中药大黄的综合研究 Ⅶ.蒽醌衍生物抗菌作用机制 (1)对金黄色葡萄球菌呼吸的影响

(1)大黄酸、大黄素和芦荟大黄素对金黃色葡萄球菌在培养基中的呼吸有很強的抑制作用,1抑菌单位浓度,60分钟內,抑制率分别为42%、83%和75%。(2)大黄素对金黃色葡萄球菌氨基酸、糖和糖代謝中間产物的氧化和脫氫都有不同程度的抑制作用,其中以对谷氨酸和精氨酸的氧化抑制最強,其抑制率可达80%以上。(3)核黃素、烟酸及巯基化合物对大黄素抑制金黃色葡萄球菌的呼吸及氧化某些氨基酸和糖代謝中間产物有竞爭性拮抗作用。文中討論了大黄蒽醌衍生物抑制金黄色葡萄球菌呼吸的作用机制,可能是由于它影响了吡啶核苷酸、黄素核苷酸及必需巯基的酶系,尤其是前二者。     

中药大黄的综合研究——ⅩⅢ.大黄蒽醌衍生物对DNA的作用

1.大黄素和大黄酸对无细胞系统DNA 生物合成有抑制作用,100微克/毫升抑制率分别为50%和39%。2.加入DNA 能使大黄素的吸收光谱发生位移,说明大黄素可与DNA 结合成复合物。3.大黄素由于能与DNA 结合,从而抑制了DNA 生物合成,这可能是它的抗菌和抗癌作用的机制。     

从大肠杆菌制备专一性谷氨酸脱羧酶及其用于血清与组织中谷氨酸转氨基酶的测定

根据五株大腸杆菌在不同成分与pH的培养基內培养的結果,选择了pH7.5的牛肉湯加蛋白腖与琼脂的固体培养作为細菌培养条件。从18—20小时在37度培养的大腸杆菌制成了高产量的专一性谷氨酸脫羧酶丙酮粉,其最适pH为5.1,米氏常数为4.3×10~(-3)M。拟定了一种血清及动物組織中轉氨基酶的測定法。此方法是利用大腸杆菌谷氨酸脫羧酶丙酮粉测定轉氨基作用所生成的谷氨酸量。应用此方法測得我国正常成人血清的谷門轉氨基酶活性为0.70±0.22单位与谷丙轉氨基酶活性为0.58±0.25单位(每单位等于在37度轉氨基作用生成1微克分子L-谷氨酸/1毫升血清/1小时)。应用此方法也試測了大白鼠六种組織中五种氨基酸对α-酮戊二酸的轉氨基酶活性。     

蚕氨基酸代谢之研究 Ⅰ.比较家蚕和野蚕各种氨基酸和α-酮戊二酸之转氨作用并自蓖麻蚕丝腺体中提取支链氨基酸-谷氨酸转氨酶及其一些性质的研究

(1)比較家蚕(华九-云瀚)和野蚕(蓖麻蚕、柞蚕和樗蚕)各种氨基酸和α-酮戊二酸之轉氨作用;发現在家蚕和野蚕絲腺体后部及脂肪体中都存在有活力強的谷丙轉氨酶和谷天轉氨酶。(2)在野蚕(萞麻蚕、柞蚕和樗蚕)之絲腺体后部存在有支鏈氨基酸((?)白氨酸、白氨酸和缬氨酸)和α-酮戊二酸及丙酮酸之間的轉氨作用。闡明了絲腺体中丙氨酸生物合成之另一途径。(3)在家蚕及野蚕之体液中,和Koide之結果不同,存在有谷天轉氨酶及谷丙轉氨酶。比較了五龄不同日期以上两酶和支链氨基酸-谷氨酸轉氨酶活力之变化。(4)証明了支鏈氨基酸和α-酮戊二酸之間的轉氨作用是酶促的轉氨反应,而非由氨基酸供体之脫氨作用,继而和α-酮戊二酸之加氨作用而形成谷氨酸。(5)自萞麻蚕絲腺体提取支鏈氨基酸-谷氨酸轉氨酶。和原始之活力相比提高了比活39倍,回收率为81%。(6)支鏈氨基酸-谷氨酸轉氨酶在α-酮戊二酸浓度較低时随浓度之增加而上升,到一定浓度时,反应速度反而下降。(?)白氨酸和α-酮戊二酸之間的轉氨作用,在1小时之內,谷氨酸之形成速度基本上呈直线关系。对热不稳定,在50℃时活力降低82%。(7)巯基抑制剂对支鏈氨基酸-谷氨酸轉氨酶具有显著的抑制作用。PCMB(10~(-4)M)抑制該酶60%,溴化乙酰胺(10~(-4)M)为37%;DL-环絲氨酸对該轉氨酶之抑制作用指出,該酶是属于对环絲氨酸具有低度敏感性的轉氨酶类。     

