MiR-378a-5p直接靶ZEB1向上调鼻咽癌CNE-1细胞E-cadherin表达*

目的： Mir-378a-5p是一种被发现多年的微小RNA,其在包括肺癌、结肠癌和乳腺癌等多种肿瘤中都被认为具有抑制肿瘤生 长的作用。Mir-378a-5p与细胞增殖的关系在多篇文章中已经有较为详细的阐述,然而,目前没有报道提及miR-378a-5p是否通过 作用于细胞迁移和细胞粘附途径从而达到抑制肿瘤生长的作用。方法与结果：在本研究中,我们通过wound healing 和trans-well 的方法发现在鼻咽癌细胞CNE-1 中过表达miR-378a-5p显著的抑制了细胞迁移以及细胞浸润的过程。通过免疫印迹方法,我们 揭示了细胞粘附因子E-cadherin在过表达miR-378a-5p后显著上调。通过生物信息学的方法,我们预测了miR-378a-5p的可能作 用靶点,并通过双荧光报告载体的方法证实了ZEB1是miR-378a-5p的直接靶点。结论：我们的研究提示了miR-378a-5p造成的E-cadherin 的上调是通过直接抑制E-cadherin的负调控因子ZEB1造成的。E-cadherin的上调不但影响了细胞的迁移和粘附,而且 通过间接阻断Wnt通路抑制了下游控制细胞增殖的基因表达。本研究为理解miR-378a-5p的肿瘤抑制作用提供了一个新的作用 机理。     

MiR-378a-5p抑制鼻咽癌细胞系CNE-1细胞增殖以及肿瘤生长的初步研究（英文）

目的:MiR-378a-5p是一种被认为在多种肿瘤发生过程中具有抑制肿瘤生长的微小RNA。然而miR-378a-5p在鼻咽癌中的作用尚未见报道。因此,本文旨在通过临床样本的miRNA表达谱分析以及细胞学实验从而揭示miR-378a-5p在鼻咽癌肿瘤发生过程中的作用。方法与结果:我们通过生物信息学的方法获取了鼻咽癌临床样本中miR-378a-5p的表达信息并通过与正常组织的对比发现miR-378a-5p在鼻咽癌肿瘤组织中表达水平显著降低(P0.01)。其次,我们发现高表达miR-378a-5p的鼻咽癌CNE-1细胞增殖速度显著较对照组降低(约40%~50%)。克隆形成实验证实了瞬时转染miR-378a-5p的鼻咽癌CNE-1细胞的克隆形成数量显著减弱。我们通过将稳定表达miR-378a-5p的CNE-1细胞注射到裸鼠体内形成移植瘤并记录肿瘤生长曲线,结果显示miR-378a-5p高表达组的裸鼠移植瘤体积明显较对照组小约50%,肿瘤重量显著降低(对照组0.33 g,处理组0.15 g)。结论:本研究通过对临床样本的分析以及在细胞和动物水平的实验验证揭示了miR-378a-5p具有抑制鼻咽癌肿瘤细胞增殖和肿瘤生长的作用。     

Mir-378a-5p抑制鼻咽癌细胞系CNE-1 细胞增殖以及肿瘤生长的初步研究*

目的： MiR-378a-5p是一种被认为在多种肿瘤发生过程中具有抑制肿瘤生长的微小RNA。然而miR-378a-5p在鼻咽癌中的 作用尚未见报道。因此,本文旨在通过临床样本的miRNA 表达谱分析以及细胞学实验从而揭示miR-378a-5p在鼻咽癌肿瘤发生过程中的作用。方法与结果：我们通过生物信息学的方法获取了鼻咽癌临床样本中miR-378a-5p的表达信息并通过与正常组织的 对比发现miR-378a-5p在鼻咽癌肿瘤组织中表达水平显著降低（P<0.01）。其次,我们发现高表达miR-378a-5p的鼻咽癌CNE-1 细 胞增殖速度显著较对照组降低（约40%~50%）。克隆形成实验证实了瞬时转染miR-378a-5p的鼻咽癌CNE-1 细胞的克隆形成数 量显著减弱。我们通过将稳定表达miR-378a-5p的CNE-1 细胞注射到裸鼠体内形成移植瘤并记录肿瘤生长曲线,结果显示 miR-378a-5p高表达组的裸鼠移植瘤体积明显较对照组小约50%,肿瘤重量显著降低(对照组0.33 g,处理组0.15 g)。结论：本研究通过对临床样本的分析以及在细胞和动物水平的实验验证揭示了miR-378a-5p具有抑制鼻咽癌肿瘤细胞增殖和肿瘤生长的作用。     

