HSP70、eIF4E、DNMT1在宫颈癌中的表达及意义

摘要 目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）、真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）、DNA甲基转移酶1（DNMT1）在宫颈癌中的表达及意义。方法：选择2015年2月至2017年2月我院接诊的40例女性宫颈癌患者为本研究对象,收集所有患者手术切除病理组织制作石蜡切片,并选择我院同期接受其他手术的35例标本作为对照组,使用SP免疫组织化学法观察乳腺癌组织中HSP70、eIF4E、DNMT1染色结果,并分析其和临床病理因素之间的关系。结果：在免疫组化学法结果中显示,40例宫颈癌组织中,HSP70阳性表达率为65.00%（26/40）,eIF4E阳性表达率为67.50%（27/40）,DNMT1阳性表达率为72.50%（29/40）,均显著高于对照组（P＜0.05）;在宫颈癌组织中,HSP70、eIF4E、DNMT1和分化程度、临床分期及淋巴转移均有密切关系,（P＜0.05）;将分化程度、临床分期、淋巴转移、HSP70、eIF4E、DNMT1进行相关分析,结果显示,HSP70、eIF4E、DNMT1和分化程度、临床分期及淋巴转移之间均呈正相关（P＜0.05）,且HSP70和eIF4E、DNMT1均呈正相关（P＜0.05）,eIF4E和DNMT1呈正相关（P＜0.05）。结论：在宫颈癌组织中HSP70、eIF4E、DNMT1的高表达和临床病理之间存在着密切关系。     

Twist1调控FoxM1 在上皮性卵巢癌中的表达

目的:探讨Twist1调控转录因子Fox M1在上皮性卵巢癌中的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测Fox M1、Twist1在上皮性卵巢癌组织中表达情况,斯皮尔曼秩相关分析其在上皮性卵巢癌组织中的表达相关性;双荧光素酶报告系统检测Twist1对Fox M1的调控作用;Real-time quantitative RT-PCR和蛋白免疫印迹技术验证Twist1对Fox M1的调控作用。结果:Twist1、Fox M1在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率分别是71.4%(40/56)、78.6%(44/56),明显高于正常卵巢组织,差异有统计学意义(P<0.05);且其在上皮性卵巢癌中的表达显著相关(r=0.896,P<0.01);Twist1可以结合并激活Fox M1启动子(P<0.05);上调Twist1表达可以激活Fox M1在卵巢癌细胞中的表达(P<0.05),而干扰Twist1后可以下调Fox M1的表达(P<0.05)。结论:Twist1参与调控增殖相关转录因子Fox M1在卵巢癌中的表达,可能是一个潜在的治疗靶点。     

Runx3蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的:探讨Runx3蛋白在卵巢癌的发生发展、浸润转移和化疗耐药中的作用,为以Runx3作为分子治疗靶点的抗肿瘤基因治疗提供理论依据。方法:运用组织芯片技术联合免疫组化法检测27例卵巢癌、20例正常卵巢组织、30例卵巢良性肿瘤中抑癌基因Runx3的表达情况,分析其与卵巢癌临床病理特征的关系,并进行临床随访分析Runx3基因与卵巢癌化疗耐药的关系。结果:1.Runx3蛋白在卵巢癌组织中的表达明显低于正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤中的表达,两两比较,差异有统计学意义(P0.05);Runx3蛋白表达与肿瘤的临床分期和病理学分级有关,差异有显著性(P0.05);与肿瘤的组织学类型、患者年龄、是否绝经、及有无腹水形成无关(P0.05)。2.Runx3蛋白在化疗敏感组中高表达。结论:Runx3蛋白低表达对卵巢癌的发生发展及化疗耐药中起重要作用。     

GDF15基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨生长分化因子GDF15(Growth Differentiation Factor 15)基因在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与铂类耐药的相关性。方法:应用免疫组化、western blot、RT-PCR等方法对80例原发性卵巢癌组织和卵巢癌顺铂敏感/耐药株A2780和CP70、SKOV3和SKOV3/DDP中生长分化因子GDF15表达水平进行测定。结果:生长分化因子GDF15的表达强度与卵巢癌铂类耐药性显著相关。在卵巢癌顺铂耐药株CP70、SKOV3/DDP中GDF15表达水平较顺铂敏感株A2780、SKOV3明显增高。结论:GDF15表达水平与卵巢癌发生发展及铂类耐药相关,对于卵巢癌患者早期筛选、预测预后具有一定的临床指导价值。     

