不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡miRNA组分的影响

胞外微囊泡(microvesicle,MV)通讯与微囊泡内容物组成相关。不同制备方法所获得的胞外囊泡具有差异性。该文分析了不同离心力对小鼠囊胚胞外微囊泡MV大小和miRNA组分的影响。分别以12 000×g、50 000×g、100 000×g超速离心的方法分离纯化小鼠d 3.5囊胚细胞胞外MV;粒度仪检测MV的粒径范围;荧光定量PCR进行MV的miRNA基因表达检测。结果显示,12 000×g离心力所制备的MV平均粒径是(444.5±258.7)nm,含有333个miRNA;50 000×g的MV平均粒径是(237.0±178.0)nm,含有339个miRNA;100 000×g MV平均粒径是(164.8±56.5)nm,含有335个miRNA。微囊泡的尺度和miRNA组分与离心力相关,不同离心力所获得的MV所含的miRNA种类及相同miRNA的丰度有差异。因此,不同离心力影响所制备小鼠囊胚MV大小和miRNA的组分。     

冠心病患者血清尿酸、高敏C 反应蛋白、纤维蛋白原水平变化 的临床研究

目的:观察冠心病患者血清中尿酸、高敏C反应蛋白、纤维蛋白原水平的变化.方法:选取2010年11月至2011年11月于我院就诊的68例冠心病患者(稳定型心绞痛21例,不稳定型心绞痛24例,急性心肌梗死13例)作为研究对象,并选取同期于我院体检中心体检的62例健康人为对照组,检测受试者血清中尿酸、高敏C反应蛋白、纤维蛋白原的水平.结果:研究组患者血清中UA、CRP和FBG水平显著高于对照组(P＜0.05).与稳定型心绞痛组比,不稳定型心绞痛的CRP水平增高(5.34±1.98 mg/L vs.11.36±2.73 mg/L,P＜0.05),急性心肌梗死组的UA (345.63±86.4 μmol/L vs.493.76±101.2 μmol/L,P＜0.05)、CRP (5.34±1.98mg/L vs.21.3±2.24 mg/L,P＜0.05)和FBG(3.86±1.34 g/L vs.6.85±2.36 g/L,P＜0.05)水平显著增高,与不稳定型心绞痛组比,急性心肌梗死组的UA(378.91±89.7 μmol/L vs.493.76±101.2 μmol/L,P＜0.05)、CRP(11.36±2.73 mg/L vs.21.3±2.24 mg/L,P＜0.05)和FBG(4.27±2.08 g/L vs.6.85±2.36 g/L,P＜0.05)水平显著增高(P＜0.05).结论:冠心病患者血清中尿酸、高敏C反应蛋白和纤维蛋白原的水平升高,3个指标可用于评估治疗效果和预后.     

补骨脂素对前列腺癌LNCap-AD细胞增殖的影响及其分子机制研究

目的观察补骨脂素对体外培养的前列腺癌LNCa P-AD细胞增殖的抑制作用,并探讨补骨脂素抑制前列腺癌的作用机制。方法体外培养前列腺癌LNCa P-AD细胞,加入不同浓度的补骨脂素,CCK-8法检测细胞增殖抑制率、实时荧光定量PCR检测细胞AR m RNA的表达、Western Blot检测细胞PCNA和AR蛋白表达。采用单因素方差分析进行组间均数比较。结果与对照组相比,30、50、100μg/ml补骨脂素组LNCa P-AD细胞存活率均明显下降(P0.05),补骨脂素对LNCa P-AD细胞增殖的抑制作用呈浓度-时间依赖性。实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组(1.00±0.00)相比,30μg/ml组AR m RNA表达上调(1.63±0.04,t=17.72,P0.01),50μg/ml组AR m RNA表达无明显变化(0.98±0.04,t=0.66,P=0.53)、而100μg/ml组的AR m RNA表达则明显降低(0.46±0.07,t=15.18,P0.01)。Western blot法检测结果显示,30μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的补骨脂素干预48 h后,LNCa P-AD细胞PCNA蛋白表达均显著降低(11.88±0.21 vs 10.61±0.17 vs 6.62±0.13 vs 2.71±0.43,F=68.53,P0.01)。100μg/ml的补骨脂素可明显降低LNCa P-AD细胞AR蛋白的表达水平(0.43±0.06 vs 0.87±0.04,t=6.04,P0.01)。结论补骨脂素能在体外抑制前列腺癌LNCa P-AD细胞增殖,且呈剂量-时间依赖性,其机制可能与其下调LNCa P-AD细胞PCNA表达和影响AR表达有关。     

