氧化应激诱导的自噬与隐睾症及畸形精子症的相关性研究

为了分析氧化应激诱导的自噬与隐睾症及畸形精子症的相关性,首先采用高通量的qPCR array技术检测44个自噬相关基因在隐睾症患者和生育力正常男性的睾丸组织中的表达差异,筛选出11个表达差异显著的自噬相关基因;然后用不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide, H_2O_2)分别处理小鼠精原细胞系GC-1 spg和睾丸支持细胞系TM4,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide, MTT)]分析H_2O_2处理对细胞增殖活性的影响,并采用实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测11个差异表达的自噬相关基因在细胞氧化应激条件下的表达;最后利用GEO (Gene Expression Omnibus)数据库分析自噬相关基因与畸形精子症的关系。通过综合比较发现, BCL2L1、EIF2AK3在隐睾症、畸形精子症及氧化应激过程中均表达上调,表明这两个基因与男性不育的发生有关,推测其作用机制可能是通过响应氧化应激信号来实现。     

miR-199a-3p/Nme2在TGF-β1信号通路中的作用分析

通过microRNA芯片技术在小鼠GC-1 spg细胞中筛选发现microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)受转化生长因子TGF-β1调节。为了进一步探讨二者的关系,通过基因克隆与载体构建技术、双荧光素酶报告基因检测及定量PCR实验,发现miR-199a-3p靶向识别肿瘤转移抑制基因2(Nme2)的3'非编码区(UTR)序列,且正向调控Nme2的表达。利用TGF-β1处理GC-1 spg细胞后,结果显示Nme2和miR-199a-3p在mRNA水平的表达均显著上调;进一步将miR-199a-3p和TGF-β1双重作用于GC-1 spg细胞后,结果表明Nme2的表达会明显增强,而且在TGF-β1通路中,miR-199a-3p被抑制的部分功能可能会被Nme2补偿。综上,miR-199a-3p对Nme2基因具有直接靶向识别和调控作用,且在参与TGF-β1信号通路的生物学效应中,二者在功能上相互关联。     

壳寡糖缓解甲萘醌诱导巨噬细胞损伤机制初探

目的:研究壳寡糖对甲萘醌诱导的巨噬细胞氧化损伤的保护作用.方法:通过MTT实验检测相应处理的细胞活力,并通过相应试剂盒检测细胞氧化还原体系中某些相关酶的活力及相应产物含量.结果:壳寡糖能够缓解甲萘醌诱导的细胞损伤,并且发现壳寡糖可以缓解甲萘醌导致的胞内超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力的降...     

壳寡糖对神经细胞的抗氧化保护作用研究

神经细胞发生氧化损伤是导致阿尔茨海默病等神经退行性疾病的重要原因之一。为探讨壳寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)对神经细胞的保护机制,首先采用过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)建立SH-SY5Y神经细胞氧化损伤模型,随后通过细胞存活率(MTT法)、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、Hoechst33342荧光染色法、流式细胞术研究各组细胞凋亡情况,并用Western-blot检测相关蛋白质的表达水平,从而分析COS对H_2O_2所致神经细胞氧化损伤的影响。研究发现,H_2O_2能明显诱导SH-SY5Y细胞损伤,而COS可抑制H_2O_2引起的细胞死亡,表现为神经细胞存活率升高、LDH释放量及MDA含量下降;且对H_2O_2所致细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的比值下降。上述结果提示COS保护机制可能与其抗氧化、减轻脂质过氧化损伤以及抑制细胞凋亡有关。     

S100A8促进ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤

该文旨在探究S100A8蛋白在ox-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤中的生理功能及作用机制。通过体外建立ox-LDL诱导的HUVEC氧化损伤模型,用实时荧光定量PCR实验、蛋白质免疫印记实验分别检测S100A8的表达水平。通过转染对照siRNA和靶向S100A8的siRNA,敲低细胞中S100A8的表达,通过实时荧光定量PCR检测ICAM-1、VCAM-1和E-Selectin的m RNA表达水平来评估内皮细胞激活水平,用CCK-8实验检测细胞活性,用流式细胞术检测细胞凋亡水平和线粒体ROS积累水平。为了明确S100A8促进ox-LDL诱导的细胞氧化损伤的作用机制,用蛋白质免疫印记实验分析了敲低S100A8对SIRT6表达水平的影响,并通过RNA干扰敲低SIRT6,检测细胞活力和线粒体ROS积累情况。结果表明,在ox-LDL诱导的氧化损伤中,血管内皮细胞S100A8表达水平上调。敲低S100A8显著抑制了ox-LDL诱导的细胞的氧化损伤、细胞凋亡和线粒体活性氧积累;敲低S100A8增加了SIRT6的表达量;在细胞中同时敲低S100A8和SIRT6不能抑制ox-LDL诱导的细胞氧化损伤。...     

