神经母细胞瘤免疫治疗研究进展

神经母细胞瘤是最常见的儿童肿瘤疾病之一,对患者及其家属来了巨大的精神痛苦和经济损失,传统治疗方法对该疾病的预前及术后都效果极差,对该肿瘤的治疗一直是医学界研究的热点和难点。免疫治疗近年来在肿瘤疾病治疗中体现出来的有效、安全、毒副作用小等特点越来越引起临床科学界的重视,科学家对通过免疫疗法治愈神经母细胞瘤的研究进展迅速,并已经取得部分有效的治疗性研究结果,值得进行综述,但目前尚未有对该方面研究的综述出现。本文就近年来神经母细胞瘤治疗研究的热点——免疫逃逸的机理研究、神经母细胞瘤疫苗、免疫类药物开发等进行综述。可以预见,未来神经母细胞瘤免疫治疗的前景广阔,也将有越来越多的针对神经母细胞瘤的商品化免疫性药物、肿瘤疫苗出现,这些药物将对该疾病的治疗具有显著的疗效。     

Let-7a下调k-Ras和c-Myc癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

目的：MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现,1et-7a 在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过程中,let-7a扮演着不可替代的角色。本文主要研究let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因,寻求肾癌新的治疗途径有重要意义。方法：应用化学合成的let-7a 模拟物（mimics）用脂质体Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染786-O 和Caki-1肾癌细胞株,转染48 小时后采用荧光定量RT-PCR的方法检测let-7a 及c-Myc、k-Ras mRNA的表达情况,Western blot 检测这两株肾癌细胞转染了let-7a mimics 后c-Myc 及k-Ras 蛋白的表达变化;转染let-7a mimics 后分别在24、48、72 小时三个时间点用CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。结果：786-O 和Caki-1 肾癌细胞株中let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞株HK-2（P〈0.05）; 转染了let-7amimics的786-O 和Caki-1 肾癌细胞株,RT-PCR 及Western blot 结果显示c-Myc、k-Ras 在基因及蛋白的表达水平明显下调（P〈0.05）;CCK-8 检测结果显示转染了let-7a mimics的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制,与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异,let-7a 通过调控c-Myc、k-Ras的表达能抑制肾癌细胞增殖。Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的一种有效治疗手段。     

let-7 microRNA调控动物器官发育的研究进展

微小RNA（microRNA,miRNA）是一类在进化上高度保守、长度约20～24 nt的小分子非编码RNA,能通过与靶基因3′非翻译区相结合从而抑制靶基因的翻译或降解靶基因。let-7 microRNA是发现较早的一类miRNA,最早在线虫中发现能调控细胞分裂的时序。此后大量证据表明,let-7参与动物多个器官发育的调控过程,并与人类疾病发生密切相关。该文综述了近年来let-7调控动物脑、神经及心肺系统等器官发育的研究成果,初步阐述了let-7调控动物器官发育可能的作用机制,以期为深入研究let-7的功能奠定基础。     

Let-7a 下调 k-Ras 和 c-Myc 癌基因的表达抑制肾癌细胞增殖

摘要 目的： MicroRNA 是近年发现的一类单链小分子 RNA, 对它的研究已成为一个新的热点。最近的研究发现, 1et-7a 在细胞内 影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用, 尤其是在肿瘤的发展过程中, let-7a 扮演着不可替代的角色。本文主 要研究 let-7a 在肾癌细胞株中的表达情况及其调控的靶基因、 抑制细胞增殖的机制,对探索肾癌的致病基因, 寻求肾癌新的治疗 途径有重要意义。 方法： 应用化学合成的 let-7a 拟物（ mimics ）用脂质体 Lipofectamine 2000 在体外瞬时转染 786-O 和 Caki-1 肾 癌细胞株, 转染 48 小时后采用荧光定量 RT-PCR 的方法检测 let-7a 及 c-Myc、 k-Ras mRNA 的表达情况, Western blot 检测这两株 肾癌细胞转染了 let-7a mimics 后 c-Myc 及 k-Ras 蛋白的表达变化;转染 let-7a mimics 后分别在 24、 48、 72 小时三个时间点用 CCK-8 试剂盒检测对肾癌细胞株增殖的影响。 结果： 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株中 let-7a 的表达量明显低于正常肾小管上皮细胞 株 HK-2 （P<0.05 ） ; 转染了 let-7amimics 的 786-O 和 Caki-1 肾癌细胞株, RT-PCR 及 Western blot 结果显示 c-Myc、 k-Ras 在基因及 蛋白的表达水平明显下调 （P<0.05 ） ; CCK-8 检测结果显示转染了 let-7a mimics 的肾癌细胞株细胞增殖能力明显明显受到抑制, 与 阴性对照组比较差异有统计学意义 （P<0.05 ）。结论： Let-7a 在在肿瘤细胞与正常细胞中存在明显差异, let-7a 通过调控 c-Myc、 k-Ras 的表达能抑制肾癌细胞增殖。 Let-7a mimics 可以抑制肾癌细胞的增殖,因此上调 Let-7a 的表达有可能成为肾癌基因治疗的 一种有效治疗手段。     