睾酮对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白-A mRNA表达的影响

目的:观察睾酮对内皮细胞妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)m RNA表达的影响。方法:人原代脐静脉内皮细胞,选择第3~4代生长状态良好的细胞用于实验。实验分组:1空白对照组;2肿瘤坏死因子(TNF)-α(终浓度100μg/L)培养细胞组;3TNF-α(终浓度100μg/L)及睾酮1×10-8mol/L培养细胞组;4睾酮1×10-8mol/L培养细胞组。实验结束后收集各组细胞,用RT-PCR方法检测各组细胞PAPP-A m RNA表达水平。结果:TNF-α作用2 h后,内皮细胞中PAPP-A m RNA表达水平升高(P0.05),且随TNF-α作用时间的延长,PAPP-A表达逐渐升高,在16小时达高峰;睾酮作用后,PAPP-A m RNA表达水平较TNF-α组明显降低(P0.01)。结论:TNF-α上调内皮细胞PAPP-A m RNA的表达,而睾酮抑制了TNF-α对PAPP-A分泌增加的刺激作用。     

初发高血压患者血压昼夜节律变化与尿微量白蛋白的关系

目的:探讨初发高血压病患者血压昼夜节律变化与尿微量白蛋白的关系.方法:将186例初发原发性高血压病患者按照24h动态血压检测结果分为A、B两组:A组为杓形组,共71例;B组为非杓形组,共115例,分别检测血清超敏C反应蛋白和尿微量白蛋白水平.结果:B组的的超敏C反应蛋白水平明显高于A组[(6.97±13.17)mg/L与(2.34±1.49)mg/L(P＜0.01)],B组的尿微量白蛋白水平明显高于A组[(21.08±3.97)μg/mL与(11.14±3.32)μg/mL,P＜0.01](P＜0.01).结论:初发高血压病患者血压昼夜节律变化与炎症反应、尿微量白蛋白关系密切.     

肠内营养联合微生态制剂对慢性阻塞性肺疾病机械通气患者的影响

目的探讨肠内营养联合微生态制剂对慢性阻塞性肺疾病急性加重机械通气患者消化道并发症、肠黏膜屏障功能、炎症反应的影响。方法 2015年1月至2016年12月收治的慢性阻塞性肺疾病急性加重机械通气患者96例,按照随机数字表法分为对照组(肠内营养组)和试验组(肠内营养联合微生态制剂组),每组各48例。比较两组患者消化道并发症、APACHEⅡ评分、机械通气时间、14d内撤机成功率和住院天数。酶学分光光度计法测定血清二胺氧化酶和肠型脂肪酸结合蛋白浓度。双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测血清前降钙素原和C-反应蛋白浓度。结果肠内营养实施14d内,试验组胃潴留、腹胀、腹泻的发生率明显低于对照组(P0.05);与对照组比较,试验组在肠内营养后第7天肠黏膜屏障功能指标二胺氧化酶(DAO)和血清肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)表达降低(DAO:5.25±0.37mg/Lvs 6.93±0.58mg/L,t=4.8950,P=0.0328;I-FABP:31.89±3.05μg/Lvs40.62±4.63μg/L,t=13.7481,P=0.0047);血炎症细胞数和血清炎症因子表达明显降低(WBC:11.14±0.83×109/Lvs 3.78±0.94×109/L,t=8.8832,P=0.0163;中性粒细胞比例(N%):74.09±1.94%vs 78.64±2.68%,t=4.3332,P=0.0353;PCT:6.70±0.61μg/L vs 8.80±0.93μg/L,t=6.1109,P=0.0280;CRP:111.45±12.29mg/L vs 143.80±13.33mg/L,t=15.3342,P=0.0014)。肠内营养联合微生态制剂能有效改善COPD急性加重机械通气患者病情,在第14天APACHEⅡ评分低于对照组(12.52±1.19 vs 14.69±1.34,t=6.7432,P=0.0421)。结论对于慢性阻塞性肺疾病急性加重机械通气患者,肠内营养联合微生态制剂能够有效降低患者消化道并发症发生率,改善肠黏膜屏障功能,抑制炎症反应,进而改善患者病情,值得临床推广使用。     

灵芝悬浮培养中添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响

灵芝酸是灵芝中重要的药理活性物质,其低产量限制了它的广泛应用和深入研究,高效提高液体发酵中灵芝酸的含量十分必要。以CGMCC 5.65为材料,在悬浮培养条件下,研究添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响。结果表明,微颗粒Talc添加显著减小了灵芝细胞粒径,对照组为(3.33±0.16)mm,15g/L微颗粒Talc添加组为(2.04±0.12)mm。灵芝细胞中单体灵芝酸和总灵芝酸的含量在微颗粒Talc添加条件下也显著提高。15g/L微颗粒Talc添加组的总灵芝酸含量达到(1.51±0.02)mg/100mg细胞干重,GA-Mk、GA-T和GA-Me的含量最高为(6.02±0.29)、(5.08±0.14)和(1.71±0.09)μg/100mg细胞干重,分别是对照的1.6、4、1.9和1.4倍。另外,15g/L微颗粒Talc添加条件下鲨烯和羊毛甾醇的最大积累量分别为(3.69±0.23)和(34.86±6.41)μg/100mg细胞干重,是对照的2.6和4.2倍;灵芝酸生物合成途径关键基因fps和cyp-5150l8的表达量最高为对照的2.35和1.53倍。     

