P13K／AKT信号转导通路与人舌鳞癌细胞TCA8113顺铂耐药的相关性研究

目的：探讨P13K特异性抑制剂LY294002逆转顺铂耐药口腔鳞癌细胞TCA8113／CDDP的可行性。方法：采用间歇性加药,逐步递增CDDP药量,体外连续诱导培养TCA8113／CDDP细胞;用不同浓度的LY294002和顺铂处理TCA8113和TCA8113／CDDP细胞;MTT法观察对细胞增殖的影响,Western印迹分析LY294002作用前后p-Akt、Akt、P13K蛋白的表达。结果：建立了舌鳞癌耐药细胞TCA8113／CDDP,耐药指数为7．7;MTT实验显示LY294002对TCA8113和TCA8113／CDDP细胞的抑制作用与浓度及作用时间呈正相关;LY294002联合顺铂对2种细胞的抑制作用比单用顺铂效果好;P13K、Akt、P—AKT蛋白表达明显降低,其中TCA8113／CDDP细胞中P13K、AKT、p-AKT蛋白的表达比TCA8113细胞明显增多（P〈0．05）。结论：LY294002能增加耐药口腔鳞癌顺铂化疗的敏感性。     

RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌细胞中的相关性研究

目的探讨肿瘤转移相关因子RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌侵袭转移过程中的作用及相关机制。方法利用PI3K/Akt/mTOR信号通路上特异性的抑制剂,采用MTT法,伤口愈合实验及侵袭实验观察不同浓度药物对肺癌95D细胞生长侵袭转移能力的影响,通过Western Blot方法观察RhoGDI2蛋白水平的变化。结果PI3K抑制剂LY294002及mTOR抑制剂Rapamycin都能抑制肺癌细胞95D的侵袭转移能力,联合应用抑制作用更强。PI3K抑制剂LY294002处理组RhoGDI2蛋白的表达量增加,且随浓度增加RhoGDI2蛋白表达也增加。mTOR抑制剂Rapamycin组,在低浓度时增加RhoGDI2蛋白的表达,但增大Rapamycin的浓度,RhoGDI2蛋白的表达反而降低。低浓度LY294002组和Rapa-mycin组联合应用可以明显增加RhoGDI2蛋白的表达。结论PI3K/Akt/mTOR信号通路中Akt的活化与RhoGDI2密切相关,RhoGDI2可能直接或间接通过与Akt的相互作用参与调节肺癌的侵袭转移的过程。     

土槿皮乙酸通过PI3K/Akt信号通路诱导人肾癌细胞A498凋亡

目的:研究土槿皮乙酸对人肾癌细胞A498凋亡的影响,并探讨其内在的分子机制,为肾癌治疗寻找有效的新靶点和新策略。方法:人肾癌细胞A498经10、15μmol/L土槿皮乙酸处理48 h后,用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时通过Western印迹和实时荧光定量PCR检测凋亡相关蛋白和m RNA的表达;加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或15μmol/L土槿皮乙酸处理A498细胞48 h后,Western印迹检测相关蛋白的表达。结果:经不同浓度土槿皮乙酸作用A498细胞48 h后,与未加土槿皮乙酸组细胞相比,细胞凋亡率显著上升,且呈剂量依赖性,比较差异有统计学意义(P0.05);同时,Blc-2表达减少,Bax、caspase-9、caspase-3表达增多。Blc-2蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少,而Bax、caspase-9、caspase-3的表达呈增加趋势;PI3K和Akt蛋白的表达量与是否加入LY294002或土槿皮乙酸无关,p-PI3K和Aktp-Ser473蛋白的表达量随LY294002或土槿皮乙酸的逐步加入而减少。结论:土槿皮乙酸可抑制A498细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt通路相关。     

