相转化水凝胶微针的制备和处方优化

目的:考察分子量为4 k Da的透明质酸,羧甲基纤维素钠对相转化水凝胶微针的影响以及对药物体外释放的影响。方法:制备含有不同浓度透明质酸或羧甲基纤维素钠的微针,利用显微镜观察微针的外观形态,用高效液相色谱法检测药物的体外释放,并用统计分析软件检测体外释放率的差异性。结果:含有透明质酸的微针出现相分离现象,体外释放24 h,释放率为55%左右;羧甲基纤维素钠的微针未出现相分离现象,体外释放24 h,释放率能达到60%左右,两种微针在3 h和24 h时体外释放率无显著性差异,在12 h时有显著性差异(P0.05)。结论:透明质酸与聚乙烯醇混合易出现相分离现象,可应用于微针的浓度范围较窄,羧甲基纤维素钠微针不易出现相分离现象。在12 h体外释放方面,含有羧甲基纤维素钠的微针处方优于含有透明质酸的微针处方,但是哪一种辅料更优还需要进一步的实验验证。     

溶液黏度对相转化水凝胶微针制备的影响

目的:选择黏度适宜的高分子溶液,制备相转化水凝胶微针。方法:通过考察两种型号的聚乙烯醇本身的黏度性质、溶液温度、几种不同性质的高分子材料,包括透明质酸、预胶化淀粉等可能影响聚乙烯醇溶液黏度的因素,使用粘度计测定其黏度值并作图比较,观察溶液黏度变化的规律。将所制溶液分别制备微针以观察针形的好坏,选择合适制备相转化水凝胶微针的溶液黏度范围。结果:实验表明黏度范围在2.5万至13万m Pa·s之间的聚合物溶液较为粘稠且流动性适宜。结论:在该黏度范围内的聚合物溶液可用以制备相转化水凝胶微针,适用于工业化生产。     

透明质酸微针经皮递送胰岛素智能给药系统用于糖尿病治疗

本研究通过共沉淀法制备了胰岛素(insulin,INS)/Ca₃PO₄复合物和葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOx)/Cu₃(PO₄)₂复合物,得到的矿化胰岛素(mineralized insulin,m-INS)呈现不规则结晶团簇状,矿化葡萄糖氧化酶(m-Gox)呈花球状形貌,直径约1–2 μm。体外模拟释放实验表明,m-INS会随介质pH值降低而释放出INS,pH为4.5时其释放量达到96.68%;酶活力检测实验表明m-GOx的酶活力稳定性高于游离的GOx,在室温放置10 d后仍保持较高活力,而GOx活力小于60%。通过配制葡萄糖溶液模拟正常血糖(5.6 mmol/L)和高血糖(22.2 mmol/L)状态,在葡萄糖溶液中加入m-INS和m-GOx,INS的释放量呈现显著的葡萄糖浓度依赖性,即葡萄糖浓度越高,INS释放量和释放速率越大。最后,将m-INS、m-GOx与透明质酸(hyaluronic acid,HA)溶液混合,制备负载m-INS和m-GOx的HA微针阵列,构建1型糖尿病模型鼠,通过微针给药的方式评估载药HA微针对糖尿病大鼠的血糖控制效果。结果表明：负载m-INS/m-GOx的HA微针能有效递送药物,糖尿病大鼠的平均血糖浓度在1 h内下降到约7 mmol/L,并能维持10 h的正常血糖,使血糖浓度低于给药前水平长达36 h。与仅负载INS的HA微针相比,m-INS微针具有更好的葡萄糖耐受性、更持久的控糖效果和更小的低血糖风险。相对于其他的缓释系统,本研究中的核心成分制备流程简单、效率高和安全有效,具备较大的商业化潜力。     

透明质酸的制备及应用研究进展

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是一种高分子量的直链酸性粘多糖。由于其具有特殊的生理作用、独特的流变学性质和极强的持水保湿能力,在化妆品工业、医学研究、临床治疗等领域有着广泛的应用。概述了透明质酸的制备及其在化妆品、保健食品和医药方面的应用研究进展。     