骨髓间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的探讨采用骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对急性肝功能衰竭(ALF)大鼠模型的血清和肝脏组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法将90只健康雌性SD实验大鼠按照随机表法分为空白对照组、ALF组以及BMSC移植组,其中ALF组和BMSC移植组的ALF大鼠模型采用900 mg/kg D-Gal N+10μg/kg脂多糖腹腔注射建立;BMSC移植组在900 mg/kg D-Gal N+10μg/kg脂多糖腹腔注射后2 h,予以尾静脉注射BMSC悬液1 ml(1.0×10~7/ml)。三组大鼠均在12、24、72 h时间点取血液及肝组织标本,检测大鼠血清ALT和AST,ELISA法检测血清HMGB1表达量,采用苏木素-伊红染色法观察肝组织病理变化,对肝组织HMGB1的表达水平应用免疫组化法进行检测,RTPCR法检测肝组织HMGB1 m RNA。三组大鼠血清生化指标、血清HMGB1浓度以及肝组织HMGB1 m RNA、HMGB1蛋白相对表达量的不同组别之间的比较采用随机区组设计的方差分析,不同组别的大鼠24 h存活率采用秩转换后的方差分析。结果采用900 mg/kg D-Gal N+10μg/kg脂多糖腹腔注射的方法可成功诱导ALF模型。ALF组大鼠血清ALT、AST水平随病程逐渐升高,在移植后72 h,BMSCs移植组的血清ALT水平明显低于ALF组[(163.5±31.6)vs(639.0±69.8)U/L,P0.01],血清AST水平与ALF组相比差别也有统计学意义[(172.8±55.7)vs(724.3±48.8)U/L,P0.01]。空白对照组血清HMGB1浓度、肝组织HMGB1 m RNA表达以及肝组织HMGB1蛋白表达在各时间点均较低,ALF组及BMSC移植组上述指标造模成功后均在较高水平,ALF组随时间延长而升高,移植组在BMSC移植后随时间延长逐渐下降。BMSC移植组在移植后24、72 h与ALF组相比血清HMGB1浓度差异具有统计学意义[(146.8±35.2)vs(290.4±30.9),(90.6±17.4)vs(486.5±57.2)ng/ml,P均0.01];肝组织HMGB1 m RNA表达差异具有统计学意义[(0.8±0.2)vs(1.2±0.3),(0.6±0.2)vs(1.4±0.1),P均0.01];肝组织HMGB1蛋白表达差异具有统计学意义[(3.8±2.2)vs(6.2±1.6),(2.6±0.8)vs(8.5±3.0),P均0.01]。移植后24 h,空白对照组、ALF组、BMSC移植组大鼠死亡率组间比较差异有统计学意义(χ~2=21.098,P0.01)。结论 BMSC移植可以改善ALF大鼠的肝功能以及肝脏病理,同时降低ALF大鼠血清及肝组织中HMGB1的表达。     

响应面法优化短短芽胞杆菌ch2-22的发酵工艺

在摇瓶发酵条件下,优化提高短短芽胞杆菌ch2-22芽胞浓度和抑菌活性的发酵培养基和培养条件。首先在单因素试验基础上进行响应面设计对ch2-22的发酵培养基进行优化,然后使用单因素试验方法确定最佳发酵条件,得到优化发酵培养基为淀粉35.05 g/L,豆饼粉26.08 g/L,蔗糖10 g/L,鱼粉5 g/L,Na Cl 1 g/L,Mg SO40.3 g/L,(NH4)2SO43 g/L,Mn SO40.1 g/L,K2HPO43 g/L,酵母膏1 g/L,Ca CO32 g/L。培养条件为温度32℃,转速180 r/min,装液量100 m L/500 m L,接种量4%,初始pH为7.0,发酵时间45 h。优化后的芽胞数量达到8.1×109cfu/m L,与优化前的芽胞数量(1.6×109cfu/m L)相比,提高了3.7倍,优化后发酵液效价达到3 350 IU/m L,提高了109%,高于同类菌株的2 000 IU/m L。     

胞外囊泡表面糖缀合物研究进展

胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是一类由细胞分泌到胞外的能够被受体细胞摄取的膜性囊泡小体,直径在20~1 000 nm.近年来,越来越多的研究者发现胞外囊泡在疾病诊断、预后评估以及药物递送等方面具有重要的生物学作用.胞外囊泡可以直接参与细胞间信息的传递以及物质的运输,其携带的核酸(m RNA,micro RNA和lnc RNA)和蛋白质可以影响受体细胞的生理状态.大量研究表明,胞外囊泡是被糖基化修饰的,胞外囊泡表面覆盖了大量的聚糖以及糖结合蛋白,而已知聚糖类物质在调控细胞黏附、细胞-细胞之间的信息传递、细胞和细胞外基质相互作用、免疫调节和肿瘤转移等方面发挥重要的作用.本文综述了近年来细胞外囊泡表面糖缀合物修饰的前沿研究,以期更好地理解聚糖在胞外囊泡的合成、释放以及运输过程及其生物学功能中的作用.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism