小白鼠角膜细胞染色体的制备及洗净剂对染色体损伤的初步观察

在工农业生产实践中,多种理化因素可造成角膜损伤以及导致各种角膜疾病。因此,对角膜细胞的形态、功能、病理变化、损伤因素等方面的研究,已引起人们广泛重视。而角膜细胞染色体的制备,为研究角膜细胞的结构、功能提供了一种简便、可靠的手段。为了制备分散良好的角膜细胞染色体标本以观察染色体的损伤,我们用小白鼠角膜为材料,洗净剂为致损伤剂,做了初步摸索。一、材料和方法采用雄性昆明种小白鼠(1.5—2月龄)60只,随机分成五组。将海鸥牌洗净剂(上海合成洗涤剂五厂生产),用蒸馏水稀释成5％、10％、20％和50％四种浓度。分别滴入四个实验组的小白鼠眼内(每只眼2滴)。24小时后,各自再加2滴。同时,每只小白鼠腹腔注射1％     

对角膜细胞染色体的影响

随着微波技术在工业、国防、医疗、通讯等部门的广泛应用和空间电磁强度的不断增加,微波辐射已成为危害人们身体健康的一种因素,联合国人类环境会议已把微波列入必须控制的造成公害的主要污染物之一。关于首先微波导致人眼损害的研究,最早是由Hirsch在1952年报道:一名雷达技术工人,在1500—3000MHz频段,功率密度100毫瓦/厘米~2下工作一年后,发现二侧性白内障。此后,不少研究者表明,大强发暴露导致人眼晶状体混浊,患白内障发生。1978年Ya().K.T.S曾报道微波辐射对中国田鼠角膜上皮细胞染色体的影响,而国内至今未见有这方面的报道。我们用微波照射小白鼠角膜细胞,并就微波辐射对其染色体的影响作初步探讨。     

小檗碱对游离脂肪酸损伤的胰岛βTC3细胞的保护作用

目的:观察小檗碱对棕榈酸损伤的胰岛βTC3细胞是否具有保护作用,并筛查出小檗碱起保护作用的有效浓度及合适的作用时间。方法:以胰岛βTC3细胞为研究对象,用棕榈酸构建脂毒性模型,MTT法筛选小檗碱起保护作用的有效浓度及时间;流式细胞技术检测胰岛βTC3细胞凋亡情况。结果:10.001-1μmol/L小檗碱作用βTC3细胞24、48、72 h,对细胞增殖有不同程度促进作用(与对照组比较P0.05);随着作用时间的延长,低浓度小檗碱对βTC3细胞的保护作用增加,而1μmol/L浓度保护作用下降,10μmol/L及以上浓度出现细胞毒性作用(与对照组相比P0.01),并呈浓度依赖性。2棕榈酸(0.2-1.0 mmol/L)对βTC3细胞的损伤作用具有浓度及时间依赖性(与对照组比较P0.05)。3棕榈酸处理βTC3细胞不同时间后,小檗碱治疗组较模型组的细胞凋亡率显著降低(P0.01)。结论:小檗碱对脂毒性损伤的胰岛βTC3细胞具有保护作用,且脂毒性作用时间越短,小檗碱的保护作用越好,随着脂毒性作用时间的延长,小檗碱的保护作用明显减弱。因此,建议临床上在脂代谢紊乱早期给予小檗碱干预以减轻甚至逆转游离脂肪酸导致的胰岛β细胞凋亡。     

小檗碱对游离脂肪酸损伤的胰岛betaTC3 细胞的保护作用*

目的：观察小檗碱对棕榈酸损伤的胰岛betaTC3 细胞是否具有保护作用,并筛查出小檗碱起保护作用的有效浓度及合适的作 用时间。方法：以胰岛betaTC3 细胞为研究对象,用棕榈酸构建脂毒性模型,MTT 法筛选小檗碱起保护作用的有效浓度及时间;流式 细胞技术检测胰岛betaTC3 细胞凋亡情况。结果：①0.001-1 umol/L小檗碱作用茁TC3细胞24、48、72 h,对细胞增殖有不同程度促进 作用（与对照组比较P＜ 0.05）;随着作用时间的延长,低浓度小檗碱对betaTC3细胞的保护作用增加,而1 umol/L浓度保护作用下 降,10 umol/L及以上浓度出现细胞毒性作用（与对照组相比P＜0.01）,并呈浓度依赖性。②棕榈酸（0.2 -1.0 mmol/L)对betaTC3细胞 的损伤作用具有浓度及时间依赖性（与对照组比较P＜0.05）。③棕榈酸处理betaTC3细胞不同时间后,小檗碱治疗组较模型组的细 胞凋亡率显著降低（P<0.01)。结论：小檗碱对脂毒性损伤的胰岛betaTC3 细胞具有保护作用,且脂毒性作用时间越短,小檗碱的保护 作用越好,随着脂毒性作用时间的延长,小檗碱的保护作用明显减弱。因此,建议临床上在脂代谢紊乱早期给予小檗碱干预以减 轻甚至逆转游离脂肪酸导致的胰岛茁细胞凋亡。     