金黴素抗生作用的機構——Ⅰ.對大腸桿菌呼吸的影響

實驗結果表明最低制菌濃度的金黴素可以顯著抑制大腸桿菌在含有葡萄糖和某些合氮物如酪朊水解物、丙氨酸、門冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸或硫酸銨的培養基中的呼吸,也抑制了氨氮的同化。在以丙酮酸和谷氨酸作底質時有同樣的現象。以上述含氮物中的任何一種加於大腸桿菌的葡萄糖磷酸鹽緩衝劑的懸浮液中,可以有力地提高其呼吸率,比在單獨葡萄糖中的要高得多。2.5微克/毫升的金黴素可以強烈地抑制這種提高作用。這種觀察到的抑制並不是由於個別底質分别受到抑制的結果。本文討論了金黴素抑制大腸桿菌呼吸的作用機構和可能的幾種解釋,並指出這種作用可能是由於金黴素抑制了包括碳水化物和含氮物在内的某個或某些聯合代謝過程。     

冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制作用

研究了冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响。采用结晶紫染色法评价了冬凌草提取物在不同质量浓度和不同添加时间下干预金黄色葡萄球菌生物被膜的作用。实验结果表明,冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为125μg/mL和250μg/mL,在亚抑菌浓度,冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌生物膜形成的干预作用不明显;当冬凌草提取物质量浓度大于1倍MIC时,其对金黄色葡萄球菌生物膜形成的有明显的抑制作用,在生物膜形成的初始时间(0 h)添加药物抑制效果最佳,2MIC冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌成膜的抑制率达到79%以上;24 h后添加抑制作用较弱,抑制率仅有60%左右。采用银染法和荧光染色法研究了冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌生物膜的清除效果和抑制胞外多糖的合成,实验结果也表明,在亚抑菌浓度,冬凌草提取物对金黄色葡萄球菌生物膜的清除和胞外多糖合成的抑制作用很弱,当冬凌草提取物质量浓度大于1 MIC时,在生物膜形成的初始时间(0 h)添加药物,对金黄色葡萄球菌生物膜清除效果明显,胞外多糖的合成也受到显著的抑制。本研究为冬凌草提取物在食品防腐和保鲜,以及无抗饲料的广泛应用提供理论基础。     

硬枝树花中4个单体化合物的抑菌活性

研究了从硬枝树花中提取得到的4个单体化合物松萝酸(usnic acid)、去甲环萝酸(evernic acid)、巴尔巴地衣酸(barbatic acid)和水杨嗪酸(salazinic acid)对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌4种细菌及甜瓜根腐病菌、禾谷镰刀病菌、番茄灰霉病菌3种植物病原菌的抑制能力。结果表明,水杨嗪酸对大肠杆菌的抑制能力较强,对枯草芽孢杆菌几乎无抑制作用。松萝酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌基本无抑制作用。高浓度的去甲环萝酸对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑制效果较好。巴尔巴地衣酸对4种细菌的抑制作用不强。水杨嗪酸对3种植物病原菌的抑制效果明显,去甲环萝酸对3种植物病原菌的抑菌效果较好,巴尔巴地衣酸对番茄灰霉病菌的抑制能力较好,而松萝酸对植物病原菌的抑制能力较弱。     

