NNK对NCTC 1469细胞毒性作用的研究

研究4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)对小鼠肝细胞NCTC 1469细胞的毒性作用。利用MTT比色法检测5个不同NNK浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/m L)对细胞的毒性作用;倒置相差显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测凋亡基因Bcl-2和Bax的表达。MTT显示,NNK能降低NCTC 1469细胞存活率,并呈剂量和时间依赖性。镜检结果可见细胞皱缩,密度降低;流式细胞仪检测显示,0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/m L的NNK作用24 h后凋亡率分别为(16.79±2.01)%、(26.87±1.67)%、(41.78±3.19)%、(50.89±3.94)%和(65.86±4.54)%,显著高于对照组(7.46±1.58)%;荧光定量PCR结果显示,随着NNK浓度的增加,Bcl-2 m RNA的表达减少,Bax m RNA的表达逐渐上升。NNK能够降低NCTC 1469细胞存活率并诱导其凋亡,作用呈剂量和时间依赖性。     

L929细胞镉中毒模型的建立

以L929细胞为研究对象,建立镉中毒体外模型,研究镉中毒对成纤维细胞生长发育的影响.本研究使用含有终浓度为100、50、25和5μmol·L-1氯化镉的DMEM培养基培养L929细胞,培养后0、6、12、24、36、48 h时分别观察细胞形态学变化,并应用MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法来测定细胞的活性,研究结果表明,与正常组比较,当镉浓度大于50 μmol·L-1时,细胞形态损伤严重,细胞活性明显下降(p＜0.01);当镉浓度为5 μmol·L-1时,细胞未出现明显损伤,细胞活性无统计学差异(p＞0.05);时间效应观察结果显示,当镉作用36 h以上,细胞出现严重损伤,较多细胞悬浮于细胞培养基中,细胞活性明显下降(p＜0.01).结果表明,镉的终浓度为25 μmol·L-1,与L929细胞共同作用24 h为建立镉中毒体外模型的最佳条件.     

四种口腔修复材料对细胞的毒性分析

目的:研究纯钛、钛合金、钴铬合金和镍铬合金四种非贵金属口腔修复材料对L-929成纤维细胞的毒性作用。方法:应用口腔修复材料制备材料浸提液处理培养L-929细胞,采用AnnexinV-FITC试剂盒比较细胞凋亡水平改变,采用Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:纯钛与钛合金诱导L-929细胞凋亡的水平与对照组没有统计学差异(P>0.05);钴铬合金和镍铬合金材料浸提液可引起L-929细胞凋亡增加(P<0.05)。结论:纯钛与钛合金材料对口腔黏膜细胞的毒性作用相较钴铬合金和镍铬合金材料低,更具安全性。     

重组人金属硫蛋白-Ⅲ对细胞和秀丽隐杆线虫毒性效应的研究

该文探索机体可能暴露剂量的重组人金属硫蛋白Ⅲ(rh-MT-Ⅲ)对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes,HaCaT)、小鼠成纤维细胞(L929)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabdities elegans,C.elegans)的毒性效应,并探究其安全剂量范围,为安全应用提供实验依据。以0、12.5、25、50、100和200 μg/mL rh-MT-Ⅲ对HaCaT细胞和L929细胞暴露24 h,检测其对细胞存活率、形态学变化、细胞膜损伤程度和细胞凋亡水平的影响;以0、5、50、500 μg/mL rh-MT-Ⅲ对L1期线虫暴露72 h,考察其对线虫存活率、运动行为(头部摆动和身体弯曲频率)、生长发育(体长和体宽)、摄食和排便行为的影响。结果显示,与对照组相比,两种细胞的存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶释放率及凋亡水平以及线虫各项检测指标,在研究剂量下均无统计学差异。这表明rh-MT-Ⅲ在0～200 μg/mL剂量时对HaCaT细胞和L929细胞无明显毒性效应;0～500 μg/mL对线虫无明显毒性效应。     

