肝细胞癌中FHIT基因启动子甲基化状态分析及其与临床病理特征之间的关系研究

目的:分析肝细胞癌组织中FHIT基因启动子甲基化状态及其与FHIT基因表达和肝细胞癌临床病理特征的关系。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)方法分析肝细胞癌组织和癌旁正常肝脏组织中FHIT基因启动子甲基化状况;应用RT-PCT和Western免疫印迹方法检测FHIT基因mRNA和蛋白的表达情况;统计学分析FHIT基因启动子甲基化与肝细胞癌临床病理特征的关系。结果:MSP分析结果表明肝细胞癌组织中FHIT基因甲基化率(60.8%)显著高于癌旁正常组织中FHIT基因甲基化(16.2%;x2=31.071,P=0.000)。同时我们还发现:发生完全或者部分甲基化的肝细胞癌组织或者癌旁正常肝组织中FHIT基因mRNA和蛋白表达水平显著降低。FHIT基因启动子甲基化和肝细胞癌患者的临床分期和肝外转移情况密切相关(P=0.006和0.049),而与其他临床病理特征无相关性(P>0.05)。结论:FHIT基因甲基化是导致FHIT基因在肝细胞癌中失活的一个重要因素,与肝细胞癌的发生密切相关,有望成为肝细胞癌早期诊断的分子检测标志物和分子治疗新靶点。     

结肠癌组织RASSF1A基因转录表达和启动子区甲基化研究

目的:研究Ras相关区域家族1A基因(ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子区甲基化对结肠癌组织中该基因转录和表达的影响.方法:应用甲基化特异性PCR(Methylation-special PCR,MSP)、RT-PCR和Western blot方法检测30例结肠癌组织和癌旁组织中的RASSF1A基因启动子区甲基化状态、mRNA和蛋白表达水平.结果:①RASSF1A基因启动子区在结肠癌纽织和正常组织中的甲基化频率分别为57%(17/30)和20%(6/30),甲基化频率在两组具有统计学差异(p＜0.01),,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化频率显著高于癌旁正常组织(x2=8.531,p＜0.01);②结肠癌组织中RASSF1A基因mRNA和蛋白袁达均显著低于癌旁组织(癌组织和癌旁正常组织中mRNA相对表达量分别为0.2836±0.0493和0.5092±0.0433,P＜0.001;以上组织中蛋白相对表达量分别为0.3124±0.0472和0.5320±0.0440,P＜0.01);③在结肠癌组织中,甲基化组RASSF1A基因mRNA和蛋白表达明显低于非甲基化组(甲基化组和非甲基化组mRNA相对表达量分别为0.0686±0.0174和0.5511±0.0486,P＜0.0001;以上组中蛋白相对表达量分别为0.1219±0.0326和0.5614±0.0380,P＜0.0001).结论:结肠癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化明显增高,与该基因蛋白表达减少显著相关,这可能是导致结肠癌中RASSF1A抑癌基因失活的主要因为.     

非小细胞性肺癌患者Runx3基因启动子区甲基化状态研究

目的:分析非小细胞性肺癌(NSCLC)中Runx3基因启动子区甲基化状态.方法:运用甲基化特异性PCR技术检测62例NSCLC组织和癌旁正常肺组织中Runx3基因启动子甲基化,并分析该基因启动子甲基化Runx3基因mRNA和蛋白表达的影响及其与临床特征之间的关系.结果:NSCLC组织中Runx3基因异常甲基化率(48.4%)显著高于癌旁正常肺组织中Runx3基因的异常甲基化率(17.7%,P＝0.000);发生完全或者不完全甲基化的NSCLC组织或者正常肺组织中Runx3基因mRNA和蛋白表达显著降低.Runx3基因启动子区高甲基化和肿瘤分化程度及临床分期有相关性(P＝0.041和0.009),而与NSCLC患者性别、年龄、有无吸烟史及肿瘤类型等临床特征无关(P=0.400,0.301,0.290和0.965).结论:Runx3基因启动子区异常甲基化是导致Runx3基因在NSCLC中表达下调的重要因素,有望成为NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一.     

