不同脱乙酰度和分子量壳聚糖的神经亲和性研究

研究了四种不同脱乙酰度和分子量的壳聚糖与神经细胞的亲和性。利用酶联免疫技术（ELISA）测定了人血清白蛋白和纤粘蛋白在四种壳聚糖膜上的吸附量,并利用圆二色柱（CD）测定了人血清白蛋白吸附在四种壳矣糖膜上的二极结构。通过研究它们对胎鼠大脑皮层细胞（FMCC）生长的影响,发现在这四种壳聚糖中,分子量较大的两种壳聚糖更有利于神经细胞的生长,许多轴突聚集成树干状。     

聚乙二醇对羟基丁酸和羟基己酸共聚物的共混改性研究

本研究以聚羟基脂肪酸酯家族中的新成员羟基丁酸和羟基己酸共聚物（PHBHHx）为基础,采用与聚乙二醇（PEG）共混的方法对其进行改性,研究结果证实：PHBHHx与PEG 共混物中比例为3:1及2:1时,两者完全物理相容。而PEG在共混物中比例升高时则导致相分离,成为部分相容体系。PEG掺入显著提高材料亲水性及表面自由能,使血管平滑肌细胞（RaSMCs）及血管内皮细胞（HUVECs）的细胞粘附及增殖大幅度提高,并且均具有一定的PEG含量依赖性。其中对RaSMCs的作用最为明显,RaSMCs能在PEG/PHBHHx比例为1:1的共混膜（E1X1）上持续增殖至融合,而HUVECs则呈粘附较差的类球形形貌,证实E1X1可以潜在应用于复合血管组织工程支架中的近内膜基材。     

聚羟基脂肪酸酯纳米微球：结构特征、生物合成及其在生物技术和生物医药领域的应用

聚羟基脂肪酸酯（polyhydroxyalkanoate）PHA 纳米微球是很多微生物在营养失衡的情况下,在体内合成的一种可生物降解的细胞内聚酯,主要作为微生物的碳源及能量储备。天然 PHA 微球的内部是由疏水的聚酯链构成的疏水核心,其外层是由磷脂界膜及膜上嵌入或附着的包括 PHA合酶 PhaC 和 PHA 颗粒相关蛋白 PhaP 等蛋白构成的边界层。PhaC 通过共价键连接在PHA微球表面,而 PhaP 通过疏水相互作用吸附在 PHA 微球表面。通过将外源性功能蛋白与 PhaC 或 PhaP 进行融合表达,在重组微生物体内就能直接合成表面带有功能蛋白的纳米微球复合体。由于该纳米微球在微生物细胞内是以独立的包涵体形式存在,因此通过细胞破碎及离心等方法就能简便、有效地使其从细胞中分离并得以纯化。鉴于 PHA 微球这种表面易被修饰改造的特性,越来越多的功能蛋白通过与 PHA 微球表面蛋白（PhaC 或 PhaP）的融合表达,呈递在了 PHA 微球表面,使其成为一种廉价、高效的蛋白固定化及呈递的新技术。本文在介绍了 PHA 微球的结构特性及生物合成的基础上,着重综述了目前关于功能化 PHA 微球在蛋白纯化、固定化酶、生物分离、靶向递药、疾病诊断、成像技术及新型疫苗开发方面的研究现状及其未来在生物医药等领域的广泛应用前景。     

费氏中华根瘤菌合成羟基丁酸和羟基己酸共聚体的研究

进行了费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)合成羟基丁酸和羟基己酸共聚体[P(HB-HH)]的研究,通过摇瓶正交试验优化了培养基成分、培养条件和癸酸盐调控条件,采用发酵罐分批发酵和两阶段补料分批发酵方式及两步加盐法研究了P(HB-HH)的高密度发酵技术参数。经55h发酵,P(HB-HH)产量可以达到17.55g/L,其中HH单体含量占共聚体的20.6%,该共聚体的分子量约为1.4×105D。结果表明S.fredii的生产性状优良,有可能通过该菌株的高密度发酵与代谢调控实现P(HB-HH)的工业化生产。     

玉米螟幼虫侧单眼的神经鞘和胶质细胞

用透射电镜观察了欧洲玉米螟Ostrinia nubilalis(Hbner)5龄幼虫侧单眼神经的神经围膜、周神经细胞和其他神经胶质.神经围膜与若干周神经细胞包围若42根轴突.周神经细胞的原生质膜在它们的侧面和内面高度卷曲,并与相邻细胞交错对插,这是细胞与细胞间的特殊连接方式;它们的外面以桥粒和半桥粒固定在神经围膜内面.周神经细胞由神经胶质细胞演化而来,所形成的膜称神经束膜,它与神经围膜组成围在侧单眼神经外面的神经鞘.侧单眼神经内的神经胶质细胞大而平整,具有许多突起物(相当于脊椎动物的少突神经胶质细胞),每一个突起物包被一个感光轴突.神经胶质细胞包被轴突的形式有三种不同的类型:一种是相邻轴突间插入15层神经胶质细胞突起物所形成的普通轴系膜形式,另两种是神经胶质细胞突起物在一个轴突的周围,由一些褶所形成的不同形式.最后,对这些神经胶质细胞以不同形式包被轴突的功能意义进行了讨论.     

补料培养提高真养产碱杆菌产3-羟基丁酸和3-羟基戊酸共聚物生产强度的研究

对Alcaligeneseutrophus进行高密度培养 ,研究表明在发酵过程中进行有效控制 ,可以较大幅度地提高 3-羟基丁酸和 3 羟基戊酸共聚物 [P(3HB-co-3HV) ]的生产强度。实验中选择使用限氮的方法积累P(3HB-co-3HV) ,分别采用丙酸和戊酸为 3HV前体 ,对摇瓶种子生长状态 ,停氮时机对菌体生产P(3HB-co-3HV)的影响以及补酸 (3HV前体 )策略进行了研究 ,在 6.6L罐中 ,以葡萄糖为碳源 ,以丙酸为 3HV前体培养 5 0h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 149.9g L ,12.49g L ,83.3% (其中 3HV组分占PHA的 12 4mol% ) ,生产强度达到 2.50 (g·h^-1·L^-1) ;以戊酸为3HV前体培养 45h ,细胞干重 ,PHA产量 ,PHA含量分别达到 16.02g L、119 0g L、74.2 % (其中 3HV组分占PHA的17.7mol% ) ,生产强度达到 2.64(g·h^-1·L^-1)     

补料培养提高真养产碱杆菌产3-羟基丁酸和3-羟基戊酸共聚物生产强度的研究

对Alcaligenes eutrophus进行高密度培养,研究表明在发酵过程中进行有效控制,可以较大幅度地提高3－羟基丁酸和3－羟基戊酸共聚物[P(3HB-co-3HV)]的生产强度。实验中选择使用限氮的方法积累P(3HB-co-3HV),分别采用丙酸和戊酸为3HV前体,对摇瓶种子生长状态,停氮时机对菌体生产P(3HB-co-3HV)的影响以及补酸（3HV前体）策略进行了研究,在6．6L罐中,以葡萄糖为碳源,以丙酸为3HV前体培养50h,细胞干重,PHA产量,PHA含量分别达到149．9g/L,149.9g/L,83.3%(其中3HV组分占PHA的12．4mol%),生产强度达到2．50（g.h^-1.L^-1);以戊酸为3HV前体培养45h,细胞干重,PHA产量,PHA含量分别达到160．2g/L,119.0g/L,74.2%（其中3HV组分占PHA的17．7mol%)生产强度达到2．64（g.h^-1.L^-1)。     