microRNA-708-5p对骨肉瘤细胞凋亡与迁移的作用及机制

该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达;通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p;分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测凋亡和迁移;通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc?nger E-box binding homeobox 1)的RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达;利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调,恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示,过表达miR-708-5p可上调E-cadherin,下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且通过靶向ZEB1来抑制迁移。     

miR-125a-3p调控人结肠癌细胞浸润转移的作用及机制研究

目的:探讨miR-125a-3p在结肠癌细胞浸润与转移中的作用及其可能机制。方法:通过qRT-PCR方法检测miR-125a-3p在结肠癌细胞及组织样本中的表达;在结肠癌细胞过表达或沉默miR-125a-3p后,通过平板克隆实验、MTT实验、划痕实验、Transwell实验检测结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的变化;采用Western blot方法检测miR-125a-3p过表达后相关标志分子的表达水平变化情况。结果:miR-125a-3p在结肠癌细胞及组织呈现异常低表达;过表达miR-125a-3p抑制结肠癌细胞HCT116及SW480的增殖能力;过表达或沉默miR-125a-3p分别抑制或增强结肠癌细胞的迁移与侵袭能力;过表达miR-125a-3p在mRNA及蛋白水平均能够显著抑制Snail、N-cadherin及Vimentin的表达,而增加E-cadherin的表达。结论:miR-125a-3p参与调节结肠癌细胞浸润与转移,其机制可能是通过调控上皮间质转化途径介导的。     

miR-125a-5p通过靶向调控GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移能力

miR-125a-5p可负性调节GAB2表达,抑制胶质瘤细胞的侵袭和转移。本研究旨在证明miR-125a-5p抑癌作用的普遍性,即miR-125a-5p是否可通过靶向抑制GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移。荧光素酶实验结果显示,miR-125a-5p可特异识别GAB2的3′-UTR,抑制报告酶的表达。荧光定量PCR结果揭示,与正常乳腺上皮细胞MCF-10A比较,miR-125a-5p在乳腺癌细胞MDA231和MCF-7中的表达明显降低;与迁移能力相对较低的MCF-7细胞比较,miR-125a-5p在迁移能力较高的MDA231细胞中的表达量更低。Western 印迹结果证明,与空载体（对照）和anti-miR125a 5p转染细胞比较,转染miR-125a-5p明显抑制GAB2蛋白在乳腺癌细胞中的表达。Transwell结果显示,与空载体转染的对照细胞比较,转染miR-125a-5p的乳腺癌细胞穿过基质胶的细胞数明显减少;相反,转染anti-miR125a-5p的细胞穿过基质胶的细胞数却明显增多。上述结果提示,miR-125a-5p在正常的乳腺细胞中高表达,而在乳腺癌细胞中低表达,其表达水平与癌细胞的迁移能力和GAB2表达呈反向关系。本研究结果还提示,miR-125a-5p通过靶向负调控GAB2抑制乳腺癌细胞的迁移能力。总之,本研究证明,miR-125a-5p在肿瘤中发挥抑癌作用。     

