黑鹿(Muntiacus. crinifrons)染色体的多态及着丝粒的研究

近十多年来,由于显带技术的广泛应用,揭示了同种异体之间染色体的多态现象,除着丝点融合或断裂是染色体数目多态的原因外,也有因异染色质差异而形成的多态。如王宗仁等(1981)、Maia等(1981)用G显带技术,分别在鹿属动物及啮齿类中观察到染色体的多态现象,Murray等(1980)用C显带技术在有袋类中,不仅观察到着丝点融合现象,亦看到异染色质差异的多态。本文报导了我国特有动物——黑麂染色体的多态现象及众多的双着丝点染色体。     

黑麂(Muntiacus crinifrons Sclater)的繁殖

黑麂是我国特有的鹿科动物。仅分布皖南、浙西及与之接壤的闽、赣部分地区,从北纬28°-31°,东径117°-120°的37个县的范围内(Sheng et,L,1980)。由于黑麂数量稀少,且栖居中山密林,活动隐蔽,因而以往对它的繁殖情况一无所知。为保护和利用这一特产动物资源,我们于1978年1月至1981年2月,对黑麂的繁殖进行研究。     

不同培养液对黑麂Muntiacus.crinifrons成纤维细胞生长的影响

黑麂是我国特有的哺乳动物,具较少的染色体数目 (2n=9,♀8),因而是辐射生物学、细胞遗传学、遗传毒理学等研究的较好材料。 细胞离体培养时,多种不同的因素会影响细胞的生长和功能,也会导致细胞的不稳定和使细胞发生变异。因此,培养液的组成,底物的类型,细胞的种类和密度等因素都会影响细胞的寿命和改变其行为特征。不管组织细胞培养的方式如何,体外培养最关键的变化就是培养液。一种细胞适应于某种培养液,不一定适宜另一种培养液。所以,根据不同实际需要,应选择最适宜的培养液。本工作对黑麂成纤维细胞在不同培养液中的生长特性作了比较详细的研究。     

妊娠黑麂（Muntiacus crinifrons）大体解剖分析

为黑麂的保护和人工繁殖提供生物学资料,对一只因盗猎致死的妊娠黑麂进行了解剖。其特点是：上腭有15排腭褶;上颌右侧犬齿脱落,前臼齿和臼齿的齿冠磨损较严重,齿式为0·1·3·3/3·1·3·3=34;瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃容积分别为71.6%、9.4%、11.4%、7.6%;小肠7248 mm、大肠5269 mm,分别是体长的6.9倍和5.0倍;肝3叶,重598.5 g,无胆囊;左肺3叶,右肺4叶,重474.4 g;心脏重184 g,占身体总重量的0.8%;双角子宫,胚胎重98.5 g,长14.8 mm,胚体弯曲呈＂C＂形,眼泡明显,鼻窝、耳泡、鳃弓、肢芽出现。     

黑麂(Muntiacus crinifrons)细胞系的建立及其细胞生长特性和细胞遗传学分析

黑麂是我国特有的动物,其染色体大而数少(2n=8♀,2n=9♂),并且有三对大小相近,形态相似的染色体(早性6条,♂性5条)(段幸生等,1984)。由于上述特点,它可能是研究染色体结构与功能,特别是着丝点结构与功能研究的好对象,亦是辐射生物学,遗传毒理学,细胞杂交等研究的好材料。我们所建立的黑麂(♀)胚胎肺组织成纤维二倍体细胞系命名为KIZ—8102。已对其部分生物学特性进行了研究。     

黑麂（Muntiacus crinifrons）3个种群的遗传多样性

黑麂,为我国特有动物,被公认为目前世界上最珍稀的鹿科动物之一.为了更好地保护黑麂这一珍稀的濒危野生动物,基于黑麂线粒体控制区序列对遂昌分布中心的3个黑麂种群的遗传多样性和基因流进行了研究.结果显示,3个种群的36个个体中有13个变异位点,占分析序列长度的2.71%,且这13个变异位点皆为碱基置换,并未出现碱基插入或缺失的现象,并由此定义了12个单倍型.遗传多样性检测结果显示遂昌种群具有最高的遗传多样性,应予以优先保护.从Tajima′s D和Fu and Li′s D值的估算结果来看,这3个黑麂种群相对于中性进化的歧异度并没有明显的偏离(P＞0.1),没有明显的证据显示这3个黑麂种群间存在很强的平衡选择.3个种群间基因流 Nm均大于1,这3个黑麂种群间存在着较为丰富的基因流.3个黑麂种群单倍型间的序列差异为0.009,这表明这3个黑麂种群的单倍型未出现分化.     