转录因子FOXM1在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

FOXM1(Forkhead box protein M1)是调控细胞增殖的重要转录因子,近年来研究表明与肿瘤发生密切相关,但与卵巢癌的关系尚不明确.通过检测68例卵巢癌标本、21例卵巢良性肿瘤标本、24例正常卵巢标本以及3株卵巢癌细胞系(A2780细胞、OVCAR3细胞、SKOV3细胞)中FOXM1的表达情况,分析其与临床参数之间的相关性及临床意义.结果显示卵巢癌中FOXM1表达明显高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,差异极为显著,其中低分化细胞中表达强于中高分化细胞(P=0.013),Ⅲ～Ⅳ期表达强于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.011),但与病理类型无关;FOXM1在3株卵巢癌细胞系中均有较强表达.FOXM1在卵巢癌组织及3种卵巢癌细胞系中存在高表达,且与卵巢癌分化程度及临床分期有关.     

WT-1、Smac蛋白在上皮性卵巢癌中的表达和临床意义研究

目的:探讨WT-1和Smac蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学染色方法检测40例正常卵巢组织,40例卵巢上皮性良性肿瘤组织,60例全面分期手术治疗的上皮性卵巢癌组织中WT-1、Smac蛋白的表达,并分析WT-1、Smac蛋白的表达与上皮性卵巢癌临床病理特征的相关性及二者之间的相关性。结果:WT-1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织或卵巢上皮性良性肿瘤组织(P0.05);Smac蛋白在上皮性卵巢癌组织中表达明显低于正常卵巢组织或卵巢上皮性良性肿瘤组织(P0.05)。上皮性卵巢癌组织中WT-1、Smac蛋白的表达与肿瘤临床分期、组织分化程度、淋巴结有无转移均显著相关(P0.05)。且上皮性卵巢癌中WT-1、Smac蛋白的表达呈明显负相关性(r=-0.35,P0.05)。结论:WT-1蛋白高表达或Smac蛋白低表达可能在上皮性卵巢癌的发生、发展中发挥重要作用,检测WT-1、Smac蛋白的表达有助于上皮性卵巢癌恶性程度的判断和预后评估。     

HE4、NF-κBp65和MMP-9在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其临床意义

目的探讨HE4、NF-κBp65以及MMP-9的表达与上皮性卵巢肿瘤临床病理生物学行为的关系以及对患者预后的影响。方法应用免疫组化对80例卵巢上皮性癌、10例交界性上皮性肿瘤及10例良性上皮性肿瘤组织进行HE4、NF-κB p65及MMP-9蛋白的检测。结果 HE4、NF-κBp65及MMP-9蛋白的阳性表达率在卵巢癌组均高于交界性及良性肿瘤组（P〈0.05）。三个指标的表达与EOC的组织学分级、腹腔脏器及淋巴结转移以及PTNM临床分期有关（P〈0.05）;在EOC中,NF-κBp65分别与HE4、MMP-9的表达呈正相关（r1=0.673,P〈0.05;r2=0.775,P〈0.05）。多因素分析,PTNM分期、MMP-9的表达是影响卵巢癌术后患者预后的独立因素（P〈0.05）;HE4阳性组与阴性组5年生存率分别为12.7%和84.0%,MMP-9阳性组与阴性组5年生存率分别为8.7%和70.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 NF-κBp65可能通过上调HE4、MMP-9的表达促进EOC的浸润和转移,联合检测HE4、NF-κBp65以及MMP-9的表达可能作为预测和评价患者预后的生物学指标。     

程序性死亡配体-1在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨程序性死亡配体-1(PD-L1)在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法:选取2015年7月-2017年6月期间在我院接受治疗的鼻咽癌患者333例,收集其鼻咽癌组织作为观察组标本,另选取同期在我院接受治疗的慢性鼻咽炎患者102例的鼻咽炎组织作为对照组标本。采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组患者鼻咽组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达,并分析观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达与临床病理参数的关系。结果:对照组患者鼻咽炎组织中PD-L1蛋白的阳性率为0.00%(0/102),观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白的阳性率为69.37%(231/333),两组PD-L1蛋白的阳性率比较差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示,对照组患者鼻咽炎组织中未见PD-L1 mRNA表达,观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1 mRNA的相对表达水平为(0.82±0.27),差异有统计学意义(P0.05)。观察组患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA的表达与年龄、性别无关(P0.05),而TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移、有吸烟史患者鼻咽癌组织中PD-L1蛋白阳性率和PD-L1 mRNA的表达均高于TNM分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移、无吸烟史患者(P0.05)。结论:在鼻咽癌组织中PD-L1蛋白和PD-L1 mRNA呈现高表达,且其表达与TNM分期、淋巴结转移、吸烟史有关。     

