丙烯酸酯-PEG400 复合薄膜对胰岛素的体外控释研究

目的：在胰岛素非注射给药研究中,经皮给药系统凭借其独特的优势,已成为近年来医药领域的研发重点。控释膜的研究是 经皮给药系统中一个重要组成部分,然而涉及胰岛素通过控释膜释放的研究报道不多。本实验室通过紫外光催化技术合成出一 种丙烯酸酯-PEG复合薄膜作为胰岛素控释膜。本实验目的在于考察该复合薄膜在24 小时内对胰岛素的体外控释作用,从而为 胰岛素经皮给药制剂的基础研究作出贡献。方法：通过紫外光固化方法合成丙烯酸酯-PEG400 复合薄膜,通过HPLC的方法考察 丙烯酸酯-PEG400 复合薄膜对不同浓度胰岛素溶液的控释作用,通过比较薄膜对不同浓度胰岛素溶液的累积渗透量及渗透速率 等参数,研究薄膜对胰岛素的控释规律。结果：实验数据显示：丙烯酸酯-PEG 复合薄膜对3.0 mg/mL,6.0 mg/mL,9.0 mg/mL 这三 种不同浓度胰岛素控释曲线的相关因子分别为：0.9921,0.9950,0.9964。相关因子均大于0.99,表明该薄膜能很好的控制胰岛素溶 液实现线性释放。经计算,薄膜对3.0 mg/mL,6.0 mg/mL,9.0 mg/mL 这三种浓度胰岛素的累积渗透量分别为：266.69 ug/cm2,343.65 ug/cm2,460.10 ug/cm2。渗透速率分别为：9.24 ug·cm-2·h-1,13.40 ug·cm-2·h-1,19.04 ug·cm-2·h-1。以上两组数据表明, 薄膜对胰岛素的累积渗透量及渗透速率随胰岛素浓度的增加而增大。结论：通过实验结果我们可以看出,丙烯酸酯-PEG复合薄 膜能控制不同浓度的胰岛素溶液以恒定速率释放,通过对比薄膜对各浓度胰岛素的累积渗透量及渗透速率等参数,发现该薄膜 对胰岛素的释放速率受胰岛素浓度调节,具体表现为随胰岛素浓度的增加而增加。因此该薄膜不仅可以稳定控制胰岛素实现零 级释放,而且可以通过调节胰岛素浓度实现调节胰岛素释放速率的目的。由此可以看出,该薄膜是一种理想的胰岛素控释膜。同 时本实验作为胰岛素控释膜的基础研究,也为日后以该薄膜为控释膜的胰岛素经皮给药制剂的研发打下了坚实的基础。     

枳实提取物及其药效组分对OX—LDL损伤的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达和NO释放的影响

目的：研究枳实提取物及其药效组分橙皮苷和新橙皮苷对氧化低密度脂蛋白（oxidized lowd ensity lipoprotein,Ox—LDL）损伤的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells line,HUVEC）细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达和一氧化氮（nitric oxide,NO）释放的影响。方法：体外培养HUVEC,50μg／mLOX—LDL制造HUVEC损伤模型。以MTS染色法检测细胞毒性确定用药浓度。细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1的含量,试剂盒测定细胞培养上清液中NO含量。结果：①枳实提取物小于等于2mg／mL时,橙皮苷浓度小于等于0．03125mg／mL时,新橙皮苷浓度小于等于0．25mg／mL时,HUVEC存活率分别大于80％。②2．0mg／mL和1．0mg／mL两个浓度的枳实提取物、15．625μg／mL的橙皮苷和0．2500mg／mL新橙皮苷对OX—LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达有显著抑制作用。③2．0mg／mL枳实提取物显著提高OX—LDL诱导的HUVEC和正常HUVEC培养液中的NO含量;7．813ixg／mL、15．625μg／mL和31．250μg／mL 3个浓度的橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量,31．250μg／mL的橙皮苷能促进正常HUVEC的NO释放;0．2500mg／mL和0．1250mg／mL 2个浓度的新橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量。结论：枳实提取物及其药效组分橙皮苷、新橙皮苷能抑制Ox-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达,促进Ox-LDL诱导的HUVEC的NO释放。     

