流行性乙型脑炎目动免疫的买验研究II．小白鼠免疫后的保护力与攻击途径的关系

本文研究了小白鼠经流行性乙型脑炎疫苗免疫后对脑内与皮下攻击的保护力。此外,也进行了抗体水平与保护力关系的研究。实验证明小白鼠经一次脑炎疫苗免疫后虽然对脑内攻击没有保护力或保护力很低,但在皮下攻击时可以观察到小白鼠有很强的保护力,而且在免疫后一、=天时对少量病毒的皮下攻击已有保护现象。脑炎疫苗二次免疫小白鼠后,小白鼠不仅对皮下攻击有很高的保护力,而且对脑内攻击也能表现有保护现象,其保护指数不仅与疫苗量有关,而且与注射嗣隔有关,一般注射间隔短者其保护力较低,注射间隔长者其保护力则较强。实验并就明免疫的小白鼠对脑内攻击的保护力持续时间不长,而在血液中的中和抗体持续时间较久。最后,本文对机体的保护力与戚染途径的密切关系进行了讨论。     

内源性鸦片样物质在出血性和中毒性休克中的作用

本工作应用家兔作急性实验发现:(1)脑室注射50微克β-內啡肽,可使血压下降12.2±2.0毫米汞柱。此效应可被脑室注射鸦片受体阻断纳络酮所拮抗。(2)在出血性和中毒性休克时,脑内鸦片样物质的活性显著升高。其中以脑干部位升高得更为明显。(3)脑室注射80微克纳络酮可以部分桔抗出血性和中毒性休克的低血压效应,延长中毒性休克动物的存活时间。(4)脑室注射100微克的5-羟色胺可以逆转纳络酮的抗休克作用,使休克低血压效应加剧。这些实验结果提示:中枢鸦片样物质在休克发生过程中具有重要作用。阻断鸦片样物质的作用,可能是防治休克低血压效应的一个途径。     

侧脑室内注射微量五肽胃泌素对大鼠胃肠推进运动的影响

以炭粉混悬液在大鼠小肠内推进距离占小肠全长的百分数,作为胃肠推进运动的指标,观察了侧脑室内注射微量五肽胃泌素(G_5)对这一推进运动的影响。结果如下:(1)侧脑室内(ICV)注射c_5(1μg/10μl、2μg/10μl 或4μg/10μl)可显著增强胃肠推进运动(P<0.01—0.001)。切断两侧膈下迷走神经、阿托品皮下(0.2mg/kg)或侧脑室内(5μg/10μl)注射均可完全阻断这一增强效应(P<0.001)。(2)肌注较大剂量G_5(20μg/100g)可显著增强胃肠推进运动(P<0.001),这一效应亦可为皮下注射阿托品(0.2mg/kg)所完全阻断(P<0.001)。(3)酚妥拉明(2.5mg/kg im或50g/10μl ICV)或心得安(5mg/kgim或50μg/50μl ICV)对侧脑室内注射G_5增强胃肠推进运动的作用均无影响(P>0.05)。上述结果表明侧脑室内注射G_5后,可能激活中枢胆硷能系统,通过迷走神经而使胃肠推进运动增强。     

制备兔抗人IgG抗体的一种简便方法

我们采用中等剂量抗原免疫法,用加佐剂的纯化人IgG抗原对家兔足掌、皮下和肌肉多点注射进行基础免疫,用不加佐剂的单独人IgG抗原肌肉和皮下多点注射后,再经耳缘静脉注射进行加强免疫相配合,制我们采用中等剂量抗原免疫法,用加佐剂的纯化人IgG抗原对家兔足掌、皮下和肌肉多点注射进行基础免疫,用不加佐剂的单独人IgG抗原肌肉和皮下多点注射后,再经耳缘静脉注射进行加强免疫相配合,制备成高效价（1：32）兔抗人IgG抗血清。     