小鼠肿瘤细胞染色体核仁组织者的细胞化学观察

本文报道用Ag-AS染色技术对几种小鼠肿瘤细胞(Ehrlich腹水瘤,肉瘤180,淋巴瘤1号)核仁组织者(NORs)的观察结果,发现肿瘤细胞的NORs即18 S+28 S rDNA或核糖体基因的位置和大小与正常细胞的不同。正常小鼠细胞有3—6条染色体带有银染色的核仁组织者(Ag-NORs),分布位置都紧靠在着丝点下方;而三种小鼠肿瘤细胞都有一个中等大小的近端着丝点染色体,其Ag-NOR的位置移至长臂的中部。小鼠淋巴瘤1号     

羟自由基对培养细胞损伤作用的实验观察

将不同浓度的H₂O₂与V79细胞共同孵育24、48h后,结果显示SOD活性下降,LPO含量增加,细胞内GPT、GOT、LDH和CPK酶活性升高,其变化程度与培养时间和H₂O₂浓度成正比.     

温度条件对染色体损伤修复的影响

细胞内DNA修复系统的正常工作是生物 得以生存并准确无误遗传繁衍的一个重要因 素,而修复过程的错误乃是突变发生的主要原 因。对大肠杆菌的研究证实DNA在复杂的复 制过程中自发或诱发地产生许多错误,而这些 错误最终没有形成损伤则归于各种修复过程中 酶的正常工作。一旦缺少它们,突变株就将 增加［[221。对人皮肤成纤维细胞研究发现,如 果某一修复系统缺失或被抑制,将很快导致癌 变〔1 ,9 ,10 .1370 DNA 修复系统主要包括光修复、切除修 复、重组修复、SOS修复（错误修复）、链交连修 复系统及适应性修复系统等。每一修复系统都 有若干酶参与并在细胞周期的一定时期内对一 定类型的染色体损伤进行修复。例如：人体中 常见的切除修复系统有DNA内切酶、外切酶、 多聚酶、连接酶参与,在细胞的Go, G1, G2期对 DNA的单链损伤进行识别、切割、合成、连接。 其中只要一个酶失活或受到抑制,整个修复系 统便无法正常工作。 在突变育种中,扩大突变谱提高突变率十 分重要。为此,(1)可用不同的理化因子诱发 提高DNA损伤的类型和程度,使SOS修复系 统启动,由错误修复导致突变。(2)改变修复 期环境,抑制修复酶正常活力,使DNA损伤无 法正常被修复产生突变。用某些化学物质抑制 植物修复系统中某些酶的活力,使染色体畸变 率和后代突变率增加已有报道(4,15,16,183。在哺乳 动物培养细胞中,通过升温处理可使辐射所诱 发的伤害增加[12,17,211,并抑制细胞修复,使死亡 细胞增加[11.1970 我们认为改变修复期的环境条 件,如温度、pH值、氧含量等,可能影响修复酶 的活性,导致突变率改变。本实验证实当DNA 损伤水平相同时,仅改变修复期温度,便可使细 胞突变率出现差异显著。     

中国仓鼠肺细胞系的细胞及染色体扫描电镜观察

扫描电镜近年在生物和医学领域已广泛应 用,为生物形态结构尤其为立体（或三维）结构 的研究开辟了新的领域。目前对细胞表面结构 的观察已做了大量的工作《sup》[1,3-12,但对染色体表 面结构的观察报道尚不多^[2,11]。为了进一步研 究细胞及其染色体的表面形态结构,我们对自 己建立的中国仓鼠(Cricetulus griseus）肺细胞系 （简称CH-CL）的细胞及其染色体进行了扫描 电镜的初步观察。     

小檗碱对动脉粥样硬化性损伤的保护作用

目的:探讨小檗碱对动脉粥样硬化损伤的保护作用。方法:将56只大鼠,随机分为对照组(C),高脂饮食假手术组(HD),肾动脉狭窄组(RAS),肾动脉狭窄高脂饮食组(HD+RAS)。C及RAS组给予正常饮食,HD及HD+RAS组给予高脂饮食,RAS及HD+RAS组采用固定内径银夹夹左肾动脉。饲养12周,每组处死6只进行检测,剩余除C外每日灌胃小檗碱(150mg/kg),C予以等量生理盐水灌服,持续4周,四周后处死进行相同检测,用药前后结果进行对比评价小檗碱功能。结果:与C相比,HD,RAS,HD+RAS组肌酐显著升高(P<0.05),HD及HD+RAS组胆固醇明显升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)在HD,RAS及HD+RAS组显著降低(P<0.05),丙二醛(MDA)在HD,RAS及HD+RAS组显著增高(P<0.05),血管内皮生长因子VEGF在HC,RAS及HD+RAS组表达量升高。给予小檗碱灌胃处理后,检测指标各组间无统计学差异(P>0.05)。结论:小檗碱对动脉粥样硬化性损伤具有良好的保护作用。     

染色体乘客复合体对细胞有丝分裂的调控作用

染色体乘客复合体(CPC)是近年来处于细胞有丝分裂调控研究热点的一组蛋白分子,主要由Aurora B激酶、着丝粒中心蛋白(INCENP)、Survivin及Borealin/DasarB等蛋白分子组成。研究证实CPC在有丝分裂过程中扮演了重要的角色,涉及纺锤体形成、染色体排列、姊妹染色单体分离、纺锤体检查点信号及胞质分裂等多种重要功能的调节。本文重点阐述了CPC各组成蛋白功能特点、相互作用及对纺锤体检查点蛋白和微管蛋白的调节等方面的最新研究进展,同时阐明CPC组成蛋白作为抗癌药物研制靶标的潜在应用价值。     

小檗碱对动脉粥样硬化性损伤的保护作用

目的：探讨小檗碱对动脉粥样硬化损伤的保护作用。方法：将56只大鼠,随机分为对照组（C）,高脂饮食假手术组（HD）,肾动脉狭窄组（RAS）,肾动脉狭窄高脂饮食组（HD＋RAS）。C及RAS组给予正常饮食,HD及HD＋RAS组给予高脂饮食,RAS及HD＋RAS组采用固定内径银夹夹左肾动脉。饲养12周,每组处死6只进行检测,剩余除C外每日灌胃小檗碱（150mg/kg）,C予以等量生理盐水灌服,持续4周,四周后处死进行相同检测,用药前后结果进行对比评价小檗碱功能。结果：与C相比,HD,RAS,HD＋RAS组肌酐显著升高（P〈0.05）,HD及HD＋RAS组胆固醇明显升高（P〈0.05）,超氧化物歧化酶（SOD）在HD,RAS及HD＋RAS组显著降低（P〈0.05）,丙二醛（MDA）在HD,RAS及HD＋RAS组显著增高（P〈0.05）,血管内皮生长因子VEGF在HC,RAS及HD＋RAS组表达量升高。给予小檗碱灌胃处理后,检测指标各组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：小檗碱对动脉粥样硬化性损伤具有良好的保护作用。     

鱼类染色体的观察

在早春到市场上买性成熟的活雄鲤一条,取其精巢(性腺已发育到第Ⅳ期),做染色体的观察。 1.固定将精巢放入Carnoy固定液(无水酒精3份,冰醋酸1份),固定3小时,再换入70％酒精中。 2.染色用镊子和解剖针仔细取出精巢内的精细小管(细如白发),一小段,放手掌上剔去周围异物之后,放置载玻片上,加醋酸洋红(45％醋酸100毫升加洋红1克煮沸、冷却、过滤即成),染色2-3小时。     

甘紫菜的染色体观察

甘紫菜是我国海藻养殖的重要对象之一。搞清楚它的染色体数目和生活史中减数分裂的时期,这在理论上和实际应用上都有一定的意义。材料和方法:实验材料采集于青岛市栈桥附近的海边。所采集的新鲜材料用3:1的无水酒精和冰醋酸固定。用铁醋酸洋红和水合氯醛酸铁苏木精染色。对染色体分裂相较多,分散较好的标本,经酒精脱盖片,用油派胶(Euparal)封片。本研究的凭证标本保存在山东海洋学院遗传研究室。     

果蝇唾液腺细胞多线染色体观察实验的改进要点

(一)捕捉野生果蝇夏天,气候温暖,野生果蝇大量活动。取一只广口瓶,内盛腐烂水果或甜酒糟,瓶口罩上一层细纱布,在细纱布上用铅笔尖钻上直径为2—3毫米的圆孔数个,限制苍蝇进入,置于室内窗台上。过几天,就会有果蝇飞进瓶里取食,产卵、卵孵出白色的小幼虫。这种方法能使我们     