胰岛素样生长因子1（IGF-I）通过PI-3K/Akt 途径对结肠癌细胞 凋亡的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-I)通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI-3K/Akt)信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及其凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法:培养结肠癌SW480细胞株,实验分成三组:未加IGF-I空白组、IGF-I刺激组、IGF-I+LY294002阻断组,检测阻断剂LY294002是否阻断PI-3K/Akt通路(Western Blot检测三组P-Akt表达情况);Western Blot及免疫荧光观察三组survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:Western blot结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的p-Akt的表达(P<0.05);阻断IGF-I诱导的PI-3K/Akt通路后MTT显示结肠癌细胞SW480增殖抑制率升高(P<0.05),流式细胞术分析显示凋亡率明显上升(P<0.05);Western blot及免疫荧光结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的survivin的表达(P<0.05)。结论:IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

臭椿酮诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其机制研究

为研究臭椿酮(Ailanthone,AIL)诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡的作用及作用机制,以人黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用MTT法测定AIL对人黑色素瘤A375细胞生长增殖的抑制作用。用倒置相差显微镜观察AIL对A375细胞形态的影响,用荧光倒置显微镜观察Hoechst33258染色后AIL对A375细胞核的影响,用AnnexinV-FITC/PI双染法检测AIL诱导A375细胞凋亡的作用,用分光光度法检测caspase-3和caspase-9的活性,Westernblot检测p-PI3Kβ(Ser1070),PI3Kβ,p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表达水平的变化,接着用PI3K抑制剂LY294002进行干预,进一步验证AIL对PI3K/Akt信号通路及细胞凋亡的影响。实验结果表明,AIL能够明显抑制A375细胞增殖,使A375细胞数目变少、附着力和透光性减弱,AIL能够诱导A375细胞凋亡,使其细胞核染色质发生固缩并呈现高亮,且使A375细胞早期及晚期凋亡率均增加,AIL作用后能够使caspase-3和caspase-9活性增加,AIL能够抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化,从而使PI3K/Akt信号通路失活。较AIL单独作用,AIL和LY294002共同作用后对PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增强且诱导凋亡作用增加,进一步说明AIL通过失活PI3K/Akt信号通路来诱导A375细胞凋亡。     

高糖和LY294002干预影响足细胞内Ⅳ型胶原表达

探讨高糖和PI3K/Akt通路对足细胞内Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)表达的影响。体外培养小鼠足细胞,给予高糖(30mmol/L)处理后,分别于0,12,24,48h收集细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot技术检测Col Ⅳ的表达;Western blot技术检测Akt的活化及LY294002对Col Ⅳ表达的抑制效应。结果表明,高糖诱导足细胞内Col Ⅳ蛋白表达增多,24h明显,各时间点与高糖刺激前相比均有统计学差异(P<0.05);高糖激活Akt蛋白磷酸化,p-Akt随刺激时间延长表达增多。PI3K/Akt通路抑制剂LY294002孵育细胞24h后,可减弱高糖诱导的足细胞内Col Ⅳ的表达(P<0.05)。因此,高糖可能通过激活PI3K/Akt通路上调足细胞内Ⅳ型胶原表达。     