太子参快繁技术的优化及同源四倍体的诱导与鉴定

以太子参〔Pseudostellaria heterophylla(M iq.)Pax〕二倍体组培苗为实验材料,运用正交实验设计和组织培养方法,对太子参试管苗快速繁殖技术进行优化,并进行了同源四倍体的诱导与鉴定。结果表明,太子参最佳的繁殖培养基为含1.0 mg.L-16-BA和0.2 mg.L-1NAA的MS培养基;最佳生根培养基为含0.1 mg.L-1IAA、0.2mg.L-1NAA和1.0 mg.L-1ABT或0.2 mg.L-1IAA、0.2 mg.L-1NAA和1.0 mg.L-1ABT的1/2MS培养基。诱导同源四倍体的最佳处理方法为:用0.2%秋水仙素处理22 h或用0.3%秋水仙素处理12 h,所诱导的同源泉四倍体染色体数目为2n=4x=64条。     

甲醛导致细胞周期异常的浓度选择性

一定浓度的甲醛可以引起蛋白质的异常修饰、功能丧失、细胞死亡。虽然甲醛的细胞毒性已见报道,但甲醛影响神经细胞周期及其分子机制等尚不明确．本文采用不同浓度甲醛与神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y共孵育,观察到甲醛对细胞周期的影响取决于甲醛的浓度．当甲醛浓度([FA])≤0.1 mmol/L(细胞培养48 h),细胞周期与对照相比,无显著性差异．当甲醛浓度增加(0.1 mmol/L <[FA]≤0.2 mmol/L),S期和G2/M期细胞比例显著增加;当[FA] = 0.3 mmol/L时,细胞增殖被显著抑制,大量细胞滞留在S期(46.28%),G2/M期细胞仅占16.05%．将细胞同步到G2/M期,用0.1～0.3 mmol/L甲醛孵育,尽管G2/M期细胞都有一定程度的减少,但S期细胞显著增加;将细胞同步化到S期,与0.1 mmol/L甲醛孵育,则G2/M期细胞有一定程度的减少;与0.3 mmol/L甲醛孵育,表现为G2/M细胞显著减少,S期细胞极度增加．在相同条件下,Sprague-Dawley (SD)大鼠原代皮层神经元,也表现出G2/M期细胞比例随甲醛浓度升高而降低,S期细胞比例随之增加的现象．当0.1 mmol/L≤[FA]≤0.2 mmol/L时,细胞出现明显的早期或晚期凋亡;当[FA]≥0.3 mmol/L时,DNA损伤明显,细胞出现凋亡和部分坏死．以上结果提示,低浓度甲醛(0.1 mmol/L≤[FA]≤0.2 mmol/L)主要通过引起DNA超甲基化而抑制S期DNA的合成,高浓度甲醛([FA]≥0.3 mmol/L)则造成DNA的损伤,从而影响细胞周期的进程．     

MTT法评价医用骨科材料的细胞毒性

目的:评价三种常用医用骨科材料的细胞毒性。方法:通过制备表面阳极氧化钛合金(Ti-6Al-4V)材料、聚醚醚酮(PEEK)材料和β-磷酸三钙(β-TCP)材料的浸提液与L929细胞接触,进行MTT试验。结果:所有样品浸提液的细胞相对增殖率(RGR)均≥80%,细胞毒性反应分级为0至1级。结论:这三类材料的0.2g/ml浸提液均显示无明显的细胞毒性。     