矿质营养与其他生长物质对荷叶离褶伞菌丝生长的影响

1mg／mL KCl促进荷叶离褶伞菌丝生长;5或10mg／mL NaCl、5或10mg／mL MgSO4、5或10mg／mLKCl、10mg／mL H2PO4和1mg／mL CaSO4抑制菌丝生长;0．8mg／mL的MnSO4和CuSO4以及0．5mg／mL FeSO4、0．2或0．5mg／mL CoCl2和0．2、0．5或0．8mg／mL ZnSO4促进菌丝生长;0．5或0．2mg／mL CuSO4、0．2或0．5mg／mL MnSO4及0．8或0．2mg／mL FeSO4对菌丝生长的影响不显著;维生素B6、维生素C、维生素PP和维生素B1可促进菌丝生长,在含有10μg/L维生素B6的培养基上菌丝生长速度最快,但维生素C试用浓度较低（50μg／L）时对菌丝生长的影响不显著;吲哚丁酸、吲哚乙酸、奈乙酸对菌丝生长具有促进作用,但0．1、0．5或1．0μg／L赤霉素对菌丝生长的影响不显著。     

多孔板-MTT比色法测定植物抗菌成分对细菌的抑制活性

多孔板-MTT比色法测定植物抗菌成分对细菌抑制活性的步骤为：每孔加入浓度为10^6cfu／mL的供试菌液90灿,然后加入不同浓度的药液10μL,28℃暗培养24h后,每孔中加入5mg／mL的MTT溶液10μL,继续培养4h后加入10％二甲基亚砜100μL,振荡30min,在570nm处测定溶液的吸光值。采用以上方法,测定植物抗菌成分蓝桉醇对辣椒斑点病黄单胞菌（Xanthomonas vesicatoria）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的半抑制浓度（IC50）分别为0．158和0．395mg／mL,小檗碱对溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus）的IC50为0．587mg／mL。结果表明,多孔板-MTT比色法能快速、微量地测定植物成分对细菌的抑制活性。     

妊娠后期湖羊胎儿营养代谢的特点及其与内分泌活动的关系

选用10只人工授精、体重35～45kg的健康湖羊,在妊娠119天以无菌手术装置胎儿后肢胫前动脉瘘管和母体颈静脉瘘管,经瘘管连续采集血样,研究湖羊胎儿营养代谢的特点及其与内分泌活动的关系。结果表明,妊娠后期湖羊胎儿血浆营养代谢成分的浓度为：葡萄糖7.84±1．61mg／dL,果糖170．51±11．60mg／dL,乳酸37．52±5.51mmol／L,游离脂肪酸101．83±12．20μEq／L,总蛋白2．93±0．22g／dL,α-氨基氮4．48±0．42mmol／L,尿素氮21.57±5．19mg／DL。胎儿血浆葡萄糖、游离脂肪酸、总蛋白和尿素氮显著低于母体（P＜0.001）,乳酸和α-氨基氮显著高于母体（P＜0．001）,果糖是胎儿体内特有的营养成分。胎儿血浆营养代谢成分相对恒定,母体的波动性较大。妊娠后期湖羊胎儿血浆代谢激素的水平为：胰岛素115．77±7．22μU／mL,甲状腺素99．24±16．22ng／mL,三碘甲腺原氨酸0．312±0．116ng／mL,胰高血糖素40．54±8．08pg／mL,皮质醇0．85±0．64μg／mL。胎儿的胰岛素和甲状腺素水平较高,显著高于母体（P＜0．001）,三碘甲腺原氨酸、胰高血糖素和皮质醇水平较低,显著低于母体（P＜0．001）。胎儿血浆胰岛素、胰高血糖素、甲状腺素和三碘甲腺原氨酸波动性较大,皮质醇水平在妊娠125天之前很低（     

Marc-145细胞无血清培养液组分的优化筛选

目的：对Marc-145细胞无血清培养液组分及浓度进行优化筛选。方法：采用Plackett-Burman设计和中心组合旋转设计对不同的营养成分进行优化筛选。结果：经Plackett-Burman设计,利用20组实验对14种不同营养成分进行考察,发现孕酮、抗氧化试剂、乙醇胺、维生素B12、维生素B12和脂肪酸复合剂对Marc-145细胞无血清悬浮生长的比生长速率有显著影响;针对该6种因素进行中心组合旋转实验设计,利用53组实验筛选出它们的最优使用浓度分别为孕酮5．5mg／L、抗氧化试剂250μL/L、乙醇胺2．1mL／L、维生素B12 2．86mg／L、维生素B6 44μg/L和脂肪酸复合剂215μL/L。结论：经2种实验设计方法优化,确定了Marc-145细胞无血清培养液组分及最适浓度,为无血清悬浮培养Marc-145细胞及增殖猪繁殖及呼吸综合征病毒提供了实验基础。     