PI3K抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞的调节作用

高危型人乳头瘤病毒(Human papiloma virus,HPV)感染是宫颈癌的危险因素,HPV16是常见的高危型HPV,与宫颈癌的发病有关,但具体机制未明确.有临床研究报道,宫颈癌组织中HPV16感染与磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)表达增加有关,为了阐明PI3K/AKT信号通路及其抑制剂LY294002在HPV感染宫颈癌细胞增殖中的调控作用,本实验培养了 HPV16感染的宫颈癌细胞株SiHa、HPV阴性的宫颈癌细胞株C33A、正常宫颈上皮细胞株H8,检测了 p-PI3K、p-AKT的表达水平;SiHa细胞分为对照组、50 μmol/L及100 μmol/L LY294002组,药物干预后检测细胞增殖活力A490值及p-PI3K、p-AKT、c-myc、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达水平;皮下注射SiHa细胞建立移植瘤小鼠模型,分为对照组、25mg/kg、50mg/kg LY294002组,药物干预后取移植瘤称重.结果显示,SiHa细胞中p-PI3K、p-AKT的表达水平均高于C33A、H8细胞;50 μmol/L及100 μmol/L LY294002组 SiHa 细胞的 A490值及 p-PI3K、p-AKT、c-myc、bcl-2的表达水平均低于对照组;25 mg/kg、50 mg/kg LY294002组移植瘤小鼠的移植瘤质量均低于对照组(P＜0.05).以上结果表明HPV16感染的宫颈癌细胞中PI3K/AKT信号通路过度激活具有促增殖作用.本实验阐明了 PI3K/AKT通路及其抑制剂LY294002在HPV16感染的宫颈癌细胞增殖中的调控作用,PI3K/AKT通路的激活能够促进HPV16感染的宫颈癌细胞增殖及移植瘤的生长,使用信号通路抑制剂能够抑制细胞增殖及移植瘤生长,未来PI3K/AKT通路可能成为HPV16感染引起宫颈癌的防治靶点.     

胰岛素样生长因子1（IGF-I）通过PI-3K/Akt途径对结肠癌细胞凋亡的影响

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-I）通过磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI-3K/Akt）信号通路对结肠癌细胞株SW480凋亡率的影响及其凋亡抑制蛋白survivin表达水平的变化。方法：培养结肠癌SW480细胞株,实验分成三组：未加IGF-I空白组、IGF-I刺激组、IGF-I＋LY294002阻断组,检测阻断剂LY294002是否阻断PI-3K/Akt通路（Western Blot检测三组P-Akt表达情况）;Western Blot及免疫荧光观察三组survivin蛋白表达变化;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果：Western blot结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的p-Akt的表达（P〈0.05）;阻断IGF-I诱导的PI-3K/Akt通路后MTT显示结肠癌细胞SW480增殖抑制率升高（P〈0.05）,流式细胞术分析显示凋亡率明显上升（P〈0.05）;Western blot及免疫荧光结果显示LY294002可抑制IGF-I诱导的survivin的表达（P〈0.05）。结论：IGF-I可通过PI-3K/Akt通路诱导survivin表达,从而抑制结肠癌细胞SW480的凋亡。     

低浓度哇巴因对负鼠肾小管上皮细胞增殖的影响

目的:用低血清培养液来模拟肾脏供血不足的营养不良状态,研究低浓度哇巴因对低血清培养下OK细胞(负鼠肾小管上皮细胞)增殖的影响。方法:用低浓度哇巴因(1-30n M)处理0.2%血清培养下OK细胞,MTT实验和Brdu掺入法检测哇巴因对OK细胞增殖的影响;Western blot检测Akt和ERK1/2的磷酸化水平;用LY294002和PD98059分别抑制PI3K/Akt和ERK1/2蛋白激酶活性,观察抑制PI3K/Akt和ERK1/2对哇巴因促进OK细胞增殖的影响。结果:低浓度哇巴因(1-30n M)促进OK细胞的增值,上调OK细胞中Akt和ERK1/2磷酸化水平。用LY294002和PD98059特异抑制Akt和ERK1/2的活化能够抑制哇巴因的促增殖作用。结论:低浓度哇巴因(1-10n M)能够促进OK细胞的增值,PI3K/Akt和ERK1/2信号通路参与哇巴因对OK细胞促增殖作用的调节。     