顺铂诱导人宫颈癌细胞系P27表达及其超微弱发光测定的意义

目的:探讨化疗药物对肿瘤增殖活性的影响.方法:选择人宫颈癌细胞系Hela分为两组,分别采用MTT比色法分析测定顺铂处理Hela细胞的浓度;免疫组化SP法分别检测Hela细胞中P27蛋白表达;流式细胞仪分析加药前后细胞周期变化及凋亡情况;用IFFM-D型流动式化学发光仪检测细胞的超弱发光强度.结果:顺铂处理Hela细胞48h的IC50值为3mg/L,当DDP浓度,在3mg/L以下时,对Hela细胞无明显毒性作用,超过此浓度时,其毒性呈剂量效应关系(P<0.001);流式细胞仪分析细胞周期可见与Hela细胞相比较,Hela+DDP细胞的G2期细胞数增多,而G1,S期的细胞数明显减少(P<0.01);从细胞调亡检测显示Hela与Hela+DDP相比,细胞凋亡率在不同时间点明显升高,在24h,48h,72h结果分别为(11.4±5.8、21.8±7.9、32.5±11.6)%.免疫组化结果显示Hela+DDP与Hela细胞相比细胞膜上P27蛋白高表达;在10-4mol/L鲁米诺及0.3%的双氧水(H2O2)条件下Hela细胞超弱发光强度高于用Hela+DDP细胞9P<0.001).结论:超弱发光能够快速、准确、有效地反映肿瘤细胞氧化代谢特点和增殖活动,也可用于筛选敏感的化疗药物.     

新型战伤急救止血剂体外细胞毒性研究

目的:研究新型战伤急救止血剂的体外细胞毒性,初步探讨其用于战伤急救止血时的生物安全性.方法:参照我国医疗器械生物学评价标准,选用小鼠L929细胞,应用MTT法、直接接触培养法、流式细胞检测细胞凋亡法、扫描电镜直接观察细胞生长状况等检测新型战伤急救止血剂的细胞毒性.结果:新型战伤急救止血剂细胞毒性为0-1级,符合我国医疗器械评价标准毒性分级标准,各浓度组与阴性对照组无差异,P＞0.05;L929细胞与沸石直接接触生长良好,流式细胞仪检测细胞凋亡率与阴性对照组无差异;扫描电镜观察在沸石表面生长良好.结论:复合新型战伤急救止血剂细胞相容性良好,符合我国医疗器械安全性评价标准,是一种安全、高效、多功能的战伤止血剂.     

芦笋丛生芽增殖培养技术

本试验以芦笋新品种"津宁"为材料,探讨植物生长调节剂对不同外植体产生丛生芽的效应。试验结果表明,NAA、6-BA和KT三者配合使用有利于丛生芽的增殖:以茎尖为增殖外植体时,培养基用MS+NAA0.1 mg/L+6-BA0.2~0.3 mg/L+KT 0.1 mg/L,30 d时平均每瓶可以产生20.5个丛生芽;以茎中段为外植体时,培养基用MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3~0.4 mg/L+KT 0.1 mg/L,30 d时平均每瓶可产生33.5个丛生芽;以茎基为外植体时,培养基用MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3~0.5 mg/L+KT 0.1 mg/L,30 d时平均每瓶可以产生43.1个丛生芽。进行试管苗工厂化生产时,增殖外植体以茎基为最佳。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

太子参细胞悬浮培养及其皂苷含量分析

以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,并通过细胞悬浮培养获取皂苷.结果表明：用MS＋BA 0.2 mg L^-1＋2,4-D 1.0 mg L^-1＋KT 1.0 mgL^-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好.细胞悬浮培养约30 d时,每克干重细胞的培养液内可提取总皂苷量为2.13-2.92 mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量（3.6-4.3 mg）,与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近.     

G2-delay after irradiation with alpha-particles as studied in synchronized cultures and by the bromodeoxyuridine-33258H technique

Division delay of mouse L-929 fibroblasts after alpha-irradiation is due to a pronounced lengthening of their G2-phase. Experiments on synchronously and asynchronously growing cultures revealed a cell cycle phase-dependent sensitivity of this effect: Cells irradiated in G2 or at the G1/S border suffered a longer G2-delay than cells irradiated at mid- or late-S. Progression through G2 was nearly normal at doses up to 0.3 Gy if cells were exposed during G1 phase.     

Optimization of reovirus production from mouse L-929 cells in suspension culture

Reovirus serotype 3 Dearing (T3D) has shown potential as a novel cancer therapy. To support the increasing demand for reovirus, a two-stage perfusion mode scheme is proposed for cell growth and reovirus production. Mouse L-929 cells were used as the host for reovirus infection due to their ability to grow well in suspension culture. Several L-929 cell growth and reovirus infection characteristics were investigated and optimized in spinner flask batch cultures. For the growth of L-929 cells, a balanced nutrient-fortification of SMEM medium increased the maximum cell density by 30%, compared to normal SMEM; however, ammonia and lactate accumulations were found to inhibit further cell growth. For the production of reovirus, approximately 90% increase in viral yield resulted when the infection temperature was reduced from 37 to 33 degrees C. Infectious reovirus particles were shown to be stable in conditioned medium at 37 and 33 degrees C. The final virus titer was dependent on the multiplicity of infection (MOI) and the host cell density at the time of infection. A combination of an MOI of 0.1 pfu/cell and an initial host cell density of 1.0 x 10(6) cells/mL in fortified medium resulted in a maximum virus titer of (4.59 +/- 0.16) x 10(9) pfu/mL and a specific yield of (2.34 +/- 0.08) x 10(3) pfu/cell. At an optimal harvest time of the infection process, 99% of the virus was associated with the cellular debris. Finally, the presence of 5.0 mM ammonia in the culture medium was shown to seriously inhibit the reovirus yield, whereas lactate concentrations up to 20 mM had no effect.     

Fatty conversion of mouse fibroblasts of the L-929 line induced by cysticerci of the cat tapeworm

Effect of exometabolites of cysticerci of H. taeniaeformis on morphological features of transformed fibroblasts was investigated using L-929 cells. Studies on histochemistry and ultrastructure of L-929 cells treated with the cysticercal exometabolites induced a fatty conversion of these cells. It is proposed that the exometabolites in question may exert their influence on differentiation degree in the in vitro long-term cultivated fibroblasts-like cells.     

橙黄玉凤花种子萌发培养及小苗组培快繁研究

对橙黄玉凤花Habenaria rhodocheila种子进行无菌萌发培养以获得大量原球茎,并对原球茎组培,建立其快繁体系。结果表明,橙黄玉凤花种子以0.1%升汞消毒15 min为最佳处理。种子萌发培养基中,添加0.2%活性碳(AC)有利于种子萌发。种子萌发的最佳培养基为1/2MS＋NAA 0.5 mg·L-1＋AC 0.2%,原球茎增殖分化最佳培养基为1/2MS＋NAA 0.2 mg·L-1＋ZT 3.0 mg·L-1＋AC 0.2%;生根最佳培养基为1/2MS＋NAA 0.1 mg·L-1＋6-BA 2.0 mg·L-1＋AC 0.2%。     

溶菌酶对瘤胃体外发酵、甲烷生成及微生物菌群结构的影响

【目的】通过体外静态模拟瘤胃发酵法研究溶菌酶对瘤胃发酵、甲烷生成及微生物菌群结构的影响。【方法】采用单因素多水平试验设计,溶菌酶添加水平分别为0(L-0,对照组)、0.1 mg/100 m L(L-0.1)、1 mg/100 m L(L-1)、10 mg/100 m L(L-10)和100 mg/100 m L(L-100),定时测定产气量和甲烷产量,培养24 h后,发酵液用于发酵参数和微生物菌群数量的q PCR测定,其中L-0、L-1和L-100三个组发酵液同时进行16S r RNA基因Illumina高通量测序。【结果】与对照组相比,低剂量溶菌酶添加(L-0.1组)不影响甲烷产量、氨氮浓度、干物质消失率、有机物消失率和总挥发性脂肪酸等瘤胃发酵参数(P0.05);随着剂量提高,L-1处理组甲烷产量、氨氮浓度显著降低(P0.05),丙酸浓度显著增加(P0.05),并且干物质消失率、有机物消失率和总挥发性脂肪酸不受影响(P0.05);而较高剂量组(L-10和L-100组)虽然甲烷产量显著降低,丙酸浓度显著增加(P0.05),但干物质消失率和有机物消失率也显著降低(P0.05)。q PCR结果显示高剂量组(L-100组)总菌、原虫、甲烷菌数量与对照组相比显著降低(P0.05),而L-0.1、L-1和L-10组总菌、真菌和原虫数量与对照组相比均无显著变化(P0.05)。高通量测序主成分分析(PCA)显示对照组与溶菌酶添加组间瘤胃细菌组成的明显区分,说明添加溶菌酶显著改变了瘤胃细菌菌群结构。溶菌酶通过增加月形单胞菌和琥珀酸弧菌等丙酸生成菌的相对丰度,使更多的氢被用于生成丙酸,导致甲烷产量降低;溶菌酶可抑制普雷沃氏菌和拟杆菌属等蛋白降解菌的生长,进而减少蛋白质过度降解,降低氨氮浓度。【结论】添加适宜浓度(1 mg/100 m L)的溶菌酶可通过调控瘤胃微生态改变瘤胃发酵模式,降低瘤胃甲烷和氨的生成,短期内并不影响饲料消化。     

新疆雪莲体细胞胚胎发生

通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲（Saussurea involucrata Kar．et Kir．）的植株再生。选用新疆雪莲子叶为外植体,接种于MS＋0．5mg·L^-12,4-D＋0．05—1mg·L^-1BA的固体培养基上,进行愈伤组织的诱导。从第1次继代培养的愈伤组织中挑选出黄绿色、颗粒状、质地致密的腔陛愈伤组织,转移到含0．05—0．1mg·L^-1 2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养,20天后可分化产生大量球形胚。继代过程中相继加入PEG和GA3,可以促进体细胞胚的分化和生长。体细胞胚在含有5mg·L^-1 GA3的MS固体培养基上,可发育成完整的植株。     

海南粗榧愈伤组织的诱导和培养

海南粗榧的嫩茎和嫩叶以0.1%升汞消毒12 min的效果最好.外植体在MS 0.1 mg·L.6-BA l mg·L-1NAA 2mg·L-12,4-D 3.0%蔗糖 0.6%卡拉胶(pH 5.8)培养基中能顺利诱导出愈伤组织.液体悬浮和暗培养均有利于愈伤组织的增殖.愈伤组织增殖的最佳培养基为MS 0.1 mg·L-1KT 3 mg·L-1NAA 3.0%蔗糖(pH 5.8).     

青花菜与白菜间体细胞杂种获得与遗传特性鉴定

为获得芸薹属白菜Brassica campestris与青花菜Brassica oleracea var. botrytis的种间体细胞杂交体,以青花菜和白菜的子叶与下胚轴为材料,分离制备原生质体,用40％聚乙二醇 (Polyethylene glycol,PEG) 进行原生质体融合。融合细胞在以0.3 mol/L 蔗糖、0.3 mol/L葡萄糖为渗透稳定剂,附加0.2 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤 (6-BA) +0.1 mg/L 1-萘乙酸 (NAA) +0.1 mg/L激动素 (Kinetin,Kin) 的改良K8p培养基中液体浅层培养。将包埋于0.1％琼脂糖的8~10个细胞期的细胞在添加0.3 mol/L蔗糖和2 mg/L 6-BA+2 mg/L玉米素 (Zeatin,ZEA) +1 mg/L NAA+0.5 mg/L Kin的Kao培养基中诱导愈伤组织。愈伤组织转到MS+5 mg/L ZEA+2 mg/L IAA诱导不定芽。将长1～2 cm的不定芽转到1/2 MS+0.2 mg/L NAA诱导生根。将生根的植株转移到花盆,并对其杂种性质进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。结果表明,融合细胞培养2～7 d后发生第1次分裂,培养35 d后植板率为0.66％,不定芽再生率达3.7％。形态学观察显示,绝大多数再生植株的叶面积较大,株型和叶型为两种杂交亲本的中间型。染色体计数结果显示,再生植株染色体数目为2n=38。流式细胞仪测定DNA含量显示,再生植株DNA含量是亲本之和。随机扩增多态性DNA (Random amplified polymorphic DNA,RAPD) 和基因组原位杂交 (Genomic in situ hybridization,GISH) 分析结果证明再生植株具有双亲基因组。体细胞杂种花粉育性比较低,杂交、回交后其育性逐渐获得恢复。