miR-19a-3p在前列腺癌细胞侵袭和迁移中的作用

miR-19a-3p通过多种机制调节癌细胞的增殖和转移,然而,miR-19a-3p在前列腺癌转移中的生物学作用和机制尚不清楚。本研究旨在考察mir-19a-3p在前列腺癌中的表达情况,及其对细胞侵袭和迁移的影响。本研究发现,miR-19a-3p在骨转移性前列腺癌组织和前列腺癌细胞中明显下调。上调miR-19a-3p可显著抑制前列腺癌细胞的侵袭和迁移。然而,下调miR-19a-3p则会逆转上述变化。此外,本研究还发现miR-19a-3p通过靶向TGF-β信号传导的下游效应物SMAD2来抑制前列腺癌细胞中TGF-β信号传导的活性,从而抑制前列腺癌细胞的侵袭和迁移。因此,本研究表明mir-19a-3p与前列腺癌的发生发展密切相关,mir-19a-3p有望成为前列腺癌的新治疗靶点及生物标志物。     

miR-34a-5p对三阴性乳腺癌细胞的影响及相关机制研究*

目的: 探讨miR-34a-5p在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中的表达,分析miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的作用,对TNBC荷瘤小鼠肿瘤生长的影响以及在TNBC中对B7-H1表达的影响。方法: 利用RT-qPCR、Western blot分析TNBC细胞中miR-34a-5p、B7-H1的表达,并利用Kaplan-Meier分析二者的表达与TNBC患者的生存关系;将miR-34a-5p转染TNBC细胞,通过CCK-8、流式细胞术及划痕实验检测miR-34a-5p对TNBC细胞增殖、凋亡、迁移的影响;利用RT-qPCR、Western blot检测miR-34a-5p、B7-H1表达水平的变化,双荧光素酶基因报告验证miR-34a-5p与B7-H1的相互作用;利用RT-qPCR、Western blot、IHC检测miR-34a-5p对MDA-MB-231荷瘤小鼠miR-34a、B7-H1表达的影响。结果: TNBC细胞中miR-34a-5p呈低表达,B7-H1呈高表达,二者均与TNBC患者的不良预后有关,差距具有统计学意义(P<0.01);miR-34a-5p抑制TNBC细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡,并且在TNBC细胞中靶向抑制B7-H1;miR-34a-5p agomir在体内抑制MDA-MB-231成瘤裸鼠的肿瘤生长和B7-H1表达。结论: miR-34a-5p在TNBC发生、发展中发挥着重要作用,靶向miR-34a-5p/B7-H1可能成为TNBC患者新的分子治疗策略。     

circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移

目的 鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA (circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法 通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果 在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论 circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实c...     

circTLK1通过调控miR-374a-5p表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

为探讨circTLK1对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及分子机制,该研究将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照(Con)组、高糖(HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circTLK1组、HG+miR-NC组、HG+miR-374a-5p组、HG+si-circTLK1+anti-miR-NC组、HG+si-circTLK1+anti-miR-374a-5p组。采用RT-qPCR检测circTLK1和miR-374a-5p的表达水平;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;MTT检测细胞增殖活性;Western blot法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证circTLK1和miR-374a-5p的靶向关系。结果显示,高糖诱导的肾小球系膜细胞中circTLK1、TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平及细胞活性升高,miR-374a-5p、p21表达水平降低(P0.05)。下调circTLK1表达或过表达miR-374a-5p,高糖诱导的肾小球系膜细胞中TNF-α、IL-6、CyclinD1表达水平和细胞活性降低,p21表达水平升高(P0.05)。circTLK1靶向调控miR-374a-5p;抑制miR-374a-5p表达逆转了下调circTLK1表达对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的作用。该研究得出,下调circTLK1表达可能通过上调miR-374a-5p抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。     