LIN28/let-7信号通路与肿瘤发生发展的关系

Let-7家族是最古老而保守的micro RNAs(mi RNAs)之一,由于它在许多肿瘤中表达下降或缺失,故被认为是肿瘤抑制因子。LIN28是一种高度保守的RNA结合蛋白,在多种恶性肿瘤中过度表达,通过抑制let-7而发挥致癌功能。目前认为,LIN28/let-7通路与恶性肿瘤发生发展密切相关,因此深入研究LIN28/let-7信号通路的调控机制将为恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的策略。     

N-myc 蛋白和非编码RNA在神经母细胞瘤中的研究进展

神经母细胞瘤是儿童外周神经系统的肿瘤。在近20%的神经母细胞瘤病例中发现有原癌基因MYCN的扩增和过表达现 象。近几年发现MYCN基因编码的N-myc 蛋白,不仅能够调控多种非编码RNA 的表达,而且也受非编码RNA的调控。miRNA 是在神经母细胞瘤中研究最广泛的非编码RNA,近年来研究发现N-myc 蛋白对于绝大部分miRNA 起抑制作用,如mir-184、 mir-542-5p 等,仅对少数miRNA起诱导表达的作用,如mir-17-92 基因簇、mir-9、mir-421 等。N-myc 蛋白不仅对miRNA 的表达起 调节作用,而且也调控其它lncRNA 的表达,如T-UCR、NDM29、linc00467、MALAT1。有趣的是,N-myc 蛋白和miRNA 之间的作 用是相互的,它们可以双向调节,其调控网络也是复杂的。miRNA 能够靶向MYCN,同时MYCN也能够调控miRNA。该文对神 经母细胞瘤中N-myc蛋白和非编码RNA 间的相互影响,以及两者之间的关系对神经母细胞瘤的发生有何作用作一综述。     

鲤脾脏高丰度micoRNA let-7a序列特征、组织表达及功能预测分析

先前研究表明let-7a为鲤(Cyprinus carpio)脾脏高丰度miRNA, 但其功能尚不清楚。为全面了解鲤let-7a的潜在生物学功能, 研究分析了其成熟序列特征、组织表达谱和靶基因富集情况。结果显示, let-7a在鲤脾脏中存在序列长度变异和碱基替换, 长度为18—25 nt, 碱基替换类型有9种, 种子区序列碱基替换率达2.1%。表达谱分析表明, let-7a为广泛性高丰度miRNA, 具明显的时序表达特征, 其在鳃、肠、脾脏和肾脏等免疫相关器官中的表达水平明显高于其他器官。GO富集分析显示, let-7a与转录调控、细胞刺激应答、离子转运、跨膜运输、蛋白质氨基酸磷酸化和细胞迁移等生物学过程密切相关, 尤其是靶基因GO term在刺激应答相关的许多生物学过程显著富集。总之, 鲤let-7a可广泛参与多种生物学过程调控, 尤其是机体各种刺激应答。     

Let-7a在哮喘T淋巴细胞失衡中的作用研究

目的:探讨let-7a在哮喘中的表达水平及调节T淋巴细胞亚群失衡的功能作用。方法:收集39例哮喘患者及19例非哮喘对照,Real-time PCR检测let-7a的表达。从哮喘患者外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分选Th1,Th2和Th17细胞,检测let-7a在T淋巴细胞亚群中的表达。磁珠分选naive T细胞,分别诱导分化成Th1、Th2和Th17细胞,分析let-7a在T淋巴细胞亚群中的表达。Let-7a mimic分别转染Th2和Th17细胞,ELISA检测IL-13和IL-17的表达。结果:与对照组比较,let-7a在哮喘患者肺组织和血清中低表达,并随着哮喘病程进展,let-7a的表达水平也越低。哮喘患者来源的CD4~+T细胞中,let-7a表达明显低于非哮喘对照组。Let-7a在哮喘来源和体外刺激分化的哮喘炎性Th2和Th17细胞中的表达明显下调,而在Th1细胞中的表达没有变化。Let-7a mimic改变了Th2和Th17相关细胞因子IL-13和IL-17的表达。结论:Let-7a在哮喘中低表达,调节哮喘T淋巴细胞亚群失衡,改变了Th2和Th17细胞的功能,是哮喘理想的诊断和治疗靶点。     