牛胰多肽对急性胰腺炎大鼠胰组织中磷脂酶A和胰蛋白酶活性的影响

以0.25％牛磺胆酸钠-0.25％胰蛋白酶溶液注入大鼠胰导管制备急性(出血坏死性)胰腺炎模型。观察剂量为 3μg/kg的牛胰多肽(BPP)对胰腺炎大鼠胰组织磷脂酶 A(PA)活性、钙含量、胰蛋白酶活性以及血清α_1-抗胰蛋白酶抑制力(STIC)的影响。结果如下:1.在伴注BPP的胰腺炎组,PA 活性、钙含量、胰蛋白酶活性及STIC 分别降为胰腺炎组的51％(P<0.001),75％(P<0.001)、20％(P<0.001)以及24％(P<0.001);2.在伴注碳酰胆碱的胰腺炎组,上述四项指标的水平升高。但在伴注碳酰胆碱及BPP 两者的胰腺炎组却分别降至伴注碳酰胆碱的胰腺炎组的39％(P<0.005)、51％(P<0.001)、40％(P<0.001)以及 59％(P<0.001);3.在伴注Ca~(2 )的胰腺炎组,上述四项指标剧升,注射 BPP对其无影响。结果提示,BPP 能降低大鼠胰组织内磷脂酶A 和胰蛋白酶活性及胰内钙沉积量。机制可能与 BPP打断胰酶活化链有关,是否还影响腺泡细胞膜上M受体的功能,有待探讨。     

多价免疫原用绿脓杆菌CMCC(B)-10117株替换株的初选

从临床分离绿脓杆菌菌株中,筛选与CMCC(B)-10117株抗原高度相关的菌株PA02010,PA02015,PA02033,PA02037和PA02048进行抗原成分分析。在此基础上,选择了PA02048进行家兔抗原性试验和小鼠保护性试验。家兔抗原性试验证明,肌肉注射的效价为1：320～1：640;静脉注射产生抗体能力强于肌肉注射,效价为1：2560～1：5120。从动物保护性试验看,免疫动物均能很好耐受5个LD50的本菌攻击,在10个LD50的本菌攻击时,免疫动物的存活率能达到90％;而对照组动物没有一个存活。所有试验表明。PA02048菌株是替代CMCC(B)-10117菌株的较为理想的菌株。     

抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究

目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。     

动脉壁脑啡肽的含量,存在部位及作用途径

用放射免疫法测得兔动脉的亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和甲硫氨酸脑啡肽(M-ENK)样免疫活性物的含量(pg/mg组织湿重)分别为耳动脉38.99±17.29,134.67±8.11;肾动脉31.10±7.76,93.60±18.22,肠系膜动脉25.70 13.60,88.43±18.16。动物经注射交感神经末梢化学切割剂6-OHDA后,这三种动脉中L-ENK样免疫活性物的含量均明显下降(P<0.001);切除颈上神经节使支配耳动脉的交感神经溃变后,或离体耳动脉条受电场刺激后,脑啡肽(ENK)样免疫活性物的含量也都显著下降(P<0.001);但注射利血平则无明显影响,用荧光法测定培育动脉条的浴槽液中NE的含量,观察到ENK可抑制电场刺激所引起的NE的释放。结果提示,动脉壁的L-ENK和M-ENK存在于交感神经末梢中,它可因受电场刺激而释放,可能通过激活突触前膜阿片受体,减少交感神经末梢释放NE,从而抑制动脉的收缩活动。     