RUNX1对氧糖剥夺诱导PC12细胞凋亡的保护作用研究

目的:研究RUNX1在PC12细胞氧糖剥夺模型中的表达及其对PC12细胞的保护作用,并探讨其相关机制。方法:体外培养PC12细胞并构建氧糖剥夺模型,将细胞分为对照组、氧糖剥夺组、RUNX1 si RNA处理组、si RNA对照处理组(sicontrol)、pc DNA3.1-RUNX1处理组(pc RUNX1)和pc DNA3.1对照处理组(pc DNA 3.1)。q RT-PCR和western blot检测RUNX1、磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(t-Akt)表达水平;MTT法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果:与对照组比较,RUNX1在PC12细胞氧糖剥夺模型中表达水平显著升高;沉默RUNX1可下调PC12细胞的存活率,促进细胞的凋亡,有效抑制p-Akt蛋白表达,而过表达RUNX1显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡,并上调p-Akt蛋白表达;此外,PI3K/Akt通路抑制剂LY294002明显抑制RUNX1过表达对细胞存活率的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用。结论:RUNX1可通过PI3K/Akt信号通路保护OGD对PC12细胞的损伤作用。     

体外缺血缺氧条件下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡发生的机制研究

目的:研究体外大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在缺血缺氧条件下发生凋亡的作用机制。方法:采取大鼠骨髓,以密度梯度离心分离出单个核细胞(MNCs),于体外培养并由牛垂体提取物(PEX)诱导扩增传代培养出骨髓间充质干细胞(MSCs)。经形态学和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧条件下培养,通过Annexin V/PI双染细胞凋亡检测比较不同组别细胞的凋亡率和蛋白印迹法(western blot)来观察细胞中蛋白的变化。结果:①经形态学观察和流式细胞仪检测MSCs表面标志物鉴定,提示骨髓间充质干细胞培养成功。②对照组(无缺血缺氧)与缺血缺氧组比较,缺血缺氧组的凋亡率显著性增加,而通过磷酸化Akt的表达量显著性增加提示PI3K(Phosphoinosi-tide-3kinase)/Akt(ProteinkinaseB,PKB)信号通路被激活(P<0.05);同时缺血缺氧组与缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组比较,缺血缺氧+PI3K/Akt抑制剂(LY294002)组的凋亡率显著降低,而通过磷酸化Akt的表达量显著减少提示PI3K/Akt信号通路被抑制(P<0.05)。结论:PI3K/Akt信号通路对体外缺血缺氧条件下培养的骨髓间充质干细胞凋亡发生有关键性作用。     

PI3K信号通路通过Skp2、p27调节肝癌细胞的增殖

探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路调节肝癌细胞增殖的机制.用LY294002特异性阻断PI3K信号通路后,人肝癌细胞(SMMC-7721)的增殖明显被抑制.RT-PCR及蛋白质印迹结果显示,LY294002增加了p27蛋白的表达,但不影响p27的mRNA表达.在LY294002处理的细胞中转入p27的RNAi质粒以干扰p27蛋白的表达后,肝癌细胞的增殖能力可部分恢复.放线菌酮(Chx)处理实验表明,阻断PI3K信号通路使p27蛋白的半衰期延长,稳定性增加.进一步研究发现,LY294002可抑制介导p27蛋白降解的关键分子Skp2的mRNA表达,还可缩短Skp2蛋白的半衰期,降低Skp2蛋白的稳定性.但在SMMC-7721中分别转染PI3K下游重要靶分子Akt的持续激活和失活突变体,却并不影响p27蛋白的表达.这些结果表明,PI3K信号通路在转录及翻译后水平调节Skp2的表达而影响p27蛋白的降解,从而调节肝癌细胞的增殖,但Akt并没有参与这种调节.     

Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

摘要 目的：探究烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）及高糖高胰岛素（HG+HI）微环境对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法：将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组（n=6）：对照组（control）、高糖高胰岛素干预组（HH，使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 mU/L的胰岛素的培养基培养72 h）、分别转染sh-NC和sh-Nampt组（sh-NC和sh-Nampt，使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中，转染时间为48 h）、HH干预sh-NC和sh-Nampt组（HH+sh-NC和HH+sh-Nampt）。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR检测Nampt mRNA，Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果：与对照组和sh-NC组比较，sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，而细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。与对照组和sh-NC组比较，HH组和HH+sh-NC组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.005）。与HH组和HH+sh-NC组比较，HH+sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。结论：高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。     