抗GD2 抗体疗法用于高危神经母细胞瘤治疗的研究进展

高危神经母细胞瘤是幼儿及青少年中高发型恶性疾病,为胚胎性肿瘤,其表面高度表达神经节苷脂GD2,故GD2 成为此类恶疾的治疗靶标。在过去几十年中,抗GD2 抗体疗法用于神经母细胞瘤的治疗研究取得了巨大进展,其安全性和有效性得到了充分验证。简介GD2 的生物合成、结构与功能,综述用于神经母细胞瘤的抗GD2 抗体疗法及其有效性的提高策略。     

应用蛋白质组学技术筛选胃癌SGC-7901细胞中的let-7a功能相关蛋白

为探讨let-7a表达下调在胃癌发病中的机制,高通量地检测了与let-7a功能相关的蛋白质.首先采用基因克隆技术稳定过表达SGC-7901细胞系的let-7a基因,然后用蛋白质组学技术研究稳定过表达该基因对SGC-7901细胞蛋白质表达谱的影响.通过对SGC-7901/let-7a细胞的蛋白质表达谱改变的研究,并用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定了10个差异表达蛋白质.这些差异表达蛋白质可能是let-7a功能相关蛋白质,其中抗氧化蛋白2、胰岛素样生长因子结合蛋白2、二硫化蛋白异构酶A2、四氢叶酸合成酶、细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Rho-GTPsae激活蛋白4表达上调,Skp2蛋白、血小板黏附蛋白CD41、纤维连接蛋白、Cks1蛋白表达下调.部分差异表达蛋白质如细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白1、Skp2蛋白和纤维连接蛋白经蛋白质印迹分析进行了验证.在SGC-7901/let-7a中鉴定的10个差异表达蛋白质涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏附、细胞代谢等众多事件,它们可能作为let-7a功能相关蛋白质,为阐明let-7a表达下调在胃癌发病中的机制提供了重要线索.     

5-氨基γ-酮戊酸及其己酯衍生物对几种细胞株的光动力作用

5 氨基γ 酮戊 (ALA)及其己酯 (He ALA)具有内源生成光敏剂的特点 ,在肿瘤光动力探测及治疗中显示出了优势。ALA及He ALA对神经母细胞瘤、肝癌细胞及成纤维细胞的光动力作用被研究比较。由特征荧光光谱证实 ,经ALA或He ALA培养后 ,三种细胞内均可生成原卟啉 (PpIX)产物。激光扫描荧光显微镜显示 ,在经ALA或He ALA培养后的神经母细胞瘤中 ,PpIX均以弥散方式分布在细胞质中。PpIX在三种细胞中的积聚动力学过程不同 ,随着ALA或He ALA培育时间的增长 ,PpIX在肝癌细胞及成纤维原细胞中的积累增加 ,而在神经母细胞瘤中PpIX在 8h后已达到饱和。此外 ,在同样的培育条件下 ,神经母细胞瘤中PpIX的生成浓度明显高于肝癌细胞及成纤维细胞。经ALA培养及光照射后 ,可使近 90 %的神经母细胞瘤失活 ;而在同样条件下却只能杀伤 5 0 %左右的肝癌细胞及成纤维细胞。揭示了神经母细胞瘤对ALA光动力作用有极高的敏感性 ,并适于光动力治疗。与ALA相比 ,He ALA可在三种细胞内造成与ALA相近的杀伤率 ,但所用的药物浓度却比ALA低 10倍 ,显示He ALA具有极高的光动力灭活效率。因此在内源光动力治疗中 ,He ALA是一种极具开发前景的新药物。     