EGCG对H2O2诱导HLE细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨表没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人晶状体上皮(human lens epithelial,HLE)细胞氧化损伤的保护作用及可能机制。方法:HLE细胞传代培养,分为阴性对照组:以正常培养液培养;氧化损伤组:100μmol·L~(-1)的H_2O_2作用12 h;EGCG低浓度组:10μmol·L~(-1)EGCG孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h;EGCG高浓度组:100μmol·L~(-1)EGCG孵育24 h后,加入H_2O_2作用12 h。MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达。结果:EGCG能明显抑制H_2O_2诱导的HLE细胞活力的下降,用不同浓度EGCG处理后,HLE细胞活性分别提高到51.00%±2.37%和63.67%±2.29%,与氧化损伤组(40.33%±2.86%)比较差异具有统计学意义(P0.05);经不同浓度EGCG处理后,HLE细胞凋亡率分别下降至33.33±3.12%和22.80±1.67%,与氧化损伤组(43.03±2.43%)比较差异具有统计学意义(P0.05);此外,EGCG还能明显减少H_2O_2所致HLE细胞内caspses-3及caspase-9的表达。结论:EGCG通过抑制caspses-3及caspase-9的表达有效抑制了H_2O_2对HLE细胞的损伤,从而为其用于治疗HLE细胞损伤提供可靠的实验依据。     

复方龙脉宁不同提取液对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用

采用不同浓度H_2O_2处理H9c2心肌细胞,MTT法检测复方龙脉宁(Compound Longmaining,CLMN)水提液和醇提液含药血清(5%、10%、20%组)对氧化损伤的H9c2心肌细胞活性的影响,研究CLMN提取液对H_2O_2导致H9c2心肌细胞氧化损伤的修复作用。结果显示,当H_2O_2浓度为100μM,作用时间24 h,可建立稳定的H9c2心肌细胞氧化损伤模型;与对照组相比,经H_2O_2处理后的细胞活性明显下降,SOD活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,而用CLMN水提液和醇提液含药血清(10%、20%组)处理氧化损伤的H9c2心肌细胞,可显著提高细胞存活率及SOD活性,降低LDH活性和MDA含量。说明CLMN水提液和醇提液均对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化损伤具有很好的保护作用。     

芜菁中性多糖对PC12细胞氧化损伤保护作用机制的初步研究CSCD

以H_(2)O_(2)诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,研究芜菁中性多糖(neutral polysaccharide from Brassica rapa L.,BRNP)对PC12细胞氧化损伤保护及初步作用机制。采用CCK-8法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)检测H_(2)O_(2)对PC12细胞氧化损伤的保护作用;JC-1法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞线粒体膜电位的影响;Western blot法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,BRNP对PC12细胞无明显细胞毒性;H_(2)O_(2)的造模浓度和时间分别为300μmol/L、4 h;BRNP在一定程度上可减轻H_(2)O_(2)对PC12细胞的氧化损伤;BRNP可降低H_(2)O_(2)对PC12细胞线粒体膜电位的损伤;以不同剂量BRNP干预PC12细胞后,Bax、Caspase-3蛋白表达水平均有显著降低(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,BRNP能够改善H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化应激损伤及保护其细胞功能,其作用机制可能与抑制细胞内LDH生成、提高抗氧化酶活性及其凋亡蛋白表达水平有关。     

甘草次酸通过PI3K-AKT途径抑制H2O2所致大鼠心肌细胞氧化损伤

目的:研究甘草次酸对H_2O_2所致大鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法:采用H_2O_2处理建立H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型后,比较模型中ROS生成和细胞凋亡比例,使用不同浓度的甘草次酸孵育H9c2细胞24、48h后,通过流式细胞仪检测ROS的生成量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测凋亡率,蛋白质印迹法检测检PI3K、AKT1、p-AKT蛋白的表达。结果:H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中ROS生成和细胞凋亡率分别为(49.33±3.23)%和(33.89±1.45)%,与对照组相比有显著差异;100μmol/L和200μmol/L的甘草次酸作用24 h后,H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中表达ROS细胞的比例(35.39±1.24)%和(30.46±0.95)%,凋亡细胞比例分别为(29.47±3.15)%和(23.17±1.46)%,当作用48 h后,H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中表达ROS细胞的比例(42.67±1.89)%和(35.49±1.63)%,凋亡细胞比例分别为(40.22±3.06)%和(35.26±2.78)%,与对照组相比有显著性差异;使用渥曼青霉素后,各甘草次酸组的与对照组无显著性差异。结论:甘草次酸可能通过PI3K-AKT途径抑制H_2O_2所致大鼠心肌细胞氧化损伤。     

沙棘果油对过氧化氢诱导氧化损伤的保护作用

沙棘(Hippophae rhamnoides)是一种具有药用价值的植物,沙棘果油具有抗氧化、抗炎症及抗肿瘤等多种药理作用。为了探讨沙棘果油对H₂O₂造成氧化性损伤的细胞生长的影响及其抗氧化性,该研究选择H₂O₂对RAW264.7细胞氧化损伤模型,通过DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除实验检测沙棘果油体外抗氧化能力,用[3-(4,5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐]MTT法和流式细胞仪检测超氧化物阴离子荧光探针(DHE)信号,分别检测不同浓度沙棘果油对H₂O₂损伤细胞的存活率和超氧化物阴离子水平。结果表明:(1)在DPPH自由基清除实验中,当沙棘果油浓度小于4.9%时,沙棘果油的抗氧化能力大于维生素C。(2)通过MTT法发现,浓度为3.125%的沙棘果油对H₂O₂损伤细胞的存活率显著升高(P<0.01)。(3)从DHE检测发现,在同一检测时间点,随着沙棘果油浓度增加,DHE阳性细...