细胞周期蛋白依赖性激酶在miR-193a5p调控卵巢癌细胞增殖及上皮细胞间充质转变中的作用*

目的: 探讨miR-193a-5p靶向CDK14并调控卵巢癌细胞OVAC的增殖和上皮间充质转变(EMT)的作用。方法: 通过TargetScanHuman分析miR-193a-5p与CDK14的匹配情况,通过荧光素酶报告系统检测miR-193a-5p靶向CDK14情况;在miR-193a-5p mimics过表达或者miR-193a-5p inhibitor基因沉默miR-193a-5p的情况下,采用免疫印迹检测CDK14,EMT相关蛋白质E-cadherin、vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达量,采用CCK-8检测卵巢癌细胞OVAC增殖情况, MMT检测卵巢癌细胞OVAC的细胞活力。结果: miR-193a-5p靶向CDK14的3‘UTR;过表达miR-193a-5后, CDK14的表达下降,EMT相关蛋白质E-cadherin的表达上升,vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达下降,卵巢癌细胞OVAC的增殖和细胞活力均增加;同时,基因沉默miR-193a-5p后, CDK14的表达上升,EMT相关蛋白质E-cadherin的表达下降,vimentin、fibronectin和N-cadherin的表达量上升,卵巢癌细胞OVAC的增殖和细胞活力均减少。结论: miR-193a-5p通过靶向CDK14的3‘UTR降低卵巢癌细胞OVAC的增殖、细胞活力和EMT。     

MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响

miR-199a-5p是miRNAs家族的一员.为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(anti-sense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞.采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和Collagen Ⅰ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平.结果 表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和集落形成(P＜0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P＜0.01)、迁移能力(P＜0.01)和集落形成能力(P＜0.01)受到抑制.RT-qPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P＜0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达水平升高.以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖.     

抑制miR-130b-3p通过上调PTEN和灭活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路抑制膀胱癌细胞增殖

miR-130家族在癌的进展中发挥作用;然而,其家族成员在膀胱癌中的作用尚罕见报告。本研究证明,抑制miR-130家族成员miR-130b-3p表达促进PTEN表达,诱导细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。首先,我们采用微阵列对来自膀胱癌患者的4对膀胱癌和癌旁组织进行了miRNA和mRNA组学分析,发现miR-130b-3p和miR-106b-3p在膀胱癌组织高表达,而miR-99a-3p、miR-199a-5p和miR-145-3p低表达。RT-q PCR检测30对膀胱癌组织5种miRNA的表达与微阵列中的表达状况一致。此外,我们在mRNA组学分析中还发现,miR-130b-3p在膀胱癌组织的高表达与PTEN表达呈负相关。为此,在后续研究中集中探索了miR-130b-3p在膀胱癌中的作用及其作用机制。生物信息学及荧光素酶报告结果证明,miR-130b-3p可直接结合PTEN的3'-UTR,靶向抑制PTEN的表达。转染结合CCK-8、EDU、流式分析、划痕及Transwell小室实验显示,转染miR-130b-3p模拟物可明显促进膀胱癌T24细胞的增殖、迁移及侵袭能力;相反,转染miR-130b-3p抑制物可明显诱导T24细胞凋亡。鬼笔环肽染色揭示,转染miR-130b-3p模拟物可促进细胞骨架形成,而转染miR-130b-3p抑制物抑制细胞骨架形成。Western印迹证明,转染miR-130b-3p可下调PTEN在T24细胞的表达,上调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达;而转染miR-130b-3p抑制物上调PTEN的表达,下调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达。上述结果提示,miR-130b-3p通过抑制PTEN表达,激活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路,在膀胱癌中发挥癌基因样作用;相反,抑制miR-130b-3p可上调PTEN表达,抑制PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路的激活,诱导凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。我们的结果还提示,miR-130b-3p作为可能的临床标志物,对膀胱癌的诊断、靶向治疗具有潜在的应用价值。     

circGFRA1靶向miR-642a-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

该研究探讨了circGFRA1对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制。收集了39例RA患者的滑膜组织和39例膝关节创伤且无其他关节异常病史患者的滑膜组织(正常滑膜组织),qRT-PCR法检测组织中circGFRA1和miR-642a-5p表达情况。体外分离培养RASFs,分别转染circGFRA1小干扰RNA、miR-642a-5p模拟物,或共转染circGFRA1小干扰RNA与miR-642a-5p抑制剂后,CCK-8法、划痕实验、Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞中Ki-67、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证circGFRA1和miR-642a-5p的调控关系。结果显示,RA患者滑膜组织中circGFRA1表达水平较正常滑膜组织显著升高(P<0.05),miR-642a-5p较正常滑膜组织显著降低(P<0.05);下调circGFRA1或上调miR-642a-5p后,RASFs细胞D值、划痕愈合率、侵袭数及细胞中Ki-67、N-cadherin蛋...     