人和大鼠胃窦部神经内分泌细胞分布和形态学的比较研究

目的探讨人和大鼠胃窦部神经内分泌细胞的分布和形态学特征。方法采用免疫细胞化学方法,检测人和大鼠胃窦部粘膜内生长抑素细胞(D细胞)、胃泌素细胞(G细胞)、5-羟色胺细胞(5-HT细胞)、嗜铬粒素A细胞(CgA细胞)的分布。结果人和大鼠的G、D细胞的特征是都具有细胞突起,但是在细胞密度及其分布上是不同的;5-HT细胞的分布在两组稍有不同,在大鼠胃窦部,大多数5-HT细胞位于腺体基部,而人的5-HT细胞主要在间质,少数位于腺上皮内;在两组中,CgA细胞几乎布满整个胃粘膜,其数量也高于其他神经内分泌细胞,CgA细胞形态多样,胞质内充满细小颗粒。结论1)人与大鼠的G、D细胞通常都伴有突起,但其分布不同。2)5-HT细胞形态多样,分布于间质和腺上皮内。3)CgA细胞特征是胞质内充满细小颗粒,细胞形态多样,几乎布满整个粘膜。     

胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(△N39)活性片段.将HIV-1 Tat蛋白转导区(protein transduction domain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(△N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(△N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF(△N39)、GDNF(△N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRαl和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3,观察GDNF(△N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF(△N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF(△N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.     

胶质细胞源性神经营养因子(ΔN39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) 在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(ΔN39)活性片段. 将HIV-1 Tat 蛋白转导区 (protein transduction domain,PTD) 的9个碱性氨基酸⁴⁹RKKRRQRRR⁵⁷模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(ΔN39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(ΔN39)-R9融合蛋白. 将GDNF、GDNF(ΔN39)、GDNF(ΔN39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRα1和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性. 运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3,观察GDNF(ΔN39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF(ΔN39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力. 结果显示：GDNF(ΔN39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.     

多聚赖氨酸改性壳聚糖对神经细胞的作用

壳聚糖是一种具有优良的生物相容性的生物可降解材料。研究几种与壳聚糖相关的材料对神经细胞生长的促进作用。实验方法以在材料上培养神经细胞为主。选用胎鼠大脑皮层神经元和神经胶质瘤细胞9L。另外 ,本实验还使用ELISA法测量细胞外基质粘附分子在材料上的吸附量 ,并测量各材料的接触角以研究细胞在材料上的吸附和铺展。结果发现壳聚糖对神经细胞的生长有良好的促进作用 ,而壳聚糖表面涂敷多聚赖氨酸和壳聚糖与多聚赖氨酸混合材料是比壳聚糖更好的促神经细胞生长的生物材料 ,都是很有应用前景的神经修复材料。     

脾结节生成细胞(CFC-S)特性的研究

用肉眼观察和放射自显影的方法比较了9d和13d脾结节的生成。同样是能够生成脾结节的细胞,但重建照射小鼠的造血功能的潜力不同。实验结果表明,仅仅根据脾结节的生成,或者脾结节生成的先后时间,都不足以作为判定其是否为造血干细胞的唯一依据,脾结节生成细胞是在性能上不均一的细胞群体,对脾结节生成细胞的自我更新能力的实际测定,才能对其是否具有造血干细胞的基本性能做出可靠结论。     

高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建

重组大肠杆菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉＨＭＳ１７４（ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ） 含有携带聚羟基烷酸（ＰＨＡ） 合成基因（ ｐｈａＣＡＢ）＊＊ 的质粒ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ,是很有潜力的ＰＨＡ 生产菌,但存在着质粒不稳定和不能合成３羟基丁酸（３ＨＢ） 与３羟基戊酸（３ＨＶ） 共聚物［Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ）］ 的缺陷。将ＲＫ２ 质粒上的ｐａｒ ＤＥ 基因引入ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ 构成质粒ｐＪＭＣ２ ,该质粒可以在宿主Ｅ．ＣｏｌｉＨＭＳ１７４ 中稳定遗传。将培养基中的磷酸盐浓度降至１８ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,发现Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） 能够以丙酸为前体合成Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为５ ％ ～８ ％ 。在５Ｌ自动发酵罐中分批补料培养Ｅ．Ｃｏｌｉ ＨＭＳ１７４（ｐＪＭＣ２） ,培养基初始磷酸盐浓度为１５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ,３０ ｈ 后每升培养液中干菌体可达４２－５ ｇ,Ｐ（３ＨＢｃｏ３ＨＶ） 占干重的７０ ％ ,其中３ＨＶ 在共聚物中的含量为４－９ ％ 。     