特康唑对常见念珠菌的体外敏感性试验

目的：研究特康唑对重度念珠菌性阴道炎常见念珠菌的体外敏感性。方法菌株分离自上海交通大学医学院附属仁济医院、上海市第六人民医院、上海市第一妇婴保健院妇科门诊外阴阴道念珠菌病（ VVC）患者的阴道分泌物。所有菌株均经念珠菌显色培养基（ CHROMagar Candida）、API 20C AUX鉴定,并采用CLSIM27?A3肉汤微量稀释法对213株临床分离念珠菌作了特康唑、克霉唑、咪康唑3种抗真菌药物敏感性测定。结果213株菌株经鉴定为白念珠菌192株（90．14％）,光滑念珠菌21株（9．86％）。特康唑对192株白念珠菌的MIC范围：0．024～12．5μg／mL,MIC50：0．39μg／mL,MIC90：1．56μg／mL,GM：0．248μg／mL;特康唑对19株光滑念珠菌的MIC范围：0．024～1．56μg／mL,MIC50：0．049μg／mL,MIC90：1．56μg／mL,GM：0．107μg／mL。结论目前阴道念珠菌病的病原菌仍以白念珠菌为主,并提示特康唑与克霉唑、咪康唑3种药物对213株念珠菌均具有良好的敏感性,特康唑对白念珠菌及光滑念珠菌有较强的抑制作用并未发现有耐药现象。     

Ⅰ型胶原蛋白在云母表面自组装的AFM研究

目的：利用原子力显微镜(AFM)观察不同浓度、pH值的I型胶原溶液在云母表面的自组装情况,从而研究样品浓度和酸度对胶原蛋白自组装的影响。方法：配制0．8μg/ml、8μg/ml、0．5mg/ml、1．0mg/ml、4mg/ml的胶原醋酸溶液(pH值2．7—3.0)和0.2mg/ml、0．5mg/ml、1．0mg/ml的胶原PBS溶液(pH值7．2—7．4)。取5μl的胶原蛋白溶液,滴于新剥离的云母表面,空气中在25℃室温下自然干燥后用AFM观察。结果：酸性条件下,低浓度时胶原蛋白在云母表面只是简单的吸附,随着浓度的增加,胶原分子在云母表面开始组装形成网状的结构,当浓度达到饱和浓度时,胶原形成无规线团结构。在中性条件下,胶原更容易行成纤维,随着浓度的增加,纤维的直径和长度都随着增加。结论：胶原蛋白分子有在固体表面进行自组装的特性,自组装的结果与样品的浓度、样品溶液的pH值有着很大的关系。     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种碱性蛋白的纯化及其活性

用离子交换层析(CM-sepharose FF)和凝胶层析(Superdex^TM 75)方法,从新鲜食用菌毛头鬼伞(Coprinus omatus)子实体中分离纯化出一碱性蛋白y3,经SDS-PAGE初步确定其分子量约为14．4kD。活性检测结果显示：当其浓度为12．5μg／mL时,对烟草花叶病毒(TMV)在心叶烟枯斑寄主上的侵染抑制率达83．0%;y3对兔血凝集活性滴度为2^5,对人血凝集活性滴度为26,其浓度分别为1．562μg／mL和0．78lμg／mL;利用胃癌细胞株MGC-803检测y3体外抗肿瘤活性,其IC50为12μg／mL。y3 N-端序列为NRDVAACARFIDDFCDTLTP,为一新的蛋白序列。在SWISS-PORT上登录号为P83477。     

球形孢子丝菌致婴儿固定型孢子丝菌病1例及相关实验研究

报道1例由球形孢子丝菌所致的婴儿固定型孢子丝菌病。患儿女,3个月,因左眼下内侧皮损2个月就诊,皮损脓液标本进行真菌培养,对培养获得菌株进行形态学、生理学和分子生物学鉴定,并进行药物敏感性检测。真菌培养阳性,镜下可见典型的套袖样菌丝。钙调蛋白基因序列分析鉴定为球形孢子丝菌。药敏试验显示特比萘芬和伊曲康唑对该菌株的菌丝相最低抑菌浓度（minimal inhibitorycon centration,MIC）分别为0．5μg／mL和0．5μg／mL;对该菌株的酵母相的MIC值分别为0．25μg／mL和0．5μg／mL。给予患者口服特比萘芬32．5mg／d治疗10周后皮损消退呈瘢痕化修复。依据临床及实验室检查确诊该病例为球形孢子丝菌所致固定型孢子丝菌病,特比萘芬治疗本病例显示较好疗效。     

婴幼儿机械通气时使用右旋美托咪定和咪达唑仑的效果评价

目的:比较婴幼儿在机械通气镇静时使用右旋美托咪定和咪达唑仑效果。方法:收集我院2009年2月至2011年10月入住ICU需要机械通气且镇静时间大于24h的患儿60例,随机分为3组,每组20例,右旋美托咪啶1组(输注剂量为0.25μg.kg-1.h-1,D1组)、2组(输注剂量为0.5μg.kg-1.h-1,D2组)维持镇静,咪达唑仑组(输注剂量为0.05 mg.kg-1.h-1,M组)维持镇静。同时根据病情需要间断给予吗啡镇痛。镇静的疗效评估采用Ramsay镇静评分以及脑电双屏指数(BIS)评价。结果:60例患儿分为3组,每组20例,咪达唑仑组(M组)的输注持续时间(h)为22±8 h,0.25μg(D1组)和0.5μg(D2组)右旋美托咪啶组输注持续时间分别为21±10 h和22±9 h;M组的平均输注速率为0.22±0.05 mg.kg-1.h-1,D1组和D2组平均输注速率分别为0.28±0.07μg.kg-1.h-1和0.21±0.05μg.kg-1.h-1;三组差异无统计学意义。其中M组、D1组、D2组使用吗啡的剂量是分别为36 mg.kg-1.24h-1、29 mg.kg-1.24h-1和20mg.kg-.124h-1。D1组与M组使用吗啡的剂量差异无统计学意义。D2组与M组使用吗啡的剂量差异有统计学意义(P<0.05)。三组患儿BIS值和Ramsay评分监测差异无统计学意义。结论:右旋美托咪啶应用于婴幼儿是安全有效的,0.5μg.kg-1.h-1右旋美托咪啶组镇静更加有效,24小时吗啡的使用剂量显著减少。     

光敏剂HMME对人骨肉瘤细胞U-2OS的光动力作用及其作用机制的初步研究

目的：探讨光敏剂（HMME）介导的光动力疗法对人骨肉瘤细胞U-2OS的杀伤效应及机制研究。方法：使用不同浓度（0、10、20、30、40μg.ml-1）的光敏剂,采用不同光照能量（0、3、6、9 J.cm-2）照射人骨肉瘤细胞,与空白对照组、药物对照组（无光照但加光敏剂）和光照对照组（不加光敏剂但加光照）进行比较,MTT法检测细胞的存活率,选择半数有效量药物浓度和光照能量,作为实验组。以空白对照组为对照,采用Hoechst33342染色法,观察细胞凋亡情况。用western blot方法检测细胞凋亡蛋白caspase-7、caspase-9和PARP-1。结果：MTT结果显示,空白对照组、药物对照组和光照对照组对细胞存活率在96.7%和100%之间,药物的半数有效量为40.1μg.ml-（16 J.cm-2）和25.0μg.ml-（19 J.cm-2）。Hoechst33342染色法观察到实验组细胞明显凋亡。westen blotting检测结果,实验组与对照组相比,caspase-7、caspase-9和PARP-1表达明显增高。结论：HMME-PDT对人骨肉瘤细胞U-2OS有显著的杀伤效应,且呈光敏剂浓度和光照强度依赖性,其杀伤效应与caspase途径相关。     

L-抗坏血酸洛芬酯非水相酶促合成的动力学与热力学

对酶法合成L-抗坏血酸洛芬酯(芬维C酯)的反应动力学与热力学进行研究,确定了最有效的酶促反应环境。合成布洛芬维C酯的最优条件:转速200r/min,温度65℃,加酶量5%(以底物的质量分数计),底物浓度1mol/L,平衡所需时间66h,平衡时产物质量分数为19.07%;合成酮洛芬维C酯的最优条件:200r/min,60℃,加酶量7.5%,底物浓度600mmol/L,平衡时间132h,产物质量分数为10.63%;合成氟比洛芬维C酯的最优条件:200r/min,65℃,加酶量5%,底物浓度400mmol/L,平衡时间144h,产物质量分数为6.76%。对底物进行了比较,得到了各自的动力学与热力学参数。布洛芬米氏常数为0.101μmol/L,vmax=32.68μmol/(min.g),热力学平衡常数为0.166;酮洛芬的分别为0.144μmol/L,12.97μmol/(min.g),0.091;氟比洛芬的分别为0.185μmol/L,9.35μmol/(min.g),0.055。     