麂属(Muntiacus)的分类及其系统发育研究

麂属(Muntiacus)是一群中小型草食有蹄类,为东洋界的特有属,是典型的热带、亚热带类群。在我国,麂属的分布仅限于长江流域及其以南各地,为我国南方的重要毛皮兽。 以往对麂属的研究多限于一般的形态分类,对其系统发育尚未深入研究。在种级分类上至今还存在一些混乱现象。本文试图用分支系统学(Cladistics)的方法,对麂属的种级分化进行系统整理,并对其系统发育作一初步探讨。     

我国西藏的菲氏麂(Muntiacus feae)

菲氏麂数量稀少,至今对它仍很少了解。Leonardo Fea于1887年3月27日在缅甸的丹那沙林(Tenasserin)山区采集到1头雄性菲氏麂后,Thomas和Doria于1889年首次作了极其简单的报道;1892年Thomas根据这件标本又作了较详细的描述。直至1977年,Grubb才对一直保存在意大利热亚那自然博物馆的头骨进行了详细报道。1914年,Gairdner在丹那沙地区又获得1张菲氏麂皮,那是被豹咬死后又被当地居民吃剩的残皮,这是第二次记录。第三次记录是Sokolov(1957)报道他于1956年7月15日,在我国云南省南部的金平县和屏边县附近得到的1张不完整的皮。     

正常人各年龄组染色体着丝粒点(Cd)研究

本文运用本室改良的Cd-NOR银染技术对80例4个年龄组的正常中国人的Cd变化进行了较系统的研究, 结果表明:(1)正常人随年龄增加,Cd消失的频率、Cd变异及Cd-NOR融合频率也相应增加,特别是Ⅲ、Ⅳ组(中、老年组)增加的频率尤为显著;(2)首次对Cd消失的过程提出了独特的观点,即Cd消失首先表现为Cd变小, 随着变小程度的加大,最终导致Cd消失;(3)在本研究中首次观察到单个Cd的现象,作者认为是细胞分裂中期染色体着丝一分为二的延迟现象。各年龄组间单Cd出现频率无统计学差异,同一年龄组中,2号染色体和1号染色体上单Cd出现频率显著高于理论值;(4)随年龄增高,Cd各项观察值的增高在男性与女性间未见明显的差异。 Abstract:The Cd variation of human chromosome in four groups of different age has been investigated.The result shows that the frequencies of Cd disappearing,size variation and Cd-NOR fusion increased with the age rising,especially in the group of aged people.We suggest that the variation of Cd shows the size changes first,and then disappears completely.We also observed some cells in which a few chromosomes shows only a single Cd in centromeric region.Cd variation in different age groups has no significant difference between the male and the female.     

宁夏兽类新纪录——小麂 (Muntiacus reevesi Ogilby, 1839)

During the camera-trapping survey at Wanghuannan, Erlonghe and Hongxia Forest Farms in the Liupan Mountain National Nature Reserve in Guyuan City, Ningxia Hui Autonomous Region, 49 independent detections of Reeve’s muntjac, Muntiacus reevesi were captured by eight infrared-triggered camera-traps with 274 photographs and 12 video clips from July, 2017 to August, 2018. The Reeve’s muntjac is an endemic species of China and mainly distributed in south China, such as Jiangxi, Guangdong, Guangxi, Hunan, Hubei, Yunnan, Sichuan, Guizhou and Taiwan Provinces, and also distributed in Shaanxi and Gansu Provinces adjacent to Ningxia Hui Autonomous Region. This species was for the first time recorded in Ningxia Hui Autonomous Region, so its distribution range has been expanded in China. This discovery has enriched the distribution information of Reeve’s muntjac. This discovery will also play an important role in the study of biodiversity and species integrity in the area of Liupan Mountain.     