低剂量超软X射线对染色体的损伤效应

用‘'Coy一射线或深部治疗的X光机的“硬” X射线照射微生物及动植物,引起细胞染色体 的突变,并用于育种工作,这已成为常规的育种 手段。有关硬X射线引起的植物细胞染色体的 辐射损伤效应,报道甚多。而低剂E91_的X射线, 尤其是超软X射线的辐射染色体损伤效应,报 道却寥寥无几¹⁾。本工作利用上海新跃仪表厂 生产的DGX-4型软X射线机,铝靶、波长为 0.62-0.71入的X射线（根据这一波段范围应属 超软Y射线,见附表）照射洋葱(Allium cepa)和 蚕豆（Vicia faba）根尖,结果发现35kV, 30- 34mA,曝光1,5,10,20秒,都明显地导致了染 色体的辐射损伤效应,出现典型的细胞染色体 辐射损伤图象。用等剂量的胸透X射线、钨靶、 波长为0.21入,照射洋葱和蚕豆根尖,则不出 现或者很少出现染色体的损伤。超软X射线在 引起染色体损伤方面,明显地表现出特异性。     

低剂量超软X射线对染色体的损伤效应

用~(60)Coγ-射线或深部治疗的X光机的“硬”X射线照射微生物及动植物,引起细胞染色体的突变,并用于育种工作,这已成为常规的育种手段。有关硬X射线引起的植物细胞染色体的辐射损伤效应,报道甚多,而低剂量的X射线,尤其是超软X射线的辐射染色体损伤效应,报道却寥寥无几。本工作利用上海新跃仪表厂生产的DGX-4型软X射线机,钼靶、波长为0.62—0.71的X射线(根据这一波段范围应属     

竹节人参总皂苷对I/R损伤大鼠抗氧化作用的观察

目的：观察竹节人参总皂苷（tPJS）对I/R损伤大鼠的抗氧化作用。方法：SD大鼠灌胃给药15 d,采用双侧颈总动脉结扎法制备大鼠急性全脑缺血模型,测定脑组织含水量,制备脑匀浆测定脑组织乳酸脱氢酶（LDH）和脑超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果：tPJS可降低SD大鼠脑组织LDH活性,升高SOD活性,明显降低丙二醛（MDA）含量,降低缺血损伤后脑组织含水量。结论：tPJS对I/R损伤大鼠有明显的抗氧化作用。     

吴茱萸碱对黑色素瘤细胞的耐药逆转作用

黑色素瘤是目前恶性程度最高的肿瘤之一。临床上,常采用维罗非尼（PLX4032）作为晚期患者的治疗药物,但患者很快就出现了耐药。因此,如何克服耐药、提高患者生存率成为急需解决的问题。本文选用中药吴茱萸碱（EVO）与黑色素瘤A375细胞、对PLX4032耐药的A375细胞（A375/R）进行相关研究。采用CCK-8法检测发现,用EVO的细胞非毒性浓度0.5 μmol/L处理A375/R,PLX4032对A375/R细胞的半数抑制浓度（IC50）降低,逆转倍数为3.85。显示EVO能够增强黑色素瘤A375/R细胞对PLX4032的敏感性。后续实验分为对照组、EVO组、PLX组、PLX + EVO组。流式细胞仪检测结果显示,EVO组细胞凋亡率为5.88%,PLX组细胞凋亡率为17.88%,PLX + EVO组细胞凋亡率为30.28%。细胞集落结果证明,PLX4032联合EVO能够抑制A375/R细胞的克隆形成。免疫印迹法结果证明,联合用药能够上调促凋亡蛋白质Bax、胱天蛋白酶3的表达量,下调p-Akt、p-NF-κB-p65及抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白质水平。以上结果均表明,EVO能够有效逆转黑色素瘤A375/R细胞耐药,并且诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

吴茱萸碱对黑色素瘤细胞的耐药逆转作用

黑色素瘤是目前恶性程度最高的肿瘤之一。临床上,常采用维罗非尼（PLX4032）作为晚期患者的治疗药物,但患者很快就出现了耐药。因此,如何克服耐药、提高患者生存率成为急需解决的问题。本文选用中药吴茱萸碱（EVO）与黑色素瘤A375细胞、对PLX4032耐药的A375细胞（A375/R）进行相关研究。采用CCK-8法检测发现,用EVO的细胞非毒性浓度0.5 μmol/L处理A375/R,PLX4032对A375/R细胞的半数抑制浓度（IC50）降低,逆转倍数为3.85。显示EVO能够增强黑色素瘤A375/R细胞对PLX4032的敏感性。后续实验分为对照组、EVO组、PLX组、PLX + EVO组。流式细胞仪检测结果显示,EVO组细胞凋亡率为5.88%,PLX组细胞凋亡率为17.88%,PLX + EVO组细胞凋亡率为30.28%。细胞集落结果证明,PLX4032联合EVO能够抑制A375/R细胞的克隆形成。免疫印迹法结果证明,联合用药能够上调促凋亡蛋白质Bax、胱天蛋白酶3的表达量,下调p-Akt、p-NF-κB-p65及抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白质水平。以上结果均表明,EVO能够有效逆转黑色素瘤A375/R细胞耐药,并且诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。