植株不同组织中内生真菌的定殖率及分离率的变化规律均不相同,雌株中以根中内生真菌的定殖率和分离率最高,叶片中的最低;在雄株中以叶片中的定殖率和分离率最高,根中的最低。不同菌株在雌、雄两种植株的不同组织中的分布均不同,结合内生真菌群落组成的相似性比较结果,表明部分内生真菌对罗汉果雌株和雄株,以及同一植株中的不同组织均具有偏好性。不同组织中内生真菌的多样性指数在0.11~0.69的范围,其中雌株根部的内生真菌多样性指数最高。以上研究结果为后期探究内生真菌与罗汉果互作关系奠定了基础。     

取食行为对丽蝇蛹集金小蜂雌雄成虫体内可培养真菌的影响

【目的】本研究旨在阐明取食行为对丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis(Walker)雌雄虫体内可培养真菌群落结构的影响,对其体内可培养真菌进行多样性研究。【方法】采用不同浓度、不同培养基通过分离培养法研究丽蝇蛹集金小蜂体内真菌,将培养所得真菌采用形态和分子方法(ITS基因序列)进行鉴定。【结果】取食前后丽蝇蛹集金小蜂雌、雄虫体内共分离得到49种真菌,隶属子囊菌门,盘菌亚门的座囊菌纲、散囊菌纲、锤舌菌纲、子囊菌纲,共10个属,其中以链格孢属(Alternaria)、枝孢属(Clacdosporium)、青霉属(Penicillium)为优势属。【结论】丽蝇蛹集金小蜂体内可培养真菌物种数目,雄虫多于雌虫,取食后多于取食前。本研究结果说明食物、性别是丽蝇蛹集金小蜂体内可培养真菌群落结构产生差异的重要因素。     

小蓬竹根际土壤真菌多样性研究

为认识喀斯特山地适应竹种小蓬竹根际土壤微生物多样性,本文采用稀释平板法研究小蓬竹根际土壤真菌多样性。结果表明,菌落具有表型差异的真菌共33株,r DNA‐ITS进行BLAST划分为12个属24个种,相似度为75%–100%。子囊菌门真菌11个属、23个种、32株;担子菌门仅有1株,属多年卧孔菌属。子囊菌门的青霉属的菌株数量最多,占总菌株数21.21%。小蓬竹根际真菌数量为9.19×105/cfu?g,Shannon‐Wiener多样性指数H为2.2180,Margalef丰富度指数R为12,Pielou均匀度指数J为0.8926。     

青藏高原食草动物粪栖真菌的多样性

分别利用真菌通用引物和厌氧真菌特异引物构建了西藏地区3种反刍动物和1种单胃动物共8份新鲜粪样的ITS克隆文库,以通过系统发育分析解析其中好氧真菌与厌氧真菌的多样性。通用引物ITS文库测得324条真菌序列,分别属于子囊菌门Ascomycota 3个目、担子菌门Basidiomycota 2个目、接合菌门Zygomycota的1个目和严格厌氧的新丽鞭毛菌门Neocallimastigomycota,共24个OTUs。其中,子囊菌门相对丰度最高,占80.6%;新丽鞭毛菌门相对丰度最低,仅占0.6%。大部分OTUs与已知真菌属、种关系较远。厌氧真菌特异引物文库测得661条序列,全部属于新丽鞭毛菌门,包括所有已知的厌氧霉属Anaeromyces、盲肠菌属Caecomyces、肠霉属Cyllamyces、新丽鞭毛属Neocallimastix、奥式霉属Orpinomyces、胃梨囊霉属Piromyces 6个属和3个未培养的属级类群(NG9、NG10、NG11),共29个OTUs。其中3个已知的单中心属存在于所有反刍动物样品中,并以Piromyces相对丰度最高(37.4%)。单胃动物马粪样中全部为NG9类群。NG9是本研究新发现的属级类群,研究中同时揭示有多个未培养种和潜在的新种。研究结果证明青藏高原反刍动物粪栖真菌多样性较高,并存在丰富的未培养种和潜在的新属及新种。     

