大鼠脑缺血再灌注后Smac、XIAP和caspase-9表达及活血通络方的干预作用

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后线粒体通路第二种天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶激活物（Smac）、凋亡抑制蛋白（XIAP）和凋亡蛋白酶（caspase）-9的表达变化及活血通络方的干预作用机理。方法：将大鼠随机分成模型组、活血通络组,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注6、12、24和48 h不同时间点进行神经功能评分,用免疫组化法检测Smac、XIAP和caspase-9阳性细胞数。结果：缺血再灌注后6 h模型组神经功能症状积分升高,缺血半暗带皮质内神经元凋亡增多,Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达亦有明显上升,再灌注12 h达高峰（P〈0.05,P〈0.01）,随后出现下降。活血通络方能显著降低神经功能症状积分,减少神经元凋亡,促进XIAP表达,下调Smac和caspase-9表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论：脑缺血再灌注后脑组织Smac、XIAP和caspase-9蛋白的表达均明显增加,提示它们可能在脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,活血通络方可能通过促进XIAP并抑制Smac、caspase-9表达保护神经元及神经功能。     

三氧化二砷对肝癌细胞系SMMC-7721凋亡及 Smac caspase-9、caspase-3 蛋白表达的影响

目的：研究三氧化二砷（As203）对人肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用及对Smac、caspase-9、caspase-3表达的影响。方法：人肝癌细胞SMMC-7721经As20,处理,共分为四组,分别为空白对照组、低剂量组、中等剂量组、高剂量组。分别采用MTT、Hoechst33258染色法、Annexin V-FITC／PI双染法观察其对SMMC．7721细胞增殖的抑制,凋亡细胞核的形态学变化,以及诱导凋亡作用;采用Westemblot法检测凋亡相关蛋白Smac、caspase-9、caspase-3表达的变化。结果：MTT显示：As203在体外能明显抑制SMMC-7721的生长,具有时间剂量依赖关系,与空白对照组相比,其余三组细胞生存率明显下降,差异均有统计学意义（P〈0．05）;Hoechst33258显示细胞呈明显的凋亡细胞形态学特征,具有剂量依赖性;AnnexinV-FITC／PI双染法显示：As203作用24小时可诱导SMMC-7721细胞凋亡,且呈剂量依赖性,与空白对照组相比（2．69±0．58）,其余三组（4．01±0．58）、（5．99±1．69）、（9．26±2．34）差异均有统计学意义（P〈0．05）;Westernblot显示：As2O3作用SMMC-7721细胞24小时,Smac、caspase-9、caspase-3表达上升,呈剂量依赖性,与空白对照组相比,其余三组蛋白表达量明显增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：-定量的As203能抑制SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Smac、caspase-9、caspase-3表达有关。     

腺性膀胱炎及膀胱癌中livin 和caspase-9 的表达

目的:研究在腺行膀胱炎(cystitis glandularis,CG)以及膀胱癌(bladder carcinoma,BC)中livin和caspase-9的表达,探讨腺性膀胱炎与膀胱癌可能存在的关系。方法:收集哈尔滨医科大学附属第三医院2014年1月~2014年10月住院患者60例组织石蜡标本,应用SP(streptavidin-perosidase)法检测livin和caspase-9在腺性膀胱炎组织(30例)、膀胱癌组织(30例)和正常组织(30例)中的表达。结果:正常膀胱、CG和BC组织中livin阳性表达率分别为0/30,9/30(30%)和14/30(46.67%),差异有统计学意义(P0.05);caspase-9在正常膀胱、CG和BC组织中的阳性表达率分别20/30(66.67%),15/30(50%),3/30(10%),差异有统计学意义(P0.05)。结论:腺性膀胱炎可能是正常膀胱组织向膀胱腺癌发展的一个中间阶段,在CG向BC发展过程中livin和caspase-9的异常表达具有普遍性,临床上应积极治疗并密切随访,并可将livin和caspase-9作为诊断早期膀胱癌的检测指标。     

大鼠脑缺血再灌注后Cathepsin D和caspase-9表达的动态变化

目的:探讨大鼠缺血再灌注后溶酶体组织蛋白酶D(Cathepsin D CD)、caspase-9在不同时段蛋白质及mRNA表达变化。方法:将60只S D大鼠随机分为三组:正常组(10只),假手术组(10只),脑缺血再灌注组(40只),线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAO),免疫组化及RT-PCR法分别检测Cathepsin D、caspase-9的蛋白和mRNA表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注损伤后6h Cathepsin D的蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.05),24h达高峰,48h仍保存高水平。caspase-9蛋白和mRNA6h开始明显升高,12h达高峰,此后缓慢下降,但48h组仍显著高于对照组(P<0.05),结论:Cathepsin D、caspase-9在大鼠脑缺血再灌注后表达增强,溶酶体可能参与了脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的过程。     