精氨酸甲基转移酶1和核因子κB在哮喘豚鼠中的表达变化

目的：探讨共激活因子相关的精氨酸甲基转移酶1和核因子-κB在豚鼠支气管哮喘模型气道和肺组织的表达变化。方法：24只白色雄性豚鼠随机分为：①正常对照组;②哮喘组。卵清蛋白致敏并激发后采用间接免疫荧光法检测气道及肺组织精氨酸甲基转移酶1和核因子NF—κB（P65）的表达水平,探讨其在哮喘中可能的作用机制。结果：CARM1和NF—κB（P65）在对照组和哮喘组均有阳性表达,主要在支气管-终末细支气管上皮细胞和肺组织成纤维细胞胞核表达。正常对照组和哮喘组CARM1和NF—κB（P65）的表达差异均有统计学意义？结论：在哮喘豚鼠气道上皮及肺组织CARM1和NF—κB（P65）在细胞胞核高表达,提示CARM1可能通过增强募集NF—κB到相关位点激活NF—κB信号转导通路,并启动了多种前炎性基因和免疫调节基因的转录激活从而诱发哮喘炎症反应.     

IGF-1通过SRF结合位点调节SMYD1在C2C12细胞中的表达

SMYD1是组蛋白甲基转移酶,在骨骼肌和心肌中特异表达,是调节心肌和骨骼肌发育的关键因子.虽然SMYD1的生物学功能比较清楚,但细胞外因子调节SMYD1基因表达的机制还没有报导.IGF-1能促进心肌和骨骼肌的发育、加速肌肉的损伤修复过程.通过Western印迹发现,在用IGF-1处理的C2C12细胞中,SMYD1的表达水平随处理时间逐步升高,SRF蛋白和Myogenin的表达也呈现类似的趋势.通过构建不同长度的SMYD1基因启动子荧光素酶报告基因载体,发现SMYD1基因启动子上IGF-1的应答区域位于-620～-110 bp;EMSA实验表明,SRF结合在SMYD1启动子的CArG位点,而IGF-1则能促进SRF与SMYD1启动子的结合;若将启动子上的CArG元件突变,IGF-1对SMYD1启动子的激活效应被削弱.可见IGF-1能够上调SMYD1在C2C12细胞中的表达,并且这种调控作用是部分通过调节SRF与SMYD1启动子上CArG位点的结合而实现的.此外,通过荧光素酶报告基因分析,发现SMYD1能够激活肌肉标志因子肌肉肌酸激酶(MCK)基因活性,而且与MyoD基因存在协同激活效应.因此,SMYD1可能是IGF-1的下游靶基因,SMYD1可能通过与MyoD协同作用,促进肌肉的分化。     

趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨趋化因子受体CCR3在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,以及其与卵巢癌临床病理特征的关系。方法:收集上皮性卵巢癌组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织以及正常卵巢组织标本各30例,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量反转录聚合酶链反应[poly(A)-RT-qPCR]检测其CCR3的表达,并分析上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者临床病理特征之间的关系。结果:上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达显著高于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组,差异有统计学意义(P0.05);且上皮性卵巢癌组织中CCR3的表达与患者的分期、组织分级及淋巴结转移均显著相关(P0.05)。结论:CCR3在上皮性卵巢癌组织中呈高表达,且在上皮性卵巢癌的发生和发展过程中均起着十分重要的作用。     

卵巢癌中Caspase-3 的表达及与化疗耐药相关性研究

目的:检测Caspase-3在卵巢癌中的表达并探讨其与卵巢癌化疗耐药相关性。方法:利用组织芯片技术结合免疫组化方法,对176例卵巢癌、70例良性卵巢肿瘤、50例正常卵巢组织中Caspase-3的表达进行检测,分析其表达与临床病理特征及化疗疗效的相关性。结果:卵巢癌中Caspase-3的表达显著低于正常卵巢及卵巢良性肿瘤,且卵巢癌FIGO临床分期越晚其表达越低(P<0.01),而与肿瘤的组织类型、病理分级及患者的年龄和月经状况无显著相关性(P>0.05)。Caspase-3在卵巢癌化疗耐药组的阳性率显著低于化疗敏感组(P<0.01)。结论:凋亡蛋白酶Caspase-3的缺表达可能参与了卵巢癌的发生发展过程,在卵巢癌化疗耐药的行程中发挥作用;Caspase-3的检测可能对指导卵巢癌临床化疗用药有帮助,可提高化疗效果和减少化疗耐药,并成为预测化疗疗效的有用指标。     

FEN-1 和AXL表达与上皮性卵巢癌化疗耐药相关分析

目的:探讨FEN-1和AXL在上皮性卵巢癌组织表达情况及其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法:采用免疫组化法检测卵巢癌/正常卵巢组织中FEN-1及AXL表达,分析蛋白表达与卵巢癌化疗疗效相关性。结果:卵巢癌组织中FEN-1及AXL阳性率分别为58.20%及72.13%,均显著高于正常卵巢组织(10%)(P0.05)。相对早期患者,FEN-1高表达于晚期卵巢癌组织(37.50%63.27%)(P0.05),与分化程度及化疗敏感性关系不大(P0.05)。AXL高表达于晚期卵巢癌(77.55%50%)及低分化组织中(79.71%62.26%)(P0.05)。癌组织AXL阳性者化疗有效率(51.14%)明显低于阴性者(85.29%)(P0.05);化疗耐药组AXL阳性率(89.58%)明显高于敏感组(60.81%)(P0.05)。结论:FEN-1及AXL均与卵巢癌发生发展相关,AXL的表达可作为预测卵巢癌化疗耐药的指标。     

卵巢上皮癌中CCN1的表达及临床意义

目的:探讨人卵巢上皮癌组织和卵巢良性肿瘤中CCN1表达水平的差异及临床意义.方法:收集我院21例卵巢上皮癌病理组织,以卵巢良性肿瘤为对照,经Real-time PCR和免疫组织化学等方法从mRNA水平和蛋白水平检测CCN1的表达水平.分析其表达水平与卵巢上皮肿瘤恶性程度的关系.结果:Real-time PCR和免疫组织化学结果均提示CCN1在卵巢上皮癌组织中的表达水平高于良性肿瘤(P＜0.01).结论:CCN1可能与卵巢上皮癌的恶性潜能密切相关.     

FSH通过SATB1调控上皮性卵巢癌ES-2细胞的增殖和侵袭活性

目的：探讨特异AT序列结合蛋白1（special AT-rich sequence-bindingprotein,SATB1）在卵泡刺激素（Follicle stimulating hor-mone,FSH）诱导的上皮性卵巢癌ES-2细胞增殖和侵袭中的作用。方法：以Real-timePCR检测不同浓度FSH（0、10、20、40、80mlU／ml）处理后sATB1基因mRNA表达水平的变化。实验分4组：①siCon组,转染si-阴性对照（si-Negativecontrol）序列的实验组,对SATBl无干扰作用;②siSATB1组：转染特异性干扰下调SATB1的siSATB1序列;（3）FSH＋siCon组：以FSH处理的siCon组;（4）FSH＋siSATBl组：以FSH处理的sisATB1组。MTT法检测4组细胞的增殖情况,Westernblotting技术检测4组细胞细胞周期蛋白（CyclinDl）,基质金属蛋白酶2（MMP．2）的蛋白表达情况,Transwell侵袭实验检测4组细胞侵袭能力的变化。结果：1．FSH＋siCon组的细胞增殖能力明显高于siCon组的细胞增殖能力,FSH＋siCon组的CyclinD1蛋白相对表达量0．90＋0．08明显高于siCon组的0．37＋0．01（P均〈0．01）,提示FSH具有促进ES．2细胞增殖的作用。2．FSH＋siCon组的穿膜细胞数（30212）个明显高于siCon组（13919）个,FSH＋siCon组的MMP．2蛋白相对表达量0．40＋0．01明显高于siCon组的0．28＋0．02,提示FSH具有促进ES．2细胞侵袭能力的作用。3．随着FsH浓度的增高,SATBlmRNA的表达量逐渐增加,分别为1,1．66±0．04,1．79±0．21,2.31±0．03,以FsH浓度为80mlU／m1时最显著（P〈0．05）。4．FSH＋siSATBl组的细胞增殖能力明显低于FSH＋siCon组的细胞增殖能力,FSH＋siSATBl组的CyclinD1蛋白相对表达量0．22±0．02明显低于FSH＋siCon组的0．90±0．08（P均〈0．01）;FSH＋siSATB1组的穿膜细胞数（5216）个低于FSH＋siCon组的（30212）个,FSH＋siSATB1组的MMP-2蛋白相对表达量0．15±0．00明显低于FSH＋siCon组的0．40±0．01（P均〈0．01）,FSH促进ES-2细胞增殖和侵袭的能力由于SATB1基因表达的下降而被阻断。结论：SATBl是FSH作用的重要靶分子,介导FSH对上皮性卵巢癌ES-2细胞系增殖、侵袭活性的调控。     

Nanog 基因在卵巢癌和卵巢肿瘤干细胞中的表达及意义

目的:探讨胚胎干细胞关键因子Nanog基因mRNA及其蛋白在卵巢癌和卵巢癌肿瘤干细胞中的表达及意义。方法:选取10例正常卵巢上皮组织、10例卵巢良性肿瘤及60例卵巢癌组织,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学PV-6000两步法检测Nanog mRNA和蛋白表达水平;采用无血清悬浮培养法从SKOV-3卵巢癌细胞株中分离培养肿瘤干细胞,流式细胞术鉴定肿瘤干细胞CD117表达,采用RT-PCR和Western Blot方法检测SKOV-3卵巢癌细胞及肿瘤干细胞中NanogmRNA及其蛋白的表达水平。结果:Nanog mRNA在卵巢癌组织中的表达水平均高于正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织(P<0.05);Nanog mRNA在不同分化程度及临床分期的卵巢癌组织中表达水平不同,低分化组高于高分化组(P<0.05);III-IV期高于I-II期(P<0.05);免疫组化结果同RT-PCR。从SKOV-3卵巢癌细胞株中成功分离出肿瘤干细胞,SKOV-3卵巢癌细胞和肿瘤干细胞Nanog mRNA相对含量分别为0.6044±0.0368,0.8736±0.0537,差异具有统计学意义(P<0.05),两种细胞Nanog蛋白相对含量分别为0.6364±0.0169 1.2788±0.0314,差别具有统计学意义(P<0.05)。结论:Nanog基因在卵巢癌组织和SKOV-3细胞系中均高表达,其在组织中的表达强度与临床分期及病理分级关系密切,且在肿瘤干细胞中表达高于一般卵巢癌细胞,其与卵巢癌的发生发展关系密切,可能是卵巢癌干细胞的表面标志物,有望成为新的标志物。     

FSH通过SATB1调控上皮性卵巢癌ES-2细胞的增殖和侵袭活性

目的:探讨特异AT序列结合蛋白1(specialAT-rich sequence-bindingprotein,SATB1)在卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)诱导的上皮性卵巢癌ES-2细胞增殖和侵袭中的作用。方法:以Real-time PCR检测不同浓度FSH(0、10、20、40、80mIU/ml)处理后SATB1基因mRNA表达水平的变化。实验分4组:①siCon组,转染si-阴性对照(si-Negative contro1)序列的实验组,对SATB1无干扰作用;②siSATB1组:转染特异性干扰下调SATB1的siSATB1序列;③FSH+siCon组:以FSH处理的siCon组;④FSH+siSATB1组:以FSH处理的siSATB1组。MTT法检测4组细胞的增殖情况,Western blotting技术检测4组细胞细胞周期蛋白(CyclinD1),基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白表达情况,Transwell侵袭实验检测4组细胞侵袭能力的变化。结果:1.FSH+siCon组的细胞增殖能力明显高于siCon组的细胞增殖能力,FSH+siCon组的Cyclin D1蛋白相对表达量0.90±0.08明显高于siCon组的0.37±0.01(P均<0.01),提示FSH具有促进ES-2细胞增殖的作用。2.FSH+siCon组的穿膜细胞数(302 12)个明显高于siCon组(139 19)个,FSH+siCon组的MMP-2蛋白相对表达量0.40±0.01明显高于siCon组的0.28±0.02,提示FSH具有促进ES-2细胞侵袭能力的作用。3.随着FSH浓度的增高,SATB1mRNA的表达量逐渐增加,分别为1,1.66±0.04,1.79±0.21,2.31±0.03,以FSH浓度为80mlU/ml时最显著(P<0.05)。4.FSH+siSATB1组的细胞增殖能力明显低于FSH+siCon组的细胞增殖能力,FSH+siSATB1组的Cyclin D1蛋白相对表达量0.22±0.02明显低于FSH+siCon组的0.90±0.08(P均<0.01);FSH+siSATB1组的穿膜细胞数(52 16)个低于FSH+siCon组的(302 12)个,FSH+siSATB1组的MMP-2蛋白相对表达量0.15±0.00明显低于FSH+siCon组的0.40±0.01(P均<0.01),FSH促进ES-2细胞增殖和侵袭的能力由于SATB1基因表达的下降而被阻断。结论:SATB1是FSH作用的重要靶分子,介导FSH对上皮性卵巢癌ES-2细胞系增殖、侵袭活性的调控。