人体白细胞转移因子和“免疫”核糖核酸的联合抽提法——Ⅰ.转移因子

本文介绍一种制备转移因子(TF)的改进方法。白细胞于冷40%乙醇溶液中被打碎,白细胞匀浆冷冻离心,上清液除去乙醇后再通过超滤薄膜,滤液即为TFu 制剂。此法操作简便,条件严格,可避免细胞内成分的自溶及细菌或热原的污染,又可综合抽提白细胞内的“免疫”核糖核酸,适合于大规模制备TF。每单位TFu 相当于0.5克或4.45±1.35×10~8白细胞的超滤物,含固体6.86±0.72毫克,核糖183.24±26.0微克,多肽797.22±197.07微克,环化腺嘌呤核苷酸58.45±10.70毫微克。E_(250毫微米)=7.86±0.98,E_(260)/E_(280)=2.62±0.12。具有特征性葡聚糖G-25凝胶过滤洗脱图谱。动物实验证明此制剂无毒性、热原、过敏性和抗原性。注射于病人能提高其迟发型皮肤变态反应及细胞免疫反应。讨论了由透析法及本法制备的TF 理化性质差别的原因。     

蛋白激酶C部分参与伤害性刺激在脊髓背角神经元中引起的c-fos蛋白的表达而可能不参与阿片受体对脊髓痛感受的调制

实验用免疫细胞化学技术观察了大鼠鞘内分别注入蛋白激酶(PKC)抑制剂Chelerythrine(Chel)、纳洛酮(Nal)、或二者同时注入后,由后脚掌注射福尔马林引起的脊髓腰膨大背角中c-fos蛋白样免疫活性(Fos-LI)神经元数目的改变。结果发现:(1)鞘内注入Chel可显著降低福尔马林注射侧脊髓背角中Fos-LI神经元的数目,同空白对照组(鞘内注入生理盐水或10％的DMSO)相比,降低60.3％(P<0.001):(2)鞘内注入Nal后,福尔马林注射侧背角中Fos-LI神经元显著增加,同对照组相比,增加46.0％(P<0.01),而以背角深层增加最为明显;(3)在鞘内同时注入Chel和Nal后,与单独注入Nal组相比,脊髓背角中Fos-LI神经元的数目显著降低(降低53.2％),此数值与上述单独注入Chel时引起Fos-LI神经元降低的百分率近似。结果提示:(1)PKC只参与脊髓背角中部分Fos-LI神经元中c-fos蛋白的表达;(2)PKC可能不参与背角中同时激活的μ-(以及部分δ-)阿片受体对脊髓伤害性感受的调制。     

刺激大鼠蓝斑核区对胃电和胃运动的影响

用乌拉坦麻醉的大鼠,同步描记血压、胃电和胃运动,观察了刺激蓝斑核区对胃电和胃运动的影响,分析了其作用途径。实验结果表明,刺激蓝斑核区后血压平均升高60.5mmHg(P<0.001);胃电慢波的振幅由对照的0.52mV 减弱到0.18mV(P<0.001)。快波的振幅和频率也减少。胃内压平均下降到对照值的29.9％(P<0.001)。在横断颈髓的动物刺激蓝斑核区后血压的升高幅度明显减弱,平均升高9mmHg,升压效应的潜伏期明显延长;胃电慢波的振幅由对照的0.53mV 减弱到 0.24mV(P<0.001)。胃内压平均下降到对照值的45.1％。对胃电和胃运动的这种抑制效应可被切断迷走神经所完全消除。在事先切断迷走神经但脊髓仍保留完整的动物,刺激蓝斑核区使胃内压平均下降36.6％(P<0.01)。根据以上结果认为,蓝斑核区可能参与对胃电和胃运动的中枢性调节。此调节机制可能经由脊髓和迷走两条通路实现。     

雷公藤甲素对KA损伤大鼠星形胶质细胞的影响

目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后星形胶质细胞的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响。方法:90只SD大鼠(200～220g)随机分为3组:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃作为对照组(NS NS),右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA NS),右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA TRP)。动物存活1天,3天,5天,7天,14天后免疫组织化学结合图像分析技术观察海马内星形胶质细胞形态和数目的变化。结果:(KA NS)组海马内星形胶质细胞数目明显增多,胞体明显增大,突起变短,变粗,与(NS NS)组相比差别具有显著性(p<0.05);(KA TRP)组星形胶质细胞数量明显减少,胞体变小,突起变细长,与(KA NS)组相比差别具有显著性(P<0.05)。结论:KA注射后可导致大鼠海马内星形胶质细胞的激活,雷公藤甲素对KA诱导的星形胶质细胞的活化有抑制作用。     