大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用

大黄素对酪氨酸酶有显著的竞争性抑制作用,K_i值为1.51×10~(-4)mol,50％抑制的药物浓度为36.6μg/ml;大黄酸的抑制作用较弱,芦荟大黄素几乎无抑制作用。氯化铜(3.3×10~(-7)mol/L)、半胱氨酸(3.3×10~(-7)mol/L)和牛血清白蛋白(1.0mg/ml)对大黄素抑制酪氨酸酶有较强的拮抗作用,恢复率分别为60.0％、45.7％和61.1％。大黄素能与牛血清白蛋白非特异性结合形成复合物,引起吸收光谱红移55毫微米。大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用可能是大黄抗黑色素瘤的作用机制之一。     

大黄素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用机制

以金黄色葡萄球菌为供试菌,通过测定大黄素对其细胞膜的通透性、可溶性蛋白质和呼吸代谢的影响,来阐述大黄素的抑菌作用机制. 利用电导率、生物大分子分析、呼吸代谢抑制检测等方法,验证大黄素的药效作用. 实验结果显示,大黄素作用金黄色葡萄球菌后,培养基溶液中电导率比对照组增加了2.23%,DNA和RNA大分子的含量比对照组增加了67.36%,大黄素作用金黄色葡萄球菌16 h后,菌体可溶性蛋白总量比对照组减少了28.3%;大黄素能抑制金黄色葡萄球菌物质代谢中的2种关键酶的活性,其中琥珀酸脱氢酶活性抑制率为53.8%,苹果酸脱氢酶的活性抑制率为25.5%.上述结果表明,大黄素可以破坏细菌细胞膜的通透性,抑制菌体内的蛋白质合成,通过抑制代谢关键酶的活性发挥杀菌作用.     

蓝莓提取物对金黄色葡萄球菌的抑制作用研究

本文以四种栽培蓝莓为主要研究对象,通过与山梨酸钾抑菌效果的比较,研究了蓝莓提取物对金黄色葡萄球菌(AB91093)的抑制作用,并测定了蓝莓中总酚酸和还原糖的含量。结果表明,蓝莓对金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌效果。四种蓝莓提取物中,Elliott和Darrow提取物对金黄色葡萄球菌的抑制效果显著,分别在300 mg/mL和350 mg/mL时可明显抑制金黄色葡萄球菌的生长,450 mg/mL时能完全杀死金黄色葡萄球菌。蓝莓的抑菌能力与其酚酸含量正相关,与还原糖含量负相关。而山梨酸钾对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为100 mg/mL和200 mg/mL。     

硫脲壳聚糖Zn(Ⅱ)配合物的制备、表征及生物活性

利用FT-IR、UV、TG-DTA和XRD手段,对合成的硫脲壳聚糖及硫脲壳聚糖-Zn(Ⅱ)配合物进行了表征,研究了壳聚糖、硫脲壳聚糖及硫脲壳聚糖-Zn(Ⅱ)配合物对细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和真菌黑曲霉的抑菌性能.结果表明:合成的硫脲壳聚糖-Zn(Ⅱ)配合物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性能比单一的壳聚糖、硫脲壳聚糖显著提高,对真菌黑曲霉亦具有较强的抑制作用.     

金黄色葡萄球菌细胞膜磷脂合成的研究进展

金黄色葡萄球菌引起的危害是目前我国微生物安全的重要问题之一。金黄色葡萄球菌通过脂肪酸生物合成磷脂酸(磷脂合成必需中间体)合成细胞膜磷脂以完成自身繁殖。因此,抑制菌体磷脂酸合成可有效防控金黄色葡萄球菌对环境及生物体造成危害。然而,金黄色葡萄球菌可经II型脂肪酸合成(type II fatty acid synthesis, FASII)通路和旁路两条途径合成磷脂酸,常规抑菌剂仅靶向抑制FASII通路,可能导致菌体在富含外源脂肪酸条件下出现“旁路逃逸”,形成防控漏洞。为此,本文系统总结金黄色葡萄球菌基于FASII通路和旁路合成细胞磷脂酸及磷脂酸向其他磷脂类物质转化的信号传导过程,讨论抑菌物质靶向抑制上述信号传导过程中可能的关键靶点,为新型抑菌剂开发提供理论指导。     

大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶的研究 Ⅱ.核酸的結构与磷酸解作用

(1) 利用磷酸单酯酶切除商品酵母RNA末端磷酸,可以提高大腸杆菌多核苷酸磷酸化酶对其磷酸解速度达5—7倍之多,說明大分子核酸和寡核苷酸一样,3′-磷酸末端是妨碍磷酸解的重要因素。(2) 商品酵母RNA,經过脫氨后,磷酸解速度有所提高;說明RNA二級結构的破坏,有利于磷酸解反应的进行。(3) 磷酸解脫氨RNA时,要求較高濃度的Mg~(++)其最适濃度由5×10~(-3)M提高到8×10~(-2)M。(4) 3′-单核甘酸对RNA的磷酸解无影响。     

红谷霉素对金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究

红谷霉素是一种抗细菌的新型抗生素。为探讨红谷霉素对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,本文采用浓度为EC50和EC90的红谷霉素对试验菌株进行处理,并设空白对照,测定供试菌株的胞外多糖、细胞膜渗透性和生物大分子(DNA、RNA、蛋白质和胞外酶活性)。结果显示:红谷霉素对金黄色葡萄球菌的抑制作用首先表现在对核酸合成的抑制,由于核酸的合成受阻,引起菌体内的蛋白质和其它的生物大分子的合成受阻,细菌细胞膜通透性改变。透视电镜照片显示:红谷霉素处理后金黄色葡萄球菌菌体内部的原生质体明显变稀。     

蚕氨基酸代謝之研究——Ⅵ.家蚕与蓖麻蚕的谷氨酸脫氫酶

在家蚕与蓖痲蚕的脂肪体,絲腺后部和中腸組織中,利用分光光度法,都观察到谷氨酸脫氫酶。将α-酮戊二酸与NH_4~+加于以上各种組織的酶液中,測定NADH_2的氧化,証实了其逆向反应的存在。蚕組織中的谷氨酸脫氫酶需要NAD为其輔酶。在家蚕与蓖痲蚕的絲腺后部中,我們利用直接測定的方法,观察到БраунШтеЙн所提出的轉氨-脫氨作用的存在,从而进一步說明谷氨酸脫氫酶在氨基酸代謝中的重要地位。此外,我們尚发現在不同发育阶段,蓖麻蚕脂肪体中谷氨酸脫氫酶的活力表現显著的变化。     

氧化磷酸化作用的研究 Ⅱ.2,4-二硝基苯酚对琥珀酸氧化抑制效应的解除

进一步研究DNP对大白鼠肝脏綫粒体琥珀酸氧化的激活和抑制,发現当琥珀酸氧化已被DNP抑制时琥珀酸脫氫酶并沒有受到明显的抑制。DNP对琥珀酸氧化的抑制可以被α-酮戊二酸、(?)柠檬酸、柠檬酸、丙酮酸、β-羟基丁酸等解除。α-酮戊二酸的解除作用与底物水平磷酸化作用无关,但与脫氫过程有密切关系;当加入0.2mM亚砷酸鈉时,α-酮戊二酸不再能使呼吸恢复。谷氨酸解除DNP对琥珀酸氧化抑制的作用不受天門冬氨酸α-酮戊二酸轉氨酶的抑制剂环絲氨酸的影响,Amytal使呼吸恢复的作用与线粒体內源底物含量有关?疚慕Y果进一步說明琥珀酸氧化需要能量激活,我們认为某些底物脫氫生成的NADH可以通过琥珀酸氧化引起NAD~+需能还原的逆反应生成高能磷酸化合物因而激活了琥珀酸的氧化。通过这样的途径生成高能磷酸化合物可能是对DNP較不敏感的。     