miR-193a-5p促进人胰腺癌细胞体外迁移和侵袭作用的研究

该研究主要探讨了微小核酸mi RNA-193a-5p对人胰腺癌细胞体外迁移和侵袭的促进作用及其机制。采用miR-193a-5p模拟物及mi R-193a-5p抑制剂分别上调和下调miR-193a-5p的表达;采用细胞划痕法和Transwell小室法检测mi R-193a-5p对细胞迁移和侵袭能力的影响;采用TargetScan 7.1数据库预测miR-193a-5p的靶基因;荧光素酶报告法验证miR-193a-5p的靶基因; Western blot和实时荧光定量PCR验证其表达结果。结果表明, miR-193a-5p可显著促进细胞的迁移和侵袭能力。TargetScan 7.1软件预测, Prox1可能为mi R-193a-5p的靶基因,荧光素酶报告实验显示, miR-193a-5p靶向Prox1基因的3′UTR区。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示, miR-193a-5p下调了Prox1的mRNA和蛋白水平的表达。研究结果揭示,在胰腺癌中高表达的miR-193a-5p通过下调Prox1,从而使胰腺癌细胞获得高的迁移和侵袭能力,促进胰腺癌的转移。     

骨髓间充质干细胞外泌体miR-190a-5p通过靶向KLF15抑制肺癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体miR-190a-5p对肺癌细胞的影响。方法:通过超速离心获得BMSCs外泌体,透射电镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(NTA)检测外泌体粒径,利用Western印迹检测外泌体上的标志蛋白CD63、CD9及HSP70;选取肺癌细胞系A549、LK79、H1975和HCC827,以及人正常上皮细胞BEAS-2B检测对比miR-190a-5p在这些细胞中和BMSCs衍生的外泌体(BMSC-exosome)中的表达量;双萤光素酶报告基因检测验证Krüppel样因子15(KLF15)是否为miR-190a-5p的靶基因;定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测miR-190a-5p对KLF15的表达调控;Transwell法检测外泌体对肺癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:BMSCs外泌体呈圆形,粒径集中在150～200 nm,标志蛋白CD63、CD9及HSP70阳性表达;BMSCs外泌体中miR-190a-5p的相对表达量均高于在4种肺癌细胞及正常肺细胞BEAS-2B中的表达;双萤光素酶报告基因检测KLF15是miR-190a-5p的靶基因;BMSCs外泌体与miR-190a-5p mimics均能使肺癌细胞中的miR-190a-5p含量升高,并抑制KLF15的mRNA和蛋白表达,从而抑制肺癌细胞迁移和侵袭。结论:BMSCs外泌体miR-190a-5p通过下调KLF15抑制肺癌细胞迁移和侵袭,为肺癌的诊断和治疗提供了新的思路。     

miR-34a-5p通过靶向醛缩酶A抑制肝癌细胞的增殖和迁移

[目的]证明醛缩酶A(ALDOA)在肝癌细胞的增殖和迁移作用并探索miR-34a-5p靶向调控ALDOA的分子机制,为肝癌治疗提供潜在的分子靶标。[方法]分子生物学技术构建了ALDOA表达质粒,蛋白质印迹(Western Blotting)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ALDOA的过表达和敲降效果,CCK-8验证细胞的增殖,划痕实验验证细胞的迁移。[结果]在肝癌细胞中过表达ALDOA能促进肝癌细胞的增殖与迁移(P 0.05),敲降ALDOA后肝癌细胞的增殖与迁移受到抑制(P 0.05),miR-34a-5p是通过靶向结合ALDOA的3'UTR抑制其表达从而抑制肝癌细胞的增殖与迁移(P 0.05)。[结论]miR-34a-5p通过靶向ALDOA抑制肝癌细胞的增殖和迁移。     

