一种新型反义RNA技术:RNA错折叠

反义RNA技术的发现对现代医疗技术的发展有着重要的作用,常规的反义RNA技术是设计出与靶RNA互补的寡核苷酸,通过它与靶RNA结合来干扰转录或翻译过程,使蛋白质不能被表达出来。目前,一项新的技术——寡核苷酸导向的RNA错折叠将反义RNA技术进一步简化,从另一个角度丰富了反义RNA技术。     

吗啉反义寡核苷酸在基因功能研究中的应用

吗啉反义寡核苷酸属于第三代反义寡核苷酸,主要通过阻断mRNA的剪接过程来抑制目的基因的功能。吗啉反义寡核苷酸技术现已广泛应用于发育过程中基因功能的研究;鉴于吗啉反义寡核苷酸能与病毒特异mRNA结合,形成的双链物可有效阻断病毒RNA的转录,从而抑制病毒的复制,所以该技术已应用于医学研究,如治疗病毒感染、癌症、肌营养不良症和早老综合症等疾病。主要阐述了吗啉反义寡核苷酸的结构特点、作用机制、与其它反义技术的比较,以及该技术的应用与展望。     

Mcl-1 分子研究进展

Mcl-1(myeloid cell leukemia-1)是Bcl-2家族的一个新成员,在凋亡调控中具有重要作用,此外它还可以直接对细胞分化和细胞周期进行调控,进一步研究表明Mcl-1在胚胎形成,组织发育和免疫系统中具有重要作用,Mcl-1表达异常可以导致恶性肿瘤的发生,因此通过反义寡核苷酸技术或小分子干扰RNA抑制Mcl-1基因的表达,促进细胞凋亡并提高肿瘤细胞对放疗及化疗的敏感性,为难治性肿瘤的治疗开辟了一条新途,所以对Mcl-1的深入研究具有重要意义。     

反义技术及其在G蛋白研究中的应用

反义技术至少包括反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术.在G蛋白研究中,反义技术在G蛋白受体及受体亚型研究、G蛋白转导信号特异性研究方面及对G蛋白耦联信号传导途径与其他信号传导途径之间“cross talk”认识方面的研究中,有着广泛的应用.     

反义技术在抗HBV感染中的应用

反义技术是近些年来随着现代分子生物学技术的发展而产生的新的生物医学治疗技术。它采用反义核酸分子抑制、封闭或破坏靶基因组的技术手段,包括反义寡核苷酸、核酶及RNA干扰等。反义分子通过与靶基因异性互补配对结合,阻断靶基因的复制、转录或翻译过程,从而发挥抗病毒作用。针对乙型肝炎病毒的反义技术也有了广泛而深入的研究。根据反义技术在分子、细胞以及动物水平上的研究表明：反义技术能够高效、特异地抑制HBV的复制与表达。     

RNA干扰在植物中的作用机理及其应用研究进展

RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡核苷酸、核酶、脱氧核酶的小同,并介绍了RNA干扰在植物基因功能、植物抗病毒、作物品种改良等方面的应用,为siRNA干扰的进一步利用提供参考资料.     

mRNA靶点筛选方法研究进展

mRNA靶点筛选问题是反义核酸领域的一个难题。近年来出现了多种筛选mRNA上可接近位点以确定靶位点的方法,包括mRNA实测分析法和计算机模拟分析两大类。其中mRNA实测分析法又包括多种针对自然折叠mRNA的实验分析技术;即基因walk技术,RNaseH作图技术、寡核苷酸微阵列技术,酶作图法确定二级结构技术,核酶导向型随机RNA库位点筛选技术和随机寡核苷酸库结合逆转录位点筛选技术。这些方法在鉴定RNA可接近位点及反义核酸的设计方面均有重要作用。     

Fas基因mRNA反义靶点筛选和体外验证

应用PARASS(poly-A anchored RNA accessible sites screening) 技术筛选Fas基因mRNA 获得3个潜在反义作用靶点,靶点1、2、3分别位于Fas基因297nt-317nt、619nt-639nt和662nt-682nt。设计了对应靶点的反义寡核苷酸A1、A2、A3,和10-23型DNAzyme D1、D2和D3。将反义寡核苷酸和Fas基因RNA结合再加入RNase H进行反应,10-23型DNAzyme则直接与Fas基因RNA作用,结果表明：3个靶点的反义寡核苷酸组及DNAzyme均能降解Fas基因RNA,为有效靶点,其靶点反应优势次序为靶点3>靶点1>靶点2;而非靶点对照组和有效靶点突变了2个碱基的对照组均没有反应。靶点2和靶点3与ISIS公司经过多次实验筛选到的Fas反义作用靶点位置基本相同,表明PARASS技术的有效性和可靠性。获得的有效反义寡核苷酸和DNAzyme为后续研究打下基础。     