白藜芦醇通过Pi3K/AKT 通路抑制胃癌SGC-7901 细胞增殖和迁移

目的:验证白藜芦醇是否可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移及其信号通路。方法:用不同浓度白藜芦醇干预SGC-7901细胞,再用LY-294002和IGF-1分别用来抑制和激活Pi3K/AKT通路。MTT法测细胞增殖,划痕试验和Transwell试验测细胞迁移,Western blot检测细胞迁移相关蛋白(MMP-2、MMP-9)、细胞迁移相关蛋白(P21、P27)、以及AKT、p-AKT的表达情况;结果:相比于对照组,白藜芦醇组胃癌细胞增殖和迁移减弱(P=0.001),p-AKT表达减少(P0.001);LY-294002可以抑制p-AKT的表达(P=0.004),和白藜芦醇一样可以抑制胃癌细胞的增殖和迁移;IGF-1可以显著增加p-AKT的表达(P0.001),可以逆转白藜芦醇对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用。结论:白藜芦醇通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖和迁移。     

眼镜蛇毒NGF通过PI3K/AKT信号通路对肝星状细胞的影响

为探讨PI3K/Akt信号通路在眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)诱导肝星状细胞凋亡中的作用,本实验分别采用CCK8和流式细胞术检测NGF对HSC-T6细胞增殖及凋亡作用,从而找出NGF作用HSC-T6细胞的最小有效浓度,同时应用Western Blot法分析NGF对细胞蛋白Akt磷酸化水平的影响。结果发现NGF浓度为4μg/m L时为诱导HSC-T6细胞凋亡的最小有效浓度,并且在作用HSC-T6细胞后,P-Akt的表达水平降低,Akt的表达量却增加。将该浓度NGF与信号通路抑制剂LY294002联合使用则协同作用增强。因此,眼镜蛇毒神经生长因子诱导HSC-T6细胞凋亡作用与PI3K/Akt信号通路有关。     

姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖和PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:观察姜黄素对食管癌Ec109细胞增殖的抑制作用及肿瘤抑制基因/磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:体外培养人食管癌Ec109细胞,不同浓度姜黄素作用后,MTT法检测其对Ec109细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法分析肿瘤抑制基因(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3(GSK3β)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)蛋白的表达情况。结果:MTT检测结果显示姜黄素能显著抑制Ec109细胞的增殖,且呈明显的剂量和时间效应关系;透射电镜观察发现姜黄素能诱导Ec109细胞发生凋亡;流式细胞仪分析显示随药物浓度的增加,Ec109细胞凋亡率明显升高;Western blot结果表明姜黄素可增强细胞中PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制Akt的表达。结论:姜黄素通过上调PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制PI3K/Akt信号通路,从而抑制食管癌Ec109细胞增殖。     

PI3K/Akt信号通路在白藜芦醇抗大鼠缺血/再灌注性心律失常中的作用及机制

目的：探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路在白藜芦醇抗缺血/再灌注性心律失常中的作用及机制。方法：48只健康雄性SD大鼠,取心电图正常者随机分为4组（n=10）：假手术（SC组）组、缺血/再灌注（I/R组）组、白藜芦醇处理（Res处理组）组、PI3K抑制剂LY294002（LY294002组）组。建立大鼠在体心肌缺血/再灌注模型,观察各组心律失常的发生情况及左室血流动力学变化,Western blot法测定心肌组织中蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平,以RT-PCR法从转录水平检测Cx43的表达水平。结果：与I/R组相比,Res处理组心律失常的发生率（心律失常评分）明显降低、左室舒缩功能明显升高,同时心肌Akt、Cx43蛋白表达及Cx43mRNA水平也明显升高;使用PI3K抑制剂LY294002后,心肌Akt、Cx43蛋白表达及Cx43mRNA水平下降的同时心律失常的发生率明显升高、左室舒缩功能明显降低。结论：白藜芦醇的抗再灌注性心律失常作用可能是通过激活PI3K/Akt信号通路,改变Cx43活性及分布实现的。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002对缺血缺氧心肌细胞的作用研究

目的:明确P13K/Akt信号通路在缺血缺氧心肌细胞损害中的作用。方法:建立心肌细胞缺血缺氧模型,施加磷脂酰肌醇3激酶抑制剂LY294002干预,观察心肌细胞活力、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量及碘化丙啶(PI)染色阳性细胞比例的变化。结果:模拟缺血缺氧后细胞活力下降,LDH及PI染色阳性细胞比例显著增加。LY294002干预复合缺血缺氧后,细胞活力急剧下降,LDH含量及PI染色阳性细胞比例进一步显著增加(P<0.01)。结论:应用LY294002加重了缺血缺氧对心肌细胞的损伤效应,提示PI3K/Akt通路参与了缺血缺氧心肌细胞的内源性保护反应,减轻了缺血缺氧损害。     

奥利司他逆转肺腺癌A549/DDP细胞株顺铂耐药及机制研究

本研究的目的是观察奥利司他(Orlistat)逆转肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的耐药作用并考察其可能的分子机制。应用CCK-8法检测并计算肺腺癌耐药细胞株A549/DDP对顺铂(cisplatin, DDP)的耐药指数(resistance index, RI),筛选奥利司他的最佳实验浓度并观察其对A549/DDP细胞的耐药逆转效果;倒置荧光显微镜下观察各实验组细胞的形态学变化及Hoechst 33258荧光染色后细胞凋亡形态学改变;采用流式细胞术检测不同药物处理对细胞凋亡率的影响;Western blotting检测各实验组细胞P-gp、FASN、PI3K、Akt、p-Akt、NF-κB、Bcl-2和cleved-caspase-3的表达情况。结果显示,奥利司他抑制了A549/DDP耐药细胞株的增殖,且具有浓度依赖性。奥利司他与DDP联用增加了耐药株A549/DDP细胞对DDP的敏感性,耐药逆转倍数为5.02。倒置荧光显微镜观察到联合用药组细胞出现了明显的凋亡形态学改变。流式细胞术结果表明,与对照组和单药组比较,两种药物联用后细胞的凋亡率显著提高(p0.05)。Western blotting检测结果显示,相较于其它3组,联合用药组中耐药相关蛋白P-gp表达下调(p0.01),PI3K、p-Akt、NF-κB表达水平均显著降低(p0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降(p0.01),凋亡相关蛋白cleved-caspase-3表达上调(p0.01);虽然FASN的表达在单用奥利司他组及联合用药组中均降低,但这两组间的FASN表达水平并无统计学差异。以上结果表明,奥利司他能够提高A549/DDP耐药细胞株对化疗药物DDP的敏感性,具有逆转肺腺癌细胞耐药性的作用,其机制与降低耐药蛋白P-gp的表达、抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路以及其下游凋亡相关蛋白有关。     

PI3K/AKT途径在大肠埃希菌诱导U937细胞凋亡中的作用

目的探讨PI3K/AKT信号转导通路在大肠埃希菌（Escherichia coli,E.coli）诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用。方法利用Western blot分析检测E.coli感染不同时间后磷酸化及非磷酸化AKT的表达;预先用不同浓度的LY294002（PI3K途径抑制剂）处理U937细胞60min,观察E.coli感染30min后U937细胞的凋亡情况。结果随着感染时间的延长,磷酸化AKT的表达逐渐下降。加入PI3K的抑制剂LY294002后,U937细胞的凋亡率逐渐升高。结论PI3K/AKT信号转导通路参与了E. coli诱导的U937细胞凋亡过程。LY294002通过特异性地抑制PI3K/AKT活性增加E.coli诱导的U937细胞凋亡率。