透明质酸的制备与鉴定

透明质酸是一种酸性粘多糖,其特有的粘弹性和保湿性已被用于医药与化妆品的生产中。本文以黄牛眼睛为材料,通过提取,除杂质、有机溶剂沉淀等步骤进行透明质酸的制备,并对其性质进行鉴定,表明用此方法制备的透明质酸基本达到了市场的要求,而且此工艺简单,成本低廉。     

由透明质酸发酵液制备高纯度透明质酸的方法

为简化由透明质酸发酵液制备高纯度透明质酸的过程,本实验利用氯苯除去菌体,由乙醇分离得到透明质酸提取物,向提取物中加入由4.2 g/L碳酸氢钠和5.3 g/L碳酸钠以体积比为45:5组成的水溶液及胰蛋白酶进行水解.水解后所得分离物在磷酸二氢钠含量为0.45 g/L,磷酸氢二钠含量为0.05 g/L及氯化钠含量为11.6 g/L的水溶液中溶解,向其中加入3倍体积的95%乙醇,得到沉淀,绝干的沉淀物中透明质酸质量比为98.9%.随后,经活性炭以及透析处理.最终透明质酸质量比为99.996%,相对分子量5.8×105.总回收率96.17%.     

聚四氟乙烯微针模具的性能考察

目的:考察用聚四氟乙烯(PTFE)制作相转化水凝胶微针模具的性能。方法:聚四氟乙烯模具经过粉末的过筛、压制、烧结、制孔而得。实验制备了不同聚四氟乙烯粉料粒度、不聚四氟乙烯粉料用料量、不同生料板压制压力的聚四氟乙烯微针模具,向模具中浇注以PVA为基质的聚合物溶液,通过冷冻解冻制得相转化水凝胶微针,考察模具的孔径、载料量以及微针的揭膜难易程度和完形率。结果:80目以上细度的模具透光性能均一;随着聚四氟乙烯用料量的增加和生料板压制压力的增大,模具的孔径和载药量减小,揭膜更容易、完形率更高。结论:聚四氟乙烯模具的性能与其密度密切相关,密度越大的模具,蠕变的随意性越大,因而孔洞均一性下降,但是揭膜性能变好,完形率提高。这两个相反的趋势提示我们,四氟乙烯模具的优劣是相转化水凝胶微针中的第一个控制性因素,聚四氟乙烯是制作微针模具的可接受材料,有进一步研究的价值。     

浅议透明质酸发酵条件的优化

现阶段透明质酸已广泛应用于化妆品、美容行业、保健食品、医药等很多领域。国内市场及国际市场得扩展速度都非常快,随之而来的透明质酸的市场竞争也日趋激烈。因此,为了满足国内日益增长的市场需求,我国应大力发展微生物发酵法制备透明质酸的技术,选育高产菌种,完善发酵工艺,以提高工业化的产量与质量。为进一步提高兽疫链球菌透明质酸的产量,优化其发酵条件,采用15L-30L×3的发酵系统进行试验。     

基于壳聚糖的搭载光源可溶性微针的制备与评价

光动力疗法与给药微针(microneedle, MN)相结合为治疗肿瘤提供了一种安全有效的途径。本文设计了一种基于壳聚糖搭载高能光子的可控缓释型载药微针贴片(LED-losartan-HEMA/ CS-MN, LLH-CSMN),重点研究了其制备工艺,并且以氯沙坦为模型药物对微针阵列的形貌尺寸进行了表征,探究了LLH-CSMN的力学性能、皮肤穿刺性能、缓释性能以及高能光子在长时间工作下的光热性能。结果表明,基于壳聚糖搭载高能光子的微针贴片能够有效地在皮肤表面打开通道进行药物递送,并进行光动力治疗。同时,体外透皮扩散试验表明,以氯沙坦为模型药物制备的微针在1 h内释放了约30%的药物,在1 d内总共释放了约60%的药物,随后进行缓慢释放,在6 d后最终释放了93%的药物,LLH-CSMN具有可控缓释特性以及良好的长效光辅助治疗效果,为肿瘤治疗提供了一个新的安全有效途径。     