凋亡抑制蛋白XIAP 在急性髓系白血病和淋巴瘤骨髓组织中 的表达及意义

目的:研究凋亡抑制蛋白(XIAP)在白血病及淋巴瘤骨髓活检组织中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学法检测10例急性髓系白血病,13例淋巴瘤,9例非恶性血液病患者骨髓活检组织中XIAP的表达水平。结果:XIAP蛋白在急性髓系白血病、淋巴瘤骨髓活检组织中的阳性表达积分均高于非恶性血液病,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:XIAP的表达水平与白血病及淋巴瘤的发生发展有一定关联,可能与其抑制肿瘤细胞的凋亡有关。     

紫草素促进caspase-9活化诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨紫草素对大肠癌（CRC）细胞LoVo的抗肿瘤作用及其机制。 方法以不同紫草素浓度梯度（0、2、4、6 μmol/L）处理CRC细胞LoVo 24 h，以4 μmol/L紫草素处理不同时间梯度（0、12、24、48 h）的CRC细胞LoVo。流式细胞技术结合Annexin V-FITC/PI双染色测定细胞凋亡率，Western blot检测细胞中caspase-9蛋白的表达及切割情况。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L处理CRC细胞LoVo 24 h比较，2、4、6 μmol/L的细胞凋亡率[（6.94±1.02）﹪比（10.61±1.12）﹪、（15.55± 1.35）﹪、（36.51±1.46）﹪]均升高；与4 μmol/L紫草素处理0 h的CRC细胞LoVo比较，12、24、48 h的细胞凋亡率[（1.33±0.59）﹪比（19.23±1.24）﹪、（22.24±1.41）﹪、（28.41±1.52）﹪]均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。当紫草素剂量≥2 μmol/L，处理时间≥12 h时，caspase-9蛋白表达上调并被诱导活化，而caspase-9抑制剂（Z-LEHD-FMK）预处理后，LoVo细胞凋亡率下降38.7﹪，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论紫草素可以通过caspase-9蛋白的表达及其切割活性诱导CRC细胞凋亡。     

C-erBb-2、MMP-9 在结直肠癌中的表达及相关意义

目的:探讨C-erBb-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在结直肠癌中的表达与其浸润转移的关系,寻找浸润转移的客观指标及可能相关机制。方法:用免疫组化法测定80例结直肠癌组织中C-erBb-2和MMP-9的表达情况。结果:①C-erBb-2、MMP-9在结直肠癌组织中阳性表达率60.0%,(48/80)和56.2%(45/80)。②在有淋巴结转移的结直肠癌组织中C-erBb-2、MMP-9阳性率分别为75.0%(30/40)、72.5%(29/40),高于无淋巴结转移的结直肠癌组织中的C-erBb-2、MMP-9阳性率45%(18/30)、40.0%(16/40),(P<0.05);③二者共同阳性者淋巴结转移率为78.1%(25/32)高于二者均阴性者淋巴结转移率26.3%(5/19),(P<0.05),④C-erBb-2、MMP-9联合表达存在意义,且为正相关(r=0.257,P<0.05)。⑤C-erBb-2、MMP-9的表达与肿瘤的大小、性别、年龄、浸润层次等因素无关,但与肿瘤分期、淋巴结转移、分化有关。结论:C-erBb-2、MMP-9表达与淋巴结转移密切相关,二者在有淋巴结转移的结直肠癌组织中表达可能存在协同作用,可作为临床检测淋巴结转移的重要指标之一。     

CD133和maspin在肝癌中的表达及其临床病理意义

目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133和maspin在肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma HCC）中的表达情况及其临床病理意义.方法 采用免疫组织化学ElivisionTM plus法检测100例HCC组织和20例癌旁肝组织中CD133和maspin蛋白的表达情况.结果 在癌旁肝组织中CD133和maspin蛋白的阳性表达率分别为5.0%和100%,而在HCC组中其阳性表达率分别为51.0%和48.0%,两组之间差异有显著性（P〈0.01）.CD133蛋白的表达水平与肿瘤的Edmondson分级、淋巴结转移、肿瘤的数目和有无血管侵犯有关（全部P〈0.05）;maspin蛋白的表达水平与肿瘤的Edmondson分级、肿瘤的数目和有无血管侵犯有关（全部P〈0.05）.且CD133蛋白的表达与maspin蛋白的表达呈负相关（P〈0.01）.结论 CD133和maspin蛋白的表达与HCC组织的Edmondson分级、肿瘤数目和血管侵犯有关;CD133和maspin的联合检测对HCC的进展及预后判断有重要意义.     

凋亡抑制蛋白XIAP在舌鳞癌组织中表达的研究

目的：研究XIAP在舌鳞癌组织中的表达情况及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学SP法检测舌鳞癌组织（36例）以及癌旁正常舌粘膜组织（20例）中XIAP蛋白的表达,并分析其与舌鳞癌临床病理特征的关系。结果：XIAP在舌鳞癌组织中表达阳性率为86．1％,在癌旁正常粘膜组织中阳性率为35％,肿瘤组织中XIAP蛋白阳性率明显高于正常粘膜;不同病理分级及临床分期病例XIAP阳性表达差异无显著性。结论：XIAP蛋白的高表达与舌鳞癌的发生有相关性,可能在舌鳞癌的发生、发展过程中有重要作用。     

HIF-lα的表达在肝移植后肝癌复发与转移中的意义

目的：探讨肝癌组织中低氧诱导因子-lα（HIF-lα）表达与肝癌行肝移植治疗后肿瘤复发与转移之间的关系。方法：选择肝癌行全肝移植患者45例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织、癌旁组织中HIF-lα的表达,分析其表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义。结果：肝癌组织中HIF-1α阳性表达率明显高于癌旁组织（X2=6.39,P〈0.01）。HIF-1α在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓及肿瘤播散灶密切相关（P〈0.01）。复发转移组和未复发转移组HIF-1α阳性表达率比较,差异存在显著性（X2=8.46,P〈0.01）。Cox回归多因素分析表明HIF-1α高表达是影响肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预后因素（P〈0.01）。结论：HIF-1α蛋白有望成为一个预测肝癌患者肝移植后复发和转移的重要指标。     

原发性肝细胞癌组织中Beclin 1的表达及其意义

目的：探讨原发性肝细胞癌（HCC）组织中Beclin 1的表达及其在肝细胞癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化EnVision法检测54例肝细胞癌组织及其癌旁组织中Beclin 1的表达,分析其与肝细胞癌的病理分级、临床分期、侵袭及转移等临床病理因素的关系。结果：HCC组织中Beclin 1阳性表达率明显低于癌旁组织（X2=7.53,P〈0.01）。病理分级Ⅲ～Ⅳ、TNM分期Ⅲ～Ⅳ、存在静脉浸润和淋巴结转移的肝癌组织中的Beclin 1表达水平明显低于病理分级Ⅰ～Ⅱ、TNM分期Ⅰ～Ⅱ、无静脉浸润和淋巴结转移的肝癌组织（P〈0.01）。结论：HCC组织中存在Beclin 1表达缺失,可能与HCC的发生有着密切的关系,且对HCC的恶性生物学行为有重要影响。     

T细胞分化蛋白2在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的:观察T细胞分化蛋白2(Mal2)在肝细胞癌(HCC)中的表达并探讨其临床意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测226例HCC患者的肿瘤组织和86例正常肝组织中Mal2蛋白的表达情况,并分析其与HCC临床病理指标的关系。通过生存分析比较不同Mal2表达水平患者的生存情况,并分析影响HCC患者生存情况的危险因素。结果:Mal2蛋白在HCC肿瘤组织中的表达水平显著高于正常肝组织(P0.05)。Mal2蛋白表达水平增高与HCC患者血管侵犯、淋巴结转移和较高的TNM分期相关。生存分析表明Mal2蛋白高表达组患者术后生存率显著低于低表达组患者(P0.05)。Mal2阳性表达、血管癌栓形成、淋巴结转移及较高的TNM分期是影响HCC患者术后生存时间的独立危险因素。结论:Mal2蛋白在HCC组织中呈过表达趋势,且与肿瘤转移密切相关,可能在HCC的诊断与预后判断中有一定的应用价值。     

SSBP1在乙肝相关性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究SSBP1在乙肝相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征的关系,为肝癌的诊断和预后判断提供参考依据。方法:收集血清乙肝病毒表面抗原(HBVs Ag)阳性的HCC患者组织标本216例,采用免疫组化和Western blot检测癌及癌旁组织中SSBP1的表达水平,并进行统计分析。结果:SSBP1蛋白在癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.05)。SSBP1表达水平与肿瘤数量、肿瘤大小、门静脉癌栓和肿瘤分级具有显著的相关性(P0.05)。SSBP1低表达患者术后总生存期及无复发生存期明显优于SSBP1高表达的患者(P0.05)。结论:SSBP1在HCC的发生发展过程中发挥重要作用,特对患者的预后判断具有一定的参考价值。     