HPLC法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法：色谱柱为DiamonsilTM C18（250×4.6 mm,5滋m）,流动相为甲醇-0.05mol.L-1磷酸溶液（93∶7）为流动相,检测波长210 nm,进样量10滋L。结果：熊果酸在21.28滋g.mL-1～212.8滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997）,平均回收率为97.79%（RSD=1.30%）;齐墩果酸在24.02滋g.mL-1～240.2滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,平均回收率为98.36%（RSD=1.11%）。结论：该方法简便、灵敏、准确,可用于鸡矢藤药材的质量评价。     

高效液相色谱法同时检测棉花根中的多种植物激素

目的：探寻高效液相色谱同时检测棉花根中多种植物激素含量的方法。方法：采用WatersC18反相色谱柱（4.6×250mm,5μm）,在柱温为35℃、流速为1mL.min-1的条件下,以乙腈和三乙胺溶液为流动相梯度洗脱,在每种物质的保留时间附近切换至最大吸收峰（GA3除外）波长作为检测波长,并与254nm同一波长检测多种植物激素含量的方法进行比较,分离和检测棉花根中的玉米素（Z）、玉米素核苷（ZR）、赤霉酸（GA3）、生长素（IAA）和脱落酸（ABA）的含量。结果：切换波长法检测5种植物激素的灵敏度和回收率均较高,检出限均较低。回收率为：Z 96.82%、ZR 94.14%、GA3 92.75%、IAA 93.38%、ABA 95.57%;检出限为：Z 0.1μg.mL-1、ZR 0.1μg.mL-1、GA3 0.5μg.mL-1、IAA 0.3μg.mL-1;ABA 0.05μg.mL-1,能准确检测出棉花根中Z、ZR、GA3、IAA和ABA的含量。结论：采用Waters C18反相色谱柱（4.6×250mm,5μm）,在柱温为35℃、流速为1mL.min-1的条件下,以乙腈和三乙胺溶液为流动相梯度洗脱,结合切换波长法能同时检测出植物组织中多种植物激素含量。     

Preparation and <Emphasis Type="Italic">In Vitro</Emphasis> Evaluation of a New Fentanyl Patch Based on Functional and Non-functional Pressure Sensitive Adhesives

In this study, some single-layer and double-layer transdermal drug delivery systems (TDDSs) with different functional and non-functional acrylic pressure-sensitive adhesives (PSAs) were prepared. For this purpose, fentanyl as a drug was used. The effects of PSAs type, single-layer and double-layer TDDSs on skin permeation and in vitro drug release from devices were evaluated using a hydrodynamically well-characterized Chien permeation system fitted with excised rat abdominal skin. The adhesion properties of devices such as peel strength and tack values were obtained as well. It was found that TDDS with –COOH functional PSA showed the lowest steady-state flux. Double-layer TDDS displayed a constant flux up to 72 h. In double- and single-layer devices after 1 and 3 h, respectively, drug release followed Higuchi’s kinetic model. Formulations with the highest percentage of –COOH functional PSA have displayed the lowest flux. The double-layer TDDSs with non-functional PSA demonstrated the suitable skin permeation rate close to Duragesic® TDDS and suitable adhesion properties.     

康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过康莱特联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:体外培养宫颈癌Siha细胞,分别将康莱特(浓度为1,2,4,6,8 mg/mL),顺铂(浓度梯度为1.5,3,6,9,12μg/mL),单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h用噻唑蓝(MTT法)检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测康莱特组和顺铂组细胞24h凋亡率,选取合适的药物浓度(康莱特6 mg/mL,顺铂3μg/mL),进行联合用药,加药24h、48h用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果:①MTT法显示加药后两组的24h、48h,宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组(P0.05),并且在一定程度上呈浓度和时间依赖性。②联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药(P0.01)。结论:康莱特、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且康莱特联合顺铂的作用要显著高于单独用药,康莱特与化疗药物联合使用可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

Functionalization of PVDF membranes with carbohydrate derivates for the controlled delivery of chlorhexidin

Maltodextrin (MX) was fixed onto PVDF membranes in order to create a drug delivery Guided Tissue Regeneration (GTR) device with controlled drug delivery properties. PVDF microporous membranes were treated by a mixture of MX and citric acid, resulting to an 18 wt% increase of the supports. MX grafted membrane could capture 103 mg/g chlorhexidin digluconate (DigCHX) instead of 1mg/g for a virgin membrane. A neutralization step was performed before the biological tests. Viability tests confirmed the non-toxicity of the MX polymer coating after neutralisation. In vitro release test in human plasma, and microbiological tests showed that membranes grafted with MX were more performing compared to virgin and beta-CD grafted membranes. The antimicrobial activity was effective during more than 72 h.