Fibulin3基因在非小细胞肺癌中的蛋白表达及甲基化检测

目的:检测Fibulin3基因在非小细胞肺癌患者(non-small cell hung cancer,NSCLC)组织中的表达和甲基化状态,并分析其临床病理意义.方法:收集59例NSCLC患者术后病理蜡块,进行免疫组化染色;提取癌组织及相应癌旁组织DNA,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测Fibulin3基因启动子区甲基化情况.结果:59例NSCLC标本中,25例(42.4%)Fibulin3表达水平比相应癌旁组织下调(P＜0.05);癌组织和相应癌旁组织甲基化22例和5例检出Fibulin3基因启动子区高甲基化,其阳性率分别为37.3%和8.5%,差异具有统计学意义(P＜0.001);Fibulin3启动子甲基化导致蛋白表达下调或缺失(P＜0.001),并与临床分期(P=0.035)及淋巴结转移(P=0.011)相关.结论:启动子甲基化引起的Fibulin3基因失活在NSCLC发生发展中起重要作用,Fibulin3启动子甲基化可能成为NSCLC早期诊断和预后评估的潜在标记物.     

结直肠癌COX-2表达及其与临床病理特征的相关性分析

目的:探讨结直肠癌环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达及其与临床病理特征的相关性。方法:选择2017年8月～2019年6月在本院外科手术诊治的结直肠癌患者60例,取所有患者的病灶组织标本与癌旁组织标本,采用PCR与免疫组化法检测COX-2 mRNA与蛋白表达情况,分析其与患者的临床病理特征的相关性。结果:直肠癌组织COX-2 mRNA与蛋白表达阳性率分别为63.3%和55.0%,显著高于癌旁组织的20.0%和16.7%(P0.05)。随着结直肠癌的病理分期及分化程度的增加、淋巴结转移的发生,直肠癌组织的COX-2 mRNA、蛋白表达阳性率显著升高(P0.05)。Spearman等级相关分析显示直肠癌组织的COX-2 mRNA、蛋白表达阳性率与临床分期、组织学分化与淋巴结转移都存在显著相关性(P0.05)。Cox模型多因素分析显示临床分期、组织学分化与淋巴结转移都是影响COX-2蛋白表达的主要因素(P0.05)。结论:结直肠癌COX-2的mRNA与蛋白都呈现高表达,与患者的临床分期、组织学分化与淋巴结转移显著相关。     

NF2基因甲基化及其mRNA表达与乳腺癌发病的关系

目的:探讨乳腺癌中NF2基因启动子甲基化状态及其mRNA水平与乳腺癌发病的关系.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测47例乳腺癌组织及相应的癌旁组织和15例乳腺良性病变组织,分析NF2基因的甲基化与某些临床参数及mRNA表达的关系.结果:NF2基因启动子区在乳腺癌、癌旁和乳腺良性病变组织中的甲基化频率分别为57.4%(27/47)、23.4%(23/47)和0%(0/15).且乳腺癌组明显高于其余两组(P＜0.05).NF2基因发生甲基化与发病年龄、组织分型、转移和组织分级无相关性.乳腺癌组NF2基因mRNA的相对表达量(0.16±0.11)明显低于相应的癌旁组(0.27±0.14)及乳腺良性病变组(0.64±0.17)(P＜0.05).NF2基因启动子区甲基化频率与其mRNA表达呈负相关(Spearman's r=-0.314,P＜0.05).结论:NF2基因发生甲基化与乳腺癌的发生密切相关,NF2mRNA表达与NF2基因启动子高甲基化呈负相关.     

原发性肝癌ATM基因启动子甲基化及其与放疗疗效的相关性

为探究原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)共济失调-毛细血管扩张突变基因(ataxia-telangiectasia mutated gene, ATM)启动子甲基化情况,分析其与临床特征的关系及与放疗疗效的相关性,采用甲基化特异性PCR法(methylation-specific PCR, MSP)检测50对肝癌手术标本及相应的癌旁肝组织标本、20例正常肝组织、38例局部中晚期肝癌肝穿刺标本的ATM基因启动子甲基化状态,并采用BSP (bisulfite sequencing PCR)测序法对样本的甲基化状态进行验证,分析ATM基因启动子甲基化状态与患者临床特征的关系及与放疗疗效的相关性。结果发现, 88例肝癌组织中ATM基因启动子甲基化率为39.8%(35/88),其中38例肝癌肝穿刺标本有42.1%(16/38)存在ATM基因启动子甲基化, 50例肝癌手术标本有38%(19/50)存在ATM基因启动子甲基化,相应癌旁肝组织只有8.0%(4/50)存在ATM基因启动子甲基化;正常肝组织未发现有ATM基因启动子甲基化, ATM基因启动子甲基化在肝癌组织中的发生率与癌旁肝组织、正常肝组织相比差异具有统计学意义(χ2=24.818,P0.05)。此外,存在ATM基因启动子甲基化的局部中晚期肝癌患者的放疗疗效显著优于无甲基化的病例(χ2=5.955,P=0.015), ATM基因启动子甲基化状态与肝癌放疗疗效呈显著正相关关系(r=0.396, P=0.014)。实验结果表明原发性肝癌ATM基因启动子存在异常甲基化, ATM基因启动子甲基化状态与肝癌放疗疗效关系密切,可为筛选放射敏感差异病人提供新的思路。     

结直肠癌患者血浆甲基化Sept9基因的表达及临床意义

目的:探讨甲基化Sept9基因在结直肠癌患者血浆中的表达及临床意义。方法:选择2015年1月~2017年3月经陕西省人民医院病理证实的结直肠癌患者87例(结直肠癌组)、结直肠息肉患者79例(结直肠息肉组)、健康体检者93例(健康对照组)作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测其外周血血浆Sept9基因甲基化情况,比较三组甲基化Sept9基因阳性表达率,分析甲基化Sept9基因阳性表达与结直肠癌病理特征的关系。结果:血浆甲基化Sept9基因在结直肠癌组、结直肠息肉组、健康对照组的阳性表达率分别为71.26%(62/87)、5.06%(4/79)、3.23%(3/93),差异有统计学意义(P0.05);血浆甲基化Sept9基因阳性表达与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、病理分型、血管侵犯、神经侵犯无关(P0.05),与肿瘤最大径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P0.05);结直肠癌患者血浆甲基化Sept9基因阳性表达率为71.26%(62/87),高于血清CEA的54.02%(47/87)、CA199的35.63%(31/87)、CA724的33.33%(29/87)、CA125的21.84%(19/87),差异有统计学意义(P0.05)。结论:结直肠癌患者外周血血浆甲基化Sept9基因呈高表达状态,早期检测甲基化Sept9基因表达水平在结直肠癌的诊断及病情评估中有重要意义。     

NF2基因甲基化及其mRNA表达与乳腺癌发病的关系(英文)

目的:探讨乳腺癌中NF2基因启动子甲基化状态及其mRNA水平与乳腺癌发病的关系。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测47例乳腺癌组织及相应的癌旁组织和15例乳腺良性病变组织,分析NF2基因的甲基化与某些临床参数及mRNA表达的关系。结果:NF2基因启动子区在乳腺癌、癌旁和乳腺良性病变组织中的甲基化频率分别为57.4%(27/47)、23.4%(23/47)和0%(0/15),且乳腺癌组明显高于其余两组(P<0.05)。NF2基因发生甲基化与发病年龄、组织分型、转移和组织分级无相关性。乳腺癌组NF2基因mRNA的相对表达量(0.16±0.11)明显低于相应的癌旁组(0.27±0.14)及乳腺良性病变组(0.64±0.17()P<0.05)。NF2基因启动子区甲基化频率与其mRNA表达呈负相关(Spearman’sr=-0.314,P<0.05)。结论:NF2基因发生甲基化与乳腺癌的发生密切相关,NF2mRNA表达与NF2基因启动子高甲基化呈负相关。     

艰难梭菌感染与大肠癌及大肠腺瘤的 相关性分析

目的分析艰难梭菌感染与大肠癌及大肠腺瘤的相关性,为临床预防及治疗肠道肿瘤提供新思路。方法收集2016年1月至2017年6月于甘肃省人民医院就诊的134例大肠癌患者、52例大肠腺瘤患者及100例健康对照者的粪便标本及临床资料,对粪便标本进行细胞毒性试验检测,分析大肠癌及大肠腺瘤与艰难梭菌感染的相关性。同时分析艰难梭菌感染与大肠癌临床特征及部分样本免疫组化(Her-2、P53、CDX2、CD56及Ki-67)结果的相关性。结果 (1)结直肠癌组检出13例艰难梭菌感染者(9.70%),大肠腺瘤组检出2例艰难梭菌感染者(3.85%),对照组未检出艰难梭菌感染者。结直肠癌组艰难梭菌感染率明显高于大肠腺瘤组及对照组(χ~2=11.0953,P0.05)。(2)艰难梭菌感染与结直肠癌病理分期具有相关性,其中Ⅰ、Ⅱ期共检出1例感染者(1.9%),Ⅲ、Ⅳ期共检出12例感染者(14.8%),二者差异有统计学意义(χ~2=3.8963,P0.05)。艰难梭菌感染与结直肠癌大体位置、大体形态、组织学分型、分化程度均无相关性(P0.05)。(3)CDX2的表达与艰难梭菌感染具有相关性,CDX2阴性结直肠癌患者艰难梭菌感染率明显高于CDX2阳性患者(20.8%vs 2.8%,χ~2=8.5224,P0.05);艰难梭菌感染与Her-2、P53、CD56及Ki-67之间无相关性(P0.05)。结论艰难梭菌感染与大肠癌的发生具有相关性,特别是与大肠癌病理分期及CDX2表达存在相关性。艰难梭菌感染与大肠腺瘤之间无显著相关性。     

肿瘤的免疫治疗

肿瘤抗原是肿瘤细胞使其具有免疫原性,能被免疫系统识别的标志物质.肿瘤抗原的发现是肿瘤疫苗发展的基础.肿瘤疫苗至今已有许多重大发展.同时,随着对肿瘤抗原的新认识,肿瘤疫苗的研究进入了新的阶段.     

大肠杆菌表达的乙型肝炎病毒核心抗原的某些理化特性

1979年Pasek等用大肠杆菌表达乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)成功以来,国内外也有类似的报道,但对其理化特性的报道不多。为了更有效地保存和应用此抗原,本文研究了从表达HBcAg的大肠杆菌菌液中纯化抗原的方法,以及抗原的某些特性。 HBcAg是由pHBV-1的C基因与pTL载体重组后在大肠杆菌BMH71-18内表达的,     

Structure and genetics of Shigella O antigens

This review covers the O antigens of the 46 serotypes of Shigella, but those of most Shigella flexneri are variants of one basic structure, leaving 34 Shigella distinct O antigens to review, together with their gene clusters. Several of the structures and gene clusters are reported for the first time and this is the first such group for which structures and DNA sequences have been determined for all O antigens. Shigella strains are in effect Escherichia coli with a specific mode of pathogenicity, and 18 of the 34 O antigens are also found in traditional E. coli. Three are very similar to E. coli O antigens and 13 are unique to Shigella strains. The O antigen of Shigella sonnei is quite atypical for E. coli and is thought to have transferred from Plesiomonas. The other 12 O antigens unique to Shigella strains have structures that are typical of E. coli, but there are considerably more anomalies in their gene clusters, probably reflecting recent modification of the structures. Having the complete set of structures and genes opens the way for experimental studies on the role of this diversity in pathogenicity.     

Thiophilic interaction chromatography of prostate-specific antigen

Prostate-specific antigen (PSA) protein and complexes of PSA with α₁-antichymotrypsin (PSA-ACT) or α₂-macroglobulin (PSA-A₂M) prepared in vitro, have strong affinity for different thiophilic gels (T-gel). Free PSA, and these PSA complexes can be isolated due to their affinity for T-gels. The average recovery of PSA from several of the T-gels, based upon ELISA measurements, was 84 to 94%. The data suggest that T-gel affinity can be explored for the purification of free and complexed PSA from various biologic fluids.     

Proteasome and class I antigen processing and presentation

The recent discovery of two proteasome homologous genes,LMP2 andLMP7, in the class II region of the human MHC, has implicated this multi-subunit protease in an early step of the immune response; the degradation of intracellular and viral proteins. Short peptides produced by the proteasome are transported into the ER by the product of another set of MHC class II genes,TAP1 andTAP2, where they bind and stabilise HLA class I molecules. Antigenic peptides displayed at the cell surface by HLA class I molecules mark cells for destruction by cytotoxic T lymphocytes. The role of the proteasome in antigen processing was questioned when mutant cells, which lack theLMP genes, were able to process and present antigens normally. The discovery that two proteasome -subunits, delta andMB1, highly homologous toLMP2 andLMP7 and expressed in reciprocal manner, is now consistent with a role for the proteasome in antigen processing. The incorporation of different -subunits into the proteasome may be a mechanism to modulate catalytic activity of the proteasome complex, allowing production of peptides that are more suitable to enter into the ER by the TAP transporters and to bind HLA class I molecules. But, in the absence of the LMPs, the other subunits permit processing of most antigens reasonably efficiently.Abbreviations ABC ATP-binding cassete - 2m 2-microglobulin - ER endoplasmic reticulum - IFN interferon - LMP low molecular weight peptide - MHC major histocompatibility complex - TAP transporter associated with antigen processing     

The human repertoire of antibody specificities against Thomsen-Friedenreich and Tn-carcinoma-associated antigens as defined by human monoclonal antibodies