过表达Lin28a/Lin28b对let-7家族活性的影响

研究在HeLaS3细胞中过表达Lin28a/Lin28b对let-7家族miRNA表达水平和活性的影响。首先,构建Lin28a和Lin28b的表达载体pAAV2neo-Lin28a和pAAV2neo-Lin28b,分别转染HeLaS3细胞并筛选获得Lin28a和Lin28b的稳定表达细胞株HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b。然后,以pAAV2neo-Gluc-(Fluc)为基本骨架,构建并获得检测let-7家族miRNA活性的8种质粒型载体,并包装为相应的重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV),作为检测miRNA靶序列介导的转录后抑制活性的传感器,命名为Asensor。在此基础上,以HeLaS3细胞为对照,用Western blot检测HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b细胞中Lin28a和Lin28b表达水平,用QRT-PCR测定let-7家族各成员表达水平,用Asensor检测let-7家族各成员活性。Western blot结果显示,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a和HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b均能有效地表达Lin28a和Lin28b蛋白;QRT-PCR检测结果显示,相比于HeLaS3细胞,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a细胞中let-7家族各成员表达水平都下降(除let-7e外),但不同成员下降幅度存在差异;Asensor检测结果显示,let-7家族所有成员活性水平都下降,但不同成员下降幅度也存在差异,且同一成员活性水平与表达水平及其下降趋势也不一致。相比于HeLaS3细胞,HeLaS3/pAAV2neo-Lin28b细胞中let-7家族成员的表达和活性水平均明显下降,但表达水平的下降幅度比HeLaS3/pAAV2neo-Lin28a细胞大,而活性的下降幅度却与之相近。本研究建立了一种检测和比较miRNA靶序列介导的转录后抑制活性的方法,首次研究了过表达Lin28a和Lin28b对细胞中的let-7家族miRNA活性影响,并发现Lin28a和Lin28b对let-7家族miRNA表达水平的影响和对其相应活性的影响不一致性,说明在检测miRNA表达水平的同时检测miRNA活性能更全面揭示miRNA的调节功能,为进一步研究let-7家族的调控机制奠定了基础。     

靶向铁死亡增强胶质母细胞瘤的辐射敏感性

胶质母细胞瘤是一种高度恶性的脑肿瘤,具有快速生长、广泛浸润、高致死率的特点。放射治疗是利用电离辐射杀伤肿瘤细胞作为治疗胶质母细胞瘤的重要手段。由于胶质瘤患者五年生存率极低,因此迫切需要一些新的有效治疗策略。近年来,铁死亡作为一种新型的调节性细胞死亡方式,在胶质母细胞瘤的治疗中发挥了重要作用。已有研究揭示了铁死亡的关键过程,包括细胞内铁蓄积、活性氧产生、脂质过氧化、谷胱甘肽过氧化物酶4和胱氨酸-谷氨酸反向转运体活性抑制。研究表明,辐射可以通过产生活性氧、抑制抗氧化系统信号轴、耗竭谷胱甘肽、上调酰基辅酶A合成酶长链家族成员4以及诱导自噬来触发铁死亡。在放射治疗中可通过诱导铁超载、破坏抗氧化系统和线粒体功能等途径靶向铁死亡来增强胶质母细胞瘤的辐射敏感性。靶向铁死亡的辐射增敏治疗策略在胶质瘤的治疗中具有重要的潜在价值。本文综述了铁死亡及其发生机制,分析辐射诱导铁死亡的分子机理,介绍了调控铁死亡在提高胶质母细胞瘤放疗敏感性方面的应用和挑战,可为改善胶质母细胞瘤的治疗现状提供参考。     

抗神经节苷脂GD2抗体药物的研究现状

神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见的颅外实体肿瘤,其中高危NB患儿在接受化疗、放疗和手术等联合治疗后仍有约40％因复发而死亡.近年来,随着免疫治疗研究的不断深入,以抗神经节苷脂GD2抗体(anti-ganglioside GD2 antibody,简称抗GD2抗体)药物为基础的免疫治疗已成为高...     

YKL-40在脑胶质母细胞瘤微环境中的作用

胶质母细胞瘤是大脑及其他中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,其复杂的肿瘤微环境是胶质母细胞瘤临床治疗的主要挑战,也是胶质母细胞瘤患者复发率高、生存率低的主要原因。YKL-40,这一分泌性蛋白质与多种类型的癌症预后不良相关,且在高级别胶质瘤尤其是胶质母细胞瘤患者中血清水平与肿瘤组织表达水平显著升高,而在低级别胶质瘤中并未发现这一特征。这提示,YKL-40与胶质瘤分级及胶质母细胞瘤恶性发展过程密切相关。针对YKL-40的抗体治疗也被证明能够与电离辐射协同抑制胶质母细胞瘤血管生成及恶性发展。基于YKL-40的临床价值,本文将从肿瘤微环境的角度,归纳总结YKL-40在恶性肿瘤中的相关研究成果,并讨论其在胶质母细胞瘤发生发展中的相关作用及临床应用前景。     

miR-124a、let-7表达与胃癌临床病理特征和化疗疗效的相关性

目的:探讨外周血miR-124a和let-7的表达与胃癌临床病理特征和化疗疗效的相关性。方法:选取2013年1月～2017年3月在我院接受化疗的晚期胃癌患者为研究对象,所有患者入院后均择期行XELOX方案(奥沙利铂+卡培他滨)化疗。化疗前后,采用实时荧光定量PCR检测患者外周血miR-124a和let-7表达,分析其与患者临床病理特征的关系。根据化疗疗效将患者分为疾病控制组和疾病进展组,分析外周血miR-124a和let-7表达与化疗疗效的关系。结果:外周血miR-124a和let-7表达与肿瘤大小、分化程度、TNM分期和淋巴转移有关(P0.05)。肿瘤≥3 cm、中低分化、TNM分期Ⅳ期和有淋巴转移的患者外周血miR-124a和let-7表达量更低。与化疗前比较,化疗后患者外周血miR-124a和let-7相对表达量显著增加,差异均有统计学意义(P0.05)。95例患者,CR 0例(0.0%),PR 12例(12.6%),SD 20例(21.1%),PD 63例(66.3%),ORR为12.6%,DCR为33.7%。疾病控制组化疗后外周血miR-124a和let-7相对表达量明显高于疾病进展组,差异均有统计学意义(P0.05)。Spearman秩相关分析显示外周血miR-124a和let-7相对表达量与化疗疗效呈正相关(rs=0.613、0.574,均P0.05)。结论:晚期胃癌患者外周血miR-124a和let-7的表达与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴转移和化疗疗效相关。     

基于通用荧光标签的microRNA芯片检测平台

microRNA（miRNA）是一类生物内源性非编码小RNA分子,在细胞的生长、发育、增殖和细胞凋亡中具有重要的调控作用,并且与癌症的发生息息相关. miRNA表达谱是miRNA研究中的一个关键环节,使用芯片技术分析miRNA表达谱通常要求对miRNA样品进行耗时耗力的荧光标记,并且常规的芯片技术难以精确识别高度同源的miRNAs分子. 为了解决以上问题,本实验室建立了一个被命名为SHUT（Stacking-hybridized Universal Tag）的新型非标记miRNA芯片分析方法. 本文通过分别使用两步杂交法、一步杂交法对SHUT平台的miRNAs特异性检测进行优化. 研究结果表明,SHUT平台在48℃下杂交18 h,除了let-7b和P-let-7c,let-7c和P-let-7a分别存在超过32.5%和83.3%的假阳性信号之外,其它交叉杂交信号都低于10%,具有较好的特异性. 在该杂交条件下,靶标分子let-7d的最低检测浓度为20 fmol/L,并且在20 fmol/L至200 pmol/L之间具有较好的线性关系.     

儿童胸腔内巨大肿瘤12例分析

目的:总结儿童胸腔内巨大肿瘤的临床特点与外科治疗方式。方法:回顾性分析12例儿童胸腔内巨大肿瘤患儿的临床、病理学资料,外科处理过程,并对治疗效果进行随访。结果:4例前纵隔肿瘤中2例为梭形细胞瘤,另2例来源于胸腺,分别为良性畸胎瘤和恶性神经鞘瘤,肿瘤均被完整切除;5例后纵隔肿瘤均作肿块切除,最终病理结果4例为神经母细胞瘤,1例为神经节细胞瘤;2例术前诊断为肺肿瘤的患者中,1例作了右全肺切除,1例作右肺中下叶切除,病理报告均为胸膜肺母细胞瘤;1例术前诊断为胸腔内巨大肿块患儿行肿块切除后病理报告为间叶性软骨肉瘤。结论:手术指征、手术径路的把握及术后管理决定了胸腔内巨大肿瘤患儿的治疗效果。     

《癌细胞》：新发现神经母细胞瘤相关基因

德国研究人员发现了一种参与细胞分裂的基因,该基因与神经母细胞瘤（neuroblastoma）有关,研究结果为研制相关治疗药物提供了新方法。相关论文发表在《癌细胞》上。     

MiRNA在特发性肺纤维化中的作用

近年来研究发现微RNA（microRNA,miRNA）与机体人部分生理、病理过程均有密切关系,如：组织的发育和分化、组织再生、病毒防御以及细胞增殖与凋亡等。miRNA在特发性肺纤维化（IPF）中的作用也日渐为研究者所重视,在IPF中有些miRNA上调（如miR-155、miR-21）,有些下调（如let-7、miR-29、miR-200）。这一发现为寻找IPF治疗方法提供了一个新的突破口。本文对近年来miRNA在IPF中作用的研究进展进行了综述,并对miRNA-21、let-7d、miRNA-155、miRNA-29以及miRNA-200在肺纤维化中的作用分别进行了阐述,为研究miRNA征IPF中的作用及机制提供一定参考。