核酸治疗的靶向性传递

寡核苷酸包括反义核酸和干扰RNA等,它们能够为多种疾病提供快速、特异性的治疗,具有很高的应用潜力。然而这些分子能否有效地传递到特定的细胞和组织对于最终的临床应用非常关键。靶向性的传递能够提高寡核苷酸药物的特异性和使用效率,使药物分子能有效到达作用位点,进而发挥它们的治疗效果。一些基于不同平台的靶向性配体传递策略已经形成,并能够很好的发挥其生物学活性。本文针对当前该研究领域的进展提供一个概述。     

硫化寡聚核苷酸作为基因表达抑制剂的研究进展

1983年Light等人在原核生物中发现了一种新的基因表达调控系统——反义RNA参与调控。经过近九年来的发展,反义RNA概念的覆盖面变得更广了,即能通过互补到靶基因链上并干扰或抑制靶基因表达RNA片段通称反义RNA。这样就提供了用人工方法来干扰或抑制基因表达的新机会,使反义RNA作为基因表达的抑制剂得到蓬勃发展。由于反义RNA在医学临床上有着重要的应用前景,因此国外许多生物工程公司、许多大制药公司和研究所都纷纷投入大量人力物力来开发这些新一代的药物。     

新的改进的反义药物即将问世

反义药物就要从理论变成现实了吗?由于定靶和降解困难以及亲和性低,反义寡核苷酸仍不能用于治疗。然而,某些工业人士说,多亏了反义寡核苷酸研究的最新进展,这一状况就要改变了。研究人员试图使人造的单链DNA选择性地结合RNA,从而阻止那些不想要的蛋白的生成。 Gilead Sciences,Inc(Foster City,CA)提供了一种技术,能提高反义药物对其RNA靶子的亲和性。方法很简单,就是在反义化合物的T和C碱基上加一个丙炔基团。这样处理得到的寡核苷酸对RNA的亲和力比标准反义分子大10～100倍。这种丙炔“兰”不作用于A和G碱基,有报道说,Gilead正在解决这一问题。     

反义寡核苷酸研究进展

反义寡核苷酸可以通过与ｍＲＮＡ相互作用调节的基因表达，但是其作用的强弱受多种因素的影响。反义ＲＮＡ和反义ＤＮＡ在调节基因的表达方面各有优缺点；采取适当的方法增强反义寡核苷酸的摄取及促进其释放可以大大提高它们的作用效率；反义寡核苷酸在活体内主要经肾脏和肝脏代谢，有一定特异性和非特异性副作用。根据不同的目的，选择适当的反义寡核苷酸用于研究或疾病的治疗与预防，具有很重要的理论意义和现实意义。     

植物小分子RNA整合分析软件psRobot开发完成

植物小分子RNA,主要包括microRNA和小干扰RNA,在基因的转录和转录后调控过程中具有重要作用。第二代测序技术的逐渐成熟和广泛应用极大地推动了小分子RNA相关研究的发展,对不同组织和材料中的小分子RNA进行深度测序已成为研究小分子RNA的常规手段。因此,针对这些数据的生物信息学分析成为了研究者们面临的日益突出     

反义RNA寡核苷酸及其与脂质体的复合物对于乙型肝炎病毒的抑制

我们设计合成了特异性靶向乙型肝炎病毒(HBV)mRNA的反义RNA寡核苷酸P-2987、X-60和X-519.在瞬时转染pHBV1.3质粒(含有1.3拷贝的HBV基因组)的HepG2细胞和整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中,转染2μmol/L的反义RNA寡核苷酸,ELISA和实时定量PCR结果表明,这3条寡核苷酸可以明显抑制HBV的复制和抗原表达.在HBV转基因鼠中,尾静脉注射反义RNA寡核苷酸,结果表明,肝脏中HBV的复制得到了抑制,但是血清中抗原含量和HBV DNA拷贝数没有明显变化.反义RNA寡核苷酸X-519与脂质体的复合物可以增强其对于HBV在肝脏中复制的抑制作用.在通过高压尾静脉注射pHBV1.3质粒建立的HBV急性感染模型中,反义RNA寡核苷酸X-519可以显著地抑制HBV在肝脏中的复制以及降低血清中病毒抗原水平和DNA拷贝数.上述实验结果说明,X-519及其与脂质体的复合物对于HBV的复制和抗原表达起到明显的抑制作用,可能作为一种潜在的针对HBV的基因治疗药物.     