STUDIES ON THE MECHANISM OF HAEMOPOIETIC STEM CELL (CFUs) MOBILIZATION

A variety of substances can mobilize haemopoietic stem cells (CFUs) into the peripheral blood. In this study the involvement of the complement system in the mobilization process was investigated. Pretreatment of mice with the complement-activating factor of cobra venom (CoF), which lowered the serum C3 levels to 10–25% of the normal value, could completely prevent CFUs mobilization induced by high doses of CoF, endotoxin (ET) from Salmonella typhosa, inulin, zymosan and the proteolytic enzymes proteinase and trypsin. On the other hand, mobilization induced by the polyanions dextran sulphate and the copolymer of polymethacrylic acid and styrene could not be prevented, or at least affected only slightly. There appears to be a relationship between the extent of decomplementation by CoF and the extent of CFUs mobilization induced by ET. The results indicate that certain agents mobilize CFUs via the complement system, whereas other agents induce CFUs mobilization independent of the availability of complement components.     

花背蟾蜍视网膜感光细胞分化的研究

经电镜及间接荧光抗体对花背蟾蜍视网膜感光细胞分化的研究,结果表明:视网膜感光细胞在视网膜中央首先分化,同一切片中位于中央的细胞分化程度最高,离它越远、分化越低。以中央细胞为准,胚胎发育到21期,感光细胞开始分化,22期外节出现,外节盘膜是直接以外凸折叠形成的。同时在视网膜杆锥层出现视蛋白特异性荧光,说明光敏蛋白的合成,感光细胞轴突与双极细胞建立突触联系。至此(22期末),感光细胞行使功能的结构基本形成。到25期,外节盘数达300多层,突触结构发育成熟。     

前列腺组织中神经生长因子(NGF)表达的研究

研究前列腺组织中神经生长因子（ＮＧＦ） 的生理学意义。采用原位杂交和免疫组化法, 检测４３ 例前列腺增生组织, ８ 例腺癌组织和８ 例正常组织中β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ及其蛋白的表达及分布。结果显示β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ 在正常组织及增生组织中定位于间质细胞, 偶见于上皮细胞中; 而在癌组织中, 上皮细胞和间质细胞有同样强度的β－ＮＧＦｍ ＲＮＡ染色。其蛋白在良性组织中表达主要着色在间质细胞中,上皮细胞呈弱表达,而癌组织中上皮细胞见着色明显增强（Ｐ＜ ０．０５）。ＮＧＦ的自分泌异常可见是前列腺组织由良性向恶性转变的原因之一。     

用Hela229细胞培养法研究呼吸道肺炎衣原体感染

本文用Ｈｅｌａ２２９细胞培养与单克隆抗体免疫荧光法对９４０例咽拭子及２２４例纤支镜取材标本进行肺炎衣原体分离鉴定。结果正常组、上呼吸道感染组、下呼吸道感染组、肺部肿瘤组的咽拭子标本分离率分别为０％（０／２４８）,２．１３％（１０／４６８）,２．１％（３／１４６）,１．２８％（１／７８）。上呼吸道感染组和下呼吸道感染组的分离率均高于正常组和肺部肿瘤组。前二组与正常组的差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）,与肿瘤组的差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。下呼吸道感染组、肺部肿瘤组的纤支镜取材分离率分别为１０．９６％（     

三氧化二砷对K562细胞凋亡的诱导及生长抑制作用的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。方法：以As2O3作为耐药逆转剂,用台盼兰排染法,噻唑兰(MTT)还原法,Hoechst 33342和PI荧光染色法,流式细胞仪技术和荧光分光光度法,观察了不同浓度的As2O3(0．2—5．0μmol/L)对人红白血病细胞株K562的生长抑制和凋亡诱导作用。结果：As2O3对K562细胞具有明显生长抑制和凋亡诱导作用,其作用强度在一定范围内均具药物浓度和时间依赖性。结论：As2O3主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其毒性作用。