小鼠对表达HBV截短肽的耻垢分枝菌的免疫应答

分别以生理盐水、pcDNA3.1(-)空质粒、重组真核质粒pcDNA3.1(-)-C-preS1(简称基因免疫组)、耻垢分枝杆菌和重组耻垢分枝杆菌(简称重组耻垢免疫组)注射BALB/c小鼠,各组均免疫2次,每次间隔3周。末次注射后进行连续抗体测定,最后处死小鼠分离脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验和细胞毒性T细胞杀伤实验。重组耻垢免疫组抗体滴度升高幅度前期低于基因免疫组(P<0.05),后者45 d达到峰值1∶5 100。前者抗体滴度第60 d达到峰值1∶6 900,45 d后重组耻垢免疫组抗体滴度高于基因免疫组(P<0.05),且维持时间较基因免疫组更长(P<0.05)。基因免疫组诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数低于重组耻垢免疫组(P<0.05)。后者诱导的特异性CTL杀伤率最高可达到50.2%,而前者最高为31.6%,二者有显著区别(P<0.05)。     

酪氨酸对未成年大鼠卵巢Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶活性的影响

利用PMSG(妊娠母马血清促性腺激素)及HCG(人羢膜促性腺激素)处理的未成年大鼠卵巢匀浆,通过测定Δ~5-3β-羟类固醇脱氢酶(HSD)活性,研究了酪氨酸影响孕酮的代谢机理。结果表明,同一浓度的酪氨酸(60微克/毫升)加到排卵后不同时间(12—72小时)的卵巢匀浆中,Δ~5-3β-HSD活性增加,并随着时间延长有逐渐增加的趋势。酪氨酸组同对照组间差异非常显著(P<0.001),不同浓度的酪氨酸(30—160微克/毫升)加到排卵后同一时间(24小时)的卵巢匀浆,也能提高Δ~5-3β-HSD活性,酪氨酸组与对照组间差异非常显著(P<0.001)。     

鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原的制备及其免疫保护效果的研究

为制备鼠疫耶尔森氏菌F1-V重组融合蛋白抗原,观察其免疫原性和免疫保护效果,通过疏水层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原.用氢氧化铝凝胶吸附制备试验性鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原,皮下接种健康BALB/c小鼠,ELISA检测血清F1-V抗体效价、MTT法测定淋巴细胞增殖能力,进一步用400LD50鼠疫耶尔森氏菌141标准毒株皮下攻毒,观察动物的存活情况.通过三步柱层析纯化获得的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原纯度达到90%以上.氢氧化铝凝胶吸附的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠三次,血清抗F1-V抗体效价为1∶(51200±800),对耶尔森氏菌141强毒株攻击的保护率是90%.上述结果表明,制备的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原具有良好的免疫原性和免疫保护效果,为研制鼠疫F1-V重组融合蛋白疫苗奠定了基础.     

从人体尿液中分离肾源细胞构建拟肾血管单位小鼠皮下嵌合模型及其初步评价

目的 将健康人体尿液中分离培养的肾源细胞与人源间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)以3∶3∶2的比例混合,并移植到NOD-SCID免疫缺陷小鼠皮下而构建人源化嵌合小鼠模型。方法 (1)体外培养MSCs、HUVECs,同时从健康人体尿液中分离培养肾源细胞,并对该细胞进行免疫荧光鉴定。(2)将上述3种细胞以3∶3∶2的比例混合后与Matrigel基质胶一起注射到NOD-SCID小鼠皮下形成人源组织,通过HE染色、免疫组织化学对移植模型进行鉴定。结果 (1)成功地从尿液中分离培养出肾源细胞,并检测鉴定了肾小管上皮细胞和集合管细胞;(2)将3种细胞混合后注射到NOD-SCID免疫缺陷小鼠皮下可初步形成小管结构以及与小鼠血管相连通的人源血管结构。结论 具有肾小管上皮细胞和集合管细胞的肾源细胞与HUVECs和MSCs皮下移植入NOD-SCID免疫缺陷小鼠体内可形成嵌合的人肾血管单位小鼠模型。该模型可为肾病个体化治疗和相关病毒感染研究提供一个人源化动物...     