反义RNA寡核苷酸及其与脂质体的复合物对于乙型肝炎病毒的抑制（英文）

我们设计合成了特异性靶向乙型肝炎病毒(HBV)mRNA的反义RNA寡核苷酸P-2987、X-60和X-519.在瞬时转染pHBV1.3质粒(含有1.3拷贝的HBV基因组)的HepG2细胞和整合了HBV基因组的HepG2.2.15细胞中,转染2μmol/L的反义RNA寡核苷酸,ELISA和实时定量PCR结果表明,这3条寡核苷酸可以明显抑制HBV的复制和抗原表达.在HBV转基因鼠中,尾静脉注射反义RNA寡核苷酸,结果表明,肝脏中HBV的复制得到了抑制,但是血清中抗原含量和HBV DNA拷贝数没有明显变化.反义RNA寡核苷酸X-519与脂质体的复合物可以增强其对于HBV在肝脏中复制的抑制作用.在通过高压尾静脉注射pHBV1.3质粒建立的HBV急性感染模型中,反义RNA寡核苷酸X-519可以显著地抑制HBV在肝脏中的复制以及降低血清中病毒抗原水平和DNA拷贝数.上述实验结果说明,X-519及其与脂质体的复合物对于HBV的复制和抗原表达起到明显的抑制作用,可能作为一种潜在的针对HBV的基因治疗药物.     

反义寡核苷酸作用机制研究进展

近年来,由于多种化学修饰的反义寡核苷酸的出现,其作用机制已经不仅仅是诱导RNaseH的切割机制,多种核酸酶能被修饰的反义寡核苷酸诱导,如双链RNase,RNase P,RNase L等,而且利用反义寡核苷酸可以干扰mRNA的代谢过程中加帽,剪接,翻译起始和延长等步骤,随着对反义寡核苷酸作用的分子机制研究的深入,会使它有更为广阔的应用前景。     

反义核酸的骨架修饰及其应用

反义核酸的发展经历了反义寡核苷酸,混合骨架寡核苷酸和多肽核酸等几个阶段。这３种不同类型的反义核酸均能与ＤＮＡ或ＲＮＡ结合,阻断目的基因的表达。３种反义核酸的结构有较大差异,各自的性质和反义作用机理也不尽相同。尽管作用机制还不十分明确,反义核酸已广泛应用于生物学和医学等领域,作为反义药物用于治疗癌症等疾病,或作为试剂研究生物大分子的功能。     

RNA干扰研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默现象,广泛存在于真菌、植物和动物中。它是细胞内由双链RNA诱导降解与其配对的特定mRNA的过程。细胞内双链RNA在酶的作用下,形成20-25碱基大小的小干扰RNA(siRNAs),由siRNAs进一步掺入多组分核酸酶并使其激活,从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA,抑制该基因在细胞内的翻译表达。RNAi技术是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因沉默技术。与反义寡核苷酸等传统方法相比,RNAi技术有着无可比拟的优势。本文就其近年的研究进展作一综述。     

中华绒螯蟹EsSox21b-like基因干扰载体的构建及原核表达制备dsRNA

Sox(SRY-related HMG-box)基因是一类重要的转录因子,在动物的性别分化与决定、器官的发生等方面具有重要的调控作用。旨在利用RNA干扰技术证实该基因的功能,将EsSox21b-like基因617 bp的片段克隆至含有两个T7启动子的L4440载体上,构建了EsSox21b-like-L4440干扰载体,将该重组载体转化至RNaseⅢ缺陷型的HT115菌株中,经IPTG诱导菌株体内转录,获得了EsSox21b-like正义和反义单链RNA,经过变性、退火形成大量双链RNA(EsSox21b-like-dsRNA),能满足以后应用RNA干扰试验对于EsSox21b-like基因功能的研究。