Summary Human monoclonal antibodies specific for tumour-associated Thomsen-Friedenreich (TF) [Gal(1–3)GalNAc()-O-] and Tn [GalNAc()-O-] glycoproteins were prepared using peripheral blood lymphocytes from healthy blood donors. The B lymphocytes were either directly transformed with Epstein-Barr virus (EBV) or transformed after an in vitro stimulation period with synthetic glycoproteins. The EBV-transformed lymphocytes were subsequently fused with a mouse-human heteromyeloma to secure antibody production and stability. IgM antibodies exhibiting different patterns of specificity for synthetic TF and Tn antigens were obtained, including antibodies specific for the and forms of different Gal(1–3)GalNAc-O- and GalNAc-O- conjugates and antibodies agglutinating neuraminidase-treated erythrocytes. Several of the human monoclonal antibodies showed an increased binding to cultured carcinoma cells as compared to melanoma cells. This straightforward approach for the production of human monoclonal antibodies demonstrates the possibility of investigating the reactivity pattern of tumour-binding antibodies from peripheral blood lymphocytes. The binding patterns of these monoclonal antibodies show that healthy donors carry different fine specificities against synthetic TF/Tn antigens and that these antibodies react with different tumour cells.     

鼠疫亚单位疫苗研究进展

鼠疫 ,由于其强烈的传染性和极高的致死率 ,使得人们在应对它时 ,必须侧重于早期的防治。传统疫苗存在安全隐患 ,且存在效率低 ,接种反应率高以及不能保护人体免受肺鼠疫侵害等缺陷。近年来生物技术的迅速发展 ,为开展对鼠疫传统疫苗的改进和新疫苗的研究创造了条件 ,而这些研究当中 ,成果最为丰富的当属亚单位疫苗。目前鼠疫亚单位疫苗的研究大多围绕对鼠疫杆菌免疫原性起决定作用的两种主要抗原成分 (F1抗原和V抗原 )展开 ,按此研究方向浅谈其研究进展。     

胃癌患者血清CA125、CA724、CEA、CA199水平的表达及与临床病理特征的关系研究

目的:研究胃癌患者血清糖链抗原125(CA125)、糖链抗原724(CA724)、癌胚抗原(CEA)、糖链抗原199(CA199)水平的表达及与临床病理特征的关系。方法:选取2016年5月-2017年8月我院收治的胃癌患者94例记为胃癌组,胃部良性病变患者82例记为良性病变组,另取同期于我院接受体检的健康志愿者80例记为对照组。分别测定三组受试者血清CA125、CA724、CEA、CA199水平,并分析上述指标与胃癌患者临床病理特征的关系,并观察胃癌患者各指标单独检测和联合检测的阳性率。结果:三组受试者血清CA125、CA724、CEA、CA199水平整体比较差异有统计学意义(P0.05),胃癌组、良性病变组、对照组的血清CA125、CA724、CEA、CA199水平呈逐渐降低趋势,两两对比差异有统计学意义(P0.05)。不同性别的胃癌患者CA125、CA724、CEA、CA199水平比较差异无统计学意义(P0.05),年龄60岁、TNM分期为Ⅲ-Ⅳ期、肿瘤大小≥5 cm2的胃癌患者CA125、CA724、CEA、CA199水平均高于年龄≤60岁、TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期、肿瘤大小5 cm2的胃癌患者,差异有统计学意义(P0.05)。联合检测的胃癌阳性率高于CA125、CA724、CEA、CA199单独检测,且CA724单独检测高于CA125、CEA、CA199单独检测,差异有统计学意义(P0.05)。结论:胃癌患者血清CA125、CA724、CEA、CA199水平较高,与患者的年龄、TNM分期、肿瘤大小等因素有关,且联合检测的胃癌检出率较高,可为胃癌的早期诊断提供指导作用。     

紫杉醇联合卡铂治疗卵巢癌的临床疗效及对患者血清CA125、CA199、CEA水平的影响

目的:分析紫杉醇联合卡铂治疗卵巢癌的临床疗效及对患者血清糖类抗原125(CA125)、糖类抗原199(CA199)、癌胚抗原(CEA)水平的影响。方法:选择我院2014年1月～2016年12月收治的41例卵巢癌患者,按随机数字表法分为对照组(n=20)和研究组(n=21)。对照组给予紫杉醇联合顺铂治疗,研究组给予紫杉醇联合卡铂治疗。比较两组临床疗效,治疗前后血清CA125、CA199、CEA水平、卡氏评分的变化,不良反应的发生情况和生存情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组(P0.05);两组血清CA125、CA199及CEA水平均较治疗前明显下降,且研究组低于对照组(P0.05);研究组卡氏评分改善率高于对照组(P0.05),胃肠道反应、神经毒性损伤、骨髓抑制及血液系统毒性率反应发生率低于对照组(P0.05);两组1年生存率及中位生存期比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:紫杉醇联合卡铂治疗卵巢癌的疗效明显优于紫杉醇联合顺铂治疗,其能够降低患者血清CA125、CA199及CEA水平,改善患者生活质量。