miR-138-5p靶向缺氧诱导因子1α对胰腺癌PANC-1细胞生长和转移的调节作用

目的探索miR-138-5p对胰腺癌细胞PANC-1生长、转移的影响及其相关机制。方法应用荧光实时定量PCR (real-time quantitative PCR, RT-PCR)检测miR-138-5p及其缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α)在PANC-1细胞中的表达。应用荧光素酶报告检测验证miR-138-5p与HIF-1α之间的生物学关系。通过体外试验研究miR-138-5p、HIF-1α在PANC-1细胞中的生物学功能,Western blot检测蛋白表达情况;CCK-8检测PANC-1细胞增殖能力;Transwell试验检测PANC-1细胞侵袭能力;划痕试验检测PANC-1细胞迁移能力。结果 miR-138-5p表达明显下调HIF-1α表达水平(P<0.01),生物信息学预测和荧光素酶报告试验证明miR-138-5p通过直接结合HIF-1α 3′-未翻译区域(3′-UTR)抑制HIF-1α。在PANC-1细胞中,miR-138-5p过表达可抑制HIF-1α表达及细胞增殖、侵袭、迁移,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-138-5p结合HIF-1α 3′-UTR的沉默HIF-1α;miR-138-5p通过打靶HIF-1α而抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖和转移。HIF-1α可能是胰腺癌的治疗靶点。     

miR-199a-3p/Nme2在TGF-β1信号通路中的作用分析

通过microRNA芯片技术在小鼠GC-1 spg细胞中筛选发现microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)受转化生长因子TGF-β1调节。为了进一步探讨二者的关系,通过基因克隆与载体构建技术、双荧光素酶报告基因检测及定量PCR实验,发现miR-199a-3p靶向识别肿瘤转移抑制基因2(Nme2)的3'非编码区(UTR)序列,且正向调控Nme2的表达。利用TGF-β1处理GC-1 spg细胞后,结果显示Nme2和miR-199a-3p在mRNA水平的表达均显著上调;进一步将miR-199a-3p和TGF-β1双重作用于GC-1 spg细胞后,结果表明Nme2的表达会明显增强,而且在TGF-β1通路中,miR-199a-3p被抑制的部分功能可能会被Nme2补偿。综上,miR-199a-3p对Nme2基因具有直接靶向识别和调控作用,且在参与TGF-β1信号通路的生物学效应中,二者在功能上相互关联。     

环状RNA circMRPS35通过miR-130a-3p/ZNRF3轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

摘要 目的：探讨环状RNA MRPS35（circMRPS35）对胃癌（GC）细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调控机制。方法：体外培养人GC细胞系（HGC-27、MGC-803、MKN45和AGS）和正常胃上皮GES-1细胞,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circMRPS35、miR-130a-3p和锌环指蛋白3（ZNRF3）mRNA表达。另取MGC-803细胞,分为对照组、pc-NC组、pc-circMRPS35组、pc-circMRPS35+miR-NC组、pc-circMRPS35+miR-130a-3p组,采用Lipofectamine 3000进行质粒转染。RT-qPCR检测circMRPS35、miR-130a-3p和ZNRF3 mRNA表达,Western blot检测ZNRF3蛋白表达,CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,裸鼠移植瘤实验探究circMRPS35对GC细胞体内生长的影响。双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p与circMRPS35或ZNRF3的靶标关系。结果：GC细胞系中circMRPS35和ZNRF3 mRNA呈低表达,miR-130a-3p呈高表达（均P＜0.05）。过表达circMRPS35可降低miR-130a-3p,上调ZNRF3 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡（均P＜0.05）;circMRPS35过表达对GC细胞恶性行为和裸鼠移植瘤生长的抑制作用可被miR-130a-3p mimic逆转（P＜0.05）。双荧光素酶实验结果显示,过表达miR-130a-3p可降低circMRPS35-WT和ZNRF3-WT的荧光素酶活性（P＜0.05）。结论：circMRPS35可能通过miR-130a-3p/ZNRF3轴抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。