透明质酸产生菌的选育及发酵培养基的优化

将实验室保存UVD-34透明质酸产生菌再进行超声波处理,挑选出了一株透明质酸产量较高的菌,并对其发酵培养基进行初步优化。结果表明当可溶性淀粉质量分数为2%,复合氮源为3%,碳酸氢钠为0.1%时,其透明质酸的产量可达4.59 g.L-1,比优化前提高了1.29倍。该突变株值得进一步研究。     

透明质酸及其衍生物研究进展

透明质酸是一种以葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺为双糖单位交替连接而成的黏多糖。由于其具有独特的分子结构和理化性质,已被成功应用于化妆品、医学美容、眼科手术、关节炎治疗等。对最近几年国内外透明质酸及其衍生物,尤其是海洋生物来源的透明质酸的制备以及将不同分子质量的透明质酸作为新型药用载体及其他方面的研究进展进行了综述。     

基因工程技术优化透明质酸生产的研究进展

透明质酸是由葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺组成的双糖单位聚合而成的直链酸性粘多糖,在医药、化妆品、食品等领域拥有庞大的市场。传统研究通过优化发酵参数改善透明质酸的生产虽然取得了显著成效,但也趋于上限,加之天然生产菌株固有的发酵培养基成本高、具有一定致病性等等的劣势也日益显著。随着分子生物学技术的迅速发展以及对透明质酸合成相关基因研究的不断深入,研究重点逐渐转向利用基因工程技术构建高产、安全、具有特定分子量的透明质酸工程菌株。以下就有关透明质酸生产菌株基因工程改造的策略及研究进展进行概述和展望。     

在兽疫链球菌中表达vgb基因和HA合成基因提高透明质酸产量

透明质酸(HA)是一种在医药及化妆品领域具有广泛应用的天然粘多糖。兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)是工业上生产透明质酸的菌种之一。透明颤菌血红蛋白(VHb)具有增强细胞摄氧的作用。对生产透明质酸的兽疫链球菌进行了基因改造:将兽疫链球菌HA的合成基因hasABC以及合成透明颤菌血红蛋白的vgb基因(Vitreoscillahemoglobingene,vgb)分别或同时插入阳性菌表达质粒pEU308中,通过电转化导入兽疫链球菌中。通过一氧化碳(CO)差光谱检测到了VHb的表达。在摇瓶实验中,同时带有hasABC和vgb基因的重组菌比野生菌的透明质酸产量提高了30％。而在发酵罐中,带有这2个基因的重组菌的透明质酸产量达到了6．9g／L,高于重组菌5．5g／L的产量。实验结果表明,vgb基因的存在促进了细胞的生长,hasABC操纵子的过表达增强了透明质酸的合成。首次将VHb导入兽疫链球菌中,获得了表达,并证明其对菌体生长及透明质酸合成有促进作用。通过研究,VHb将可以在阳性菌中获得更广泛的应用。     

Hyaluronic Acid Degradation by Ascorbic Acid and Influence of Iron

The effects of ascorbic acid, iron and ADP on hyaluronic acid, a compound present in inflamed joints, were investigated in an in vitro system. Ascorbic acid induces degradation of hyaluronic acid which increased in the presence of FeCl, and which is additionally stimulated by ADP chelated ferric ions. The hyaluronic acid degrading reactions induced by the Fe-III/ADP/ascorbic acid system were inhibited by catalase and formate to various extents whereas the presence of superoxide dismutase did not exert any inhibitory effect. Desferrioxamine, a specific iron chelator, completely inhibited hyaluronic acid depolymerisation by ascorbic acid as well as in combination with FeCl₃ or FeCl₃/ADP, respectively. We suggest that the ultimate hyaluronic acid degrading species is OH', generated via the Fe-III/ADP catalysed Haber Weiss reaction. There is also an indication for the involvement of perferryl or/and ferryl species in the degradation process.     

Hyaluronic Acid Degradation by Ascorbic Acid and Influence of Iron

The effects of ascorbic acid, iron and ADP on hyaluronic acid, a compound present in inflamed joints, were investigated in an in vitro system. Ascorbic acid induces degradation of hyaluronic acid which increased in the presence of FeCl, and which is additionally stimulated by ADP chelated ferric ions. The hyaluronic acid degrading reactions induced by the Fe-III/ADP/ascorbic acid system were inhibited by catalase and formate to various extents whereas the presence of superoxide dismutase did not exert any inhibitory effect. Desferrioxamine, a specific iron chelator, completely inhibited hyaluronic acid depolymerisation by ascorbic acid as well as in combination with FeCl₃ or FeCl₃/ADP, respectively. We suggest that the ultimate hyaluronic acid degrading species is OH', generated via the Fe-III/ADP catalysed Haber Weiss reaction. There is also an indication for the involvement of perferryl or/and ferryl species in the degradation process.     

Interaction of Hyaluronectin with Hyaluronic Acid Oligosaccharides

Hyaluronic acid was digested by bovine testicular hyaluronidase, and oligomers were fractionated by gel permeation using AcA 202 Ultrogel, an acrylamide-agarose matrix. Oligosaccharides composed of from two to six disaccharide repeating units were isolated. Two nonasaccharides were prepared by enzymatic or chemical modification of the decasaccharide. Oligosaccharides were compared by a competitive inhibition in the enzyme-linked immunosorbent assay for their ability to inhibit the interaction of hyaluronectin (a hyaluronic acid-binding brain glycoprotein) with hyaluronic acid. Among these oligosaccharides, decasaccharides were the smallest fragments that strongly inhibited the interaction. Octasaccharides inhibited with 700-fold lower affinity than decasaccharides. Dodecasaccharides had the same effect as decasaccharides. Nonasaccharides obtained by beta-glucuronidase splitting of decasaccharides inhibited the interaction more than nonasaccharides prepared by an alkaline treatment.     

不同组织来源透明质酸的分离纯化及其鉴定

以猪牛眼玻璃体、鸡冠、人脐带为原料,利用水浸提,乙醇沉淀的方法,提取透明质酸粗品,经ＤＥＡＥ－纤维素纯化,获得高纯度的透明质酸．经测定,其蛋白含量０．３８％～０．６３％,分子量７．９×１０~４～４．７×１０~５,收率０．６４％～２．４％,红外扫描图谱与文献报道一致     

The Effects of Hyaluronic Acid on Macrophage FC Receptor Binding and Phagocytosis Are Independent of the Mode of Depolymerization

In order to determine whether exposure of hyaluronic acid to oxygen radicals caused an alteration in its properties. independent of the change in molecular weight induced. we examined its effect upon macro-phage Fc receptor binding. High molecular weight hyaluronic acid (Healon-Pharmacia) caused a dose dependent inhibition of binding between the concentrations of 0.2–1 mg/ml. At a concentration of 0.3 mg/ml both oxygen radical depolymerized and enzymatically degraded hyaluronic acid caused an inhibition of Fc receptor binding at molecular weights of 1 × 10⁶. 1.5 × 10⁶ and 2 × 10⁶. Oxygen radical degraded hyaluronic acid caused a stimulation of Fc receptor binding at molecular weights of 2 × 10⁵ and 3.5 × 10⁵. and enzyme degraded hyaluronic acid causes stimulation at a molecular weight of 2.5 × 10⁶. Thus this “biological property” of hyaluronic acid is dependent upon molecular weight solely and not upon the mode of depolymerization.     

高效测定发酵液中透明质酸含量的改良CTAB浊度法

透明质酸（HA）在保健品、化妆品及临床医疗等领域都具有重要应用,发酵法是HA生产的主要方法。发酵液中HA含量的快速、准确测定对于HA的生产具有重要意义。在原始十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）浊度法测量HA浓度的基础上,提出了去除HA与乙酸缓冲液混合后的水浴步骤、降低CTAB试剂浓度（2.5 g/L）以及确定HA-CTAB络合反应时间（5 min）的改良CTAB法。进一步研究了发酵液各成分对改良CTAB方法的干扰,结果表明,葡萄糖、阿拉伯糖、D 葡萄糖酸前体等对CTAB浊度法没有干扰,但Mg2+等具有较为明显的干扰。通过冰乙醇沉淀与改良CTAB浊度法的耦合,实现了发酵液中HA含量的高效测定。