STAT3, beta-catenin 在原发性肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系

目的：探讨信号转导子和转录激活子3（STAT3）及beta- 连环素蛋白（beta-catenin）在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其与临床 病理特征的关系。方法：使用免疫组化SP两步法检测120例HCC、30 例癌旁肝组织、30例肝硬化组织及30 例肝血管瘤标本中正 常肝组织的STAT3 蛋白及beta-catenin的表达,分析STAT3 蛋白和beta-catenin 表达与HCC 临床病理特征的关系,并采用Spearman 等级相关分析法探讨HCC 组织中STAT3 蛋白与beta-catenin 的相关性。结果：STAT3 蛋白在HCC、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝 组织中的阳性率分别为64.17%、13.33%、43.33％及0.00%,阳性表达主要位于细胞质,茁-catenin 在HCC、癌旁组织、肝硬化组织、 正常肝组织中的阳性率分别为62.50%、16.67%、33.33%及0.00%,阳性表达亦主要位于细胞质。STAT3 及beta-catenin 在上述各类组 织中阳性率,差异均具有显著性（P<0.05）。HCC中STAT3蛋白阳性率在不同年龄、肿瘤大小、甲胎蛋白（AFP）、病理分化程度及门 脉癌栓组间差异有统计学意义（P<0.05）。HCC 中STAT3 与beta-catenin 表达呈显著正相关（P<0.05）。结论：STAT3 及beta-catenin 在 HCC 的发生、发展中起着重要作用,且二者表达强度呈显著正相关。     

Caspase-8及Caspase-9在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的:观察凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)在肝细胞癌中的表达及临床病理意义。方法:选择我院自2012年7月~2013年4月的53例肝细胞肝癌患者作为观察组,选择同一时期在医院体检的50例正常肝组织患者作为对照组,采用原位分子杂交方法对两组患者的Caspase-8和Caspase-9mRNA进行检测。结果:观察组与对照组中caspase-8、caspase-9的阳性表达率分别为84.91%(45/53)、88.68%(47/53)和60.00%(30/50)、82.00%(41/50),观察组与对照组比较均有升高趋势,比值有显著性差异(P0.05)。结论:肝癌细胞中caspase-8、caspase-9的较高表达显示在肝癌的发生发展过程中起到重要作用,在肝癌组织细胞增殖凋亡中具有一定作用,肝癌中caspase-8和caspase-9蛋白的表达均对于判断肝癌预后具有一定的临床价值。     

NET-1蛋白表达水平在肝细胞癌患者预后中的意义

目的:探讨神经上皮转换蛋白1(NET-1)表达水平在肝细胞癌(HCC)患者预后中的意义。方法:采用免疫组织化学染色检测368对HCC和正常肝组织(NLT)样本中NET-1的表达水平。进行Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析,评估HCC的预后。结果:在368例HCC组织中NET-1表达的阳性率为86.7%(319/368),与Edmondson-Steiner分期(P=0.02)以及TNM阶段(P=0.01)呈正相关。NET-1表达水平与肝内转移(P=0.008)和门静脉侵润(P=0.007)呈正相关。高表达NET-1的HCC病人比具有低表达NET-1或表达缺失NET-1(分别为P=0.001和P=0.002)的病人具有更短的无病存活期或者总存活期。多元Cox回归分析表明NET-1蛋白表达(相对危险性[RR],5.8;P=0.01)对HCC病人是一个独立的预后预测因素。结论:NET-1的表达情况可能成为HCC病人存活期的一个新预测因素。为研究针对NET-1靶点的新的治疗方法提供了理论基础。     

Smo 蛋白在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义

目的:研究Smoothened(SMO)在肝癌和肝硬化中的表达及临床意义。方法:选取组织标本后,运用石蜡包埋,切片后,HE染色,构建组织芯片,免疫组织化学和原位杂交方法检测Smo蛋白在肝癌和肝硬化中的表达。结果:Smo蛋白在肝癌细胞浆、良性肝肿瘤组织细胞浆、肝硬化组织中强染色,在正常组织中无染色。并且在典型肝硬化中强染色,在中度肝硬化中弱阳性。结论:Smo蛋白表达与肝癌的发生有关,Smo基因的高表达可能激活某种机制而参与诱导肝癌的发生。可能是通过异常激活Sonic hedgchog信号通路,从而诱导肝癌的发生与发展。