KA海马注射对大鼠学习和记忆的影响及雷公藤甲素的保护作用

目的:观察海人藻酸(Kainic acid,KA)海马内注射后大鼠学习记忆的变化及雷公藤甲素(TRP)对其的影响.方法:采用Morris水迷宫筛选空间学习记忆能力正常的SD雄性大鼠90只(200-220g).将实验动物分为:右侧海马注射生理盐水后生理盐水灌胃对照组(NS+NS)、右侧海马注射海人藻酸后生理盐水灌胃干预组(KA+NS)、右侧海马注射海人藻酸后雷公藤甲素灌胃干预组(KA+TRP).动物分别存活1天、3天、5天、7天、14天,用Morris水迷宫检测各组动物空间位置记忆能力:尼氏染色法观察海马CA1区神经元数目和形态.结果:与NS组(NS+NS)比较,KA组(KA+NS)大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05).跨越原平台次数减少(P<0.05);CA1区的神经元出现胞体肿胀、排列散乱等形态改变及神经元的丢失(P<0.05);TRP组(TRP+KA)与KA组比较,大鼠的平均逃避潜伏期从第5天起缩短(P＜0.05),跨越原平台次数增多(P<0.05),神经元形态好转,数目增多.结论:KA 海马内注射,可以导致大鼠学习记忆功能障碍及神经元形态的改变;雷公藤甲素干预治疗,能够改善动物的学习和记忆能力,保护海马神经元.     

核糖体菌苗述评

<正> 绪 言 1965年,Youmans和Youmans报导了核糖体和无毒结核杆菌H37Ra菌株的核糖体RNA提取物,如果加入完全Freund佐剂并用以注射小白鼠,可引起对结核杆菌毒株H37Rv攻击的高水平免疫性。根据观察,保护性活性保持于核糖体的RNA提取物中,用核糖核酸酶将其处理后活性丧失50％,但用胰酶处理则否,这种证据提示,其活性组成成份系RNA。当代,虽未能解释何以菌体细胞组分有使宿主抗细菌感染的能力,但RNA引起超免疫应答这种唯一作用的前景,使得其他一些学者去探索各种病原菌的核糖体提取物的保护效力。由一些微生     

登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究

将编码登革病毒2型(DV2)氨基末端80％的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2 AG强启动子下游,构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCXN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律,结果显示三次免疫后2周已有抗体产生,15周时仍维持较高的水平;血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1:640;流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4~+、CD8~+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比,CD4~+淋巴细胞水平略有上升。CD8~+细胞水平有较大升高(p<0.01);动物保护性实验结果显示,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时,其保护率为60％。以上结果表明:pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答,尤其是MHC-I限制性杀伤性CD8~+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此,DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。     

利血平和丘脑下部促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)对大鳞副泥鳅促性腺激素细胞的分泌活动和排卵的促进作用

利血平能使神经分泌细胞的儿茶酚胺贮存量减少甚至消耗殆尽,导致多巴胺作为GRIF的作用减弱,从而显著增强LHRH-A促进GtH分泌和诱导排卵的效应。对大鳞副泥鳅,利血平和LHRH-A同时注射或者利血平比LHRH-A提前3小时注射,都能激活GtH细胞,显著增强其分泌活动并诱导排卵。利血平的最低有效剂量为1—5微克/克体重。利血平(25微克/克体重) LHRH-A(0.05微克/克体重)的催产效果和多巴胺拮抗物pimozide(1微克/克体重) LHRH-A(0.05微克/克体重)的催产效果一样,排卵率都达到了100％。