青霉素和氯丙嗪合并应用对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用

体外实验证明,同时加入小于抑菌浓度的氯丙嗪,可提高青霉素对一定菌量的耐药金黄色葡萄球菌的杀菌力;但对敏感菌株剐作用不明显。这种合井用药的效果可以由菌的生长曲线表达出来。氯丙嗪20微克／毫升加入小于抑菌漱度的青霉寨,在7小时后菌数已经减低,菌液中的青霉素量井未减少;不加氯丙嗪者则在7小时后菌数逐渐增高,此时菌液中的青霉素已垒部破坏。可能是氯丙嗪影响了青霉秦酶的活性或生成。这个结果可能在解决金黄色葡萄球菌的耐药性上提供线索。     

西瓜藤提取物的抑菌作用研究

采用琼脂稀释法研究西瓜藤提取物的体外抑菌作用,用小鼠腹腔注射金黄色葡萄球菌法研究80%醇提物的体内抑菌作用。结果表明:西瓜藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、伤寒沙门氏菌、枯草芽孢杆菌和肺炎克雷伯氏菌均有不同程度的抑制作用,但对链球菌作用不明显。其中80%醇提取物和乙酸乙酯萃取物抑制金黄色葡萄球菌活性最好,其最低抑菌浓度(MIC)分别为4.2、8.4mg.mL-1。体内实验也表明,乙醇提取物具有较好的抑菌作用。西瓜藤提取物具有抑菌活性,在抑菌方面有一定开发前景。     

冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜的抑制机制

【背景】金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,易在食品及加工器具表面形成生物膜,引起食品腐败和疾病的传播,威胁食品安全。【目的】研究冬凌草甲素抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的作用机制。【方法】使用结晶紫染色法和扫描电镜观察冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制作用,刚果红平板法定性检测冬凌草甲素对细胞间多糖黏附素(polysaccharideintercellular adhesion,PIA)合成的影响,分光光度法测定冬凌草甲素对供试菌株胞外DNA (eDNA)释放量的影响,RT-PCR技术检测冬凌草甲素对供试菌株ica A、cid A、agr A和sar A基因表达量的影响。【结果】冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌生物膜形成有较强的抑制作用;冬凌草甲素能显著抑制PIA的合成,且呈浓度剂量依赖;冬凌草甲素能抑制供试菌株e DNA的释放量,其中1/4最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌16 h后,与对照组相比,e DNA的释放量降低了48.62%;冬凌草甲素可显著抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因的表达,其中1/2MIC的冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌16 h后,ica A、cid A、agr A和sar A基因的表达量分别比对照降低了91.6%、94.7%、77.6%和70.4%。【结论】冬凌草甲素通过抑制ica A和cid A基因的表达,影响PIA的合成和eDNA的释放,进而干预生物膜的形成。     

乳杆菌抑制金黄色葡萄球菌对HeLa细胞的粘附

对弯曲乳杆菌Lactobacillus crispatus T79-3和T90-1、詹氏乳杆菌Lactobacillus jensenii T118-3和T231-1四株乳杆菌对金黄色葡萄球菌生长的抑制效果以及抑菌成分进行了分析,比较乳杆菌排除、竞争、置换3种不同作用方式对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制作用。结果表明4株乳杆菌皆能抑制金黄色葡萄球菌的生长及其粘附HeLa细胞的能力,分析发现4株乳杆菌发挥抑制作用的主要成分是有机酸,同时比较分析乳杆菌3种不同作用方式发现它们对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制效果不同,其中,排除作用方式效果最好。另外,乳杆菌对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制作用具有浓度依赖性,随着乳杆菌浓度增大,抑制作用增强并逐渐达到饱和。4株乳杆菌中,T79-3粘附能力最强,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,排除作用方式抑制金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞作用效果较好,提示乳杆菌T79-3有可能作为益生菌防治妇女泌尿生殖道感染。