中国一些地卷属地衣内生真菌的多样性

地衣内生真菌多样的次生代谢产物具有良好的生物活性,正成为一种新兴的生物资源,具有广泛的应用潜力,因此获得大量合适的地衣内生真菌菌株尤为关键。以东北大兴安岭和云南丽江地区地卷属Peltigera地衣为试验材料,采用皮层剥离法进行内生真菌的分离、培养和纯化;分析内生真菌的分离率和定殖率;根据内生真菌菌落、菌丝及孢子特征,选取代表性菌株进行DNA提取,nrDNA-ITS测序并通过GenBank数据库搜索同源序列,Mafft进行序列比对分析其物种多样性。结果显示,从大兴安岭地区采集的8种地卷属地衣中分离283株内生真菌,平均分离率为25.82%,定殖率为22.17%;从丽江地区采集的2种地卷属地衣中分离81株内生真菌,平均分离率为54.36%,定殖率为42.28%。从62个测序菌株中确定了53个种级分类单元,隶属于10纲、19目、32科的38属。其中41种属于子囊菌门,11种属于担子菌门,1种属于毛霉菌门。地卷属地衣内生真菌物种组成成分的优势科为炭角菌科Xylariaceae和炭团菌科Hypoxylaceae,二者相对频率皆达16.21%;优势属为炭团菌属Hypoxylon,其相对频率为11....     

西藏昆诺阿藜种子可培养内生真菌多样性

探究西藏不同地区昆诺阿藜种子内生真菌的物种组成、多样性等群落结构特征,丰富昆诺阿藜种子相关微生物的可利用资源,对于微生物资源利用和昆诺阿藜病害的生物防控具有重要意义。本研究收集西藏不同海拔3个地区(日喀则、拉萨和林芝)的昆诺阿藜种子,利用传统分离方式进行了真菌的培养。从46份昆诺阿藜种子中共分离出947株真菌,经ITS序列分析结合形态观察鉴定为1门9目12科26属77种。所有的真菌都归类为子囊菌门Ascomycota,菌株数量相对丰度最高的3个属为链格孢属Alternaria (40.2%)、镰刀菌属Fusarium (17.4%)和茎点霉属Phoma (13.9%)。按照多样性指数,日喀则地区的昆诺阿藜内生可培养真菌的多样性明显高于拉萨和林芝两个地区。     

基于高通量和传统培养法分析白首乌根际真菌多样性

探讨白首乌根际土壤真菌群落组成结构与分布规律,为优选根际促生菌、提高仿野生种植技术提供科学理论依据。综合Illumina MiSeq高通量测序技术和传统分离培养技术,分析测定3个产地2个根茎深度的白首乌根际土壤真菌群落的丰富度和多样性,分离鉴定可培养根际真菌的种类。6个样品共得到真菌1 589个OTUs,分属于11门35纲84目142科237属,子囊菌门（Ascomycota）和被孢霉门（Mortierellomycota）是样品共同的优势菌门;6个样品通过传统培养法共分离得到103个形态型,分为3门8纲10目12科16属37种,优势菌属为木霉属（Trichoderma）和镶刀菌属（Fusarium）。综合比较,高通量测序技术可以得到更全面的菌落数据,传统分离培养技术可以纯化出适应性强的菌株;不同产地和根茎深度样品间土壤真菌群落存在显著差异性。     

南方红豆杉产紫杉醇内生真菌的分离鉴定

从南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)植株分离到内生真菌63株,其中24株经鉴定分属于19个种(属).真子囊菌纲的2个属2株,半知菌纲的14个属22株.真子囊菌纲的无毛毛壳属(Achaetomiumsp.)的1株为新发现种.半知菌纲的葡萄孢属(Botrytissp.)1株和无孢菌群(Mycelia sterlia)2株的培养液,经浓缩萃取,薄层层析检测,Rf值分别为0.404、0.404、0.401,与紫杉醇对照品Rf值一致,为南方红豆杉产紫杉醇内生真菌.     

海洋生物共附生真菌的分离、鉴定及抗菌活性分析

对海南文昌海域采集的海草、海绵和石珊瑚的共附生真菌进行分离、鉴定及抗菌活性分析。采用3种分离培养基分离海草、海绵和石珊瑚的共附生真菌,利用ITS序列分析对分离的真菌进行鉴定,采用滤纸片扩散法对分离真菌的发酵产物进行抗菌活性分析。结果从10种海草、9种海绵和11种石珊瑚中共获得113株真菌。ITS序列分析初步确定了32株独立菌株的分类地位,归属于3个门(子囊菌门、担子菌门和半知菌门),8个目和10个属,其中子囊菌门所占比例最高为58.82%,半知菌门次之为32.35%,担子菌门最少为8.83%;抗菌活性测试显示12株真菌的发酵产物对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抗菌活性。初步揭示了海南文昌海域海草、海绵和石珊瑚的共附生真菌的多样性以及其发酵产物的抗菌活性。