麂属(Muntiacus)动物MDR-1基因序列分析及其分子进化关系

对麂属（Muntiacus)中的3种动物：赤麂（M.muntjak)(2n-6♀,7♂）,小麂（M.reevesi)(2n=46),黑麂（M.crinifrons(2n=8♀,9♂）MDR－1基因（multidrug resistance,多药耐药基因）726bp左右的片段进行了序列分析并根据序列信息建立分子系统树,同时探讨了这3种动物的起源,分类地位及进化关系。     

黑麂和费氏麂四种卫星DNA的克隆特征和染色体定位(英文）

近年来,分子细胞遗传学研究已基本证实了染色体的串联融合(端粒－着丝粒融合)是麂属动物核型演化的主要重排方式。尽管染色体串联融合的分子机制还不清楚,但通过染色体的非同源重组,着丝粒区域的卫星DNA被认为可能介导了染色体的融合。以前的研究发现在赤麂和小麂染色体的大部分假定的串联融合位点处存在着非随机分布的卫星DNA。然而在麂属的其他物种中,这些卫星DNA的组成以及在基因组中的分布情况尚未被研究。本研究从黑麂和费氏麂基因组中成功地克隆了4种卫星DNA（BMC5、BM700、BM1.1k和FM700）,并分析了这些卫星克隆的特征以及在小麂、黑麂、贡山麂和费氏麂染色体上的定位情况。结果表明,卫星I和II DNA (BMC5, BM700和FM700)的信号除了分布在这些麂属动物染色体的着丝粒区域外,也间隔地分布在这些物种的染色体臂上。其研究结果为黑麂、费氏麂和贡山麂的染色体核型也是从一个2n＝70的共同祖先核型通过一系列的串联融合进化而来的假说提供了直接的证据。     

正常人胚胎绒毛细胞染色体着丝粒点(Cd)变异的研究

我们采用Cd-NOR同步银染技术,首次对正常人胚胎绒毛细胞染色体着丝粒点(Cd)变异作了研究,并将绒毛细胞染色体Cd变异与正常人外周血淋巴细胞体染色Cd变异进行了对比。在本研究中,我们观察到某些染色体存在Cd迟滞复制现象,并对此作了讨论。 Abstract:Centromeric dots(Cd)variation of chorion tissue chromosomes were studied by a simultaneous silver staining of both NOR and Cd.Comparison analysis of Cd variation for the chorionic villus samples and peripheral blood samples were carried out.We observe an event of Cd delaying reproduction and discuss the relation between the event and X chromosome delaying reproduction as well as chromosomeal nondisjunction.     

黑麂和费氏麂四种卫星DNA的克隆特征和染色体定位

近年来,分子细胞遗传学研究已基本证实了染色体的串联融合(端粒-着丝粒融合)是麂属动物核型演化的主要重排方式。尽管染色体串联融合的分子机制还不清楚,但通过染色体的非同源重组,着丝粒区域的卫星DNA被认为可能介导了染色体的融合。以前的研究发现在赤麂和小麂染色体的大部分假定的串联融合位点处存在着非随机分布的卫星DNA。然而在麂属的其他物种中,这些卫星DNA的组成以及在基因组中的分布情况尚未被研究。本研究从黑麂和费氏麂基因组中成功地克隆了4种卫星DNA(BMC5、BM700、BM1.1k和FM700),并分析了这些卫星克隆的特征以及在小麂、黑麂、贡山麂和费氏麂染色体上的定位情况。结果表明,卫星I和IIDNA(BMC5,BM700和FM700)的信号除了分布在这些麂属动物染色体的着丝粒区域外,也间隔地分布在这些物种的染色体臂上。其研究结果为黑麂、费氏麂和贡山麂的染色体核型也是从一个2n=70的共同祖先核型通过一系列的串联融合进化而来的假说提供了直接的证据。     

黑麂Y染色体的鉴别和Sry基因的克隆及定位

以流式细胞仪分离小麂(Muntiacus reevesi)Y染色体和黑麂(Muntiacus crinifrons)Y1,Y2,X+4和1号染色体,利用DOP-PCR技术富集了分离的各单条染色体。然后,将小麂的Y染色体的DOP-PCR产物经Cy3标记后直接作为涂染探针,应用染色体涂染技术与雌雄黑麂的核型标本进行杂交,确认了黑麂真正的Y染色体为Y2染色体。再以黑麂的Y1,Y2,X+4和1号染色体的DOP-PCR产物为模板,用人的特异性的SRY（sex determining region of the Y chromosome）基因引物对其进行扩增,结果表明黑麂只有Y2染色体出现了SRY扩增片段。然后扩增产物克隆和测序,比较它与人的同源性,初步把黑麂的Sry基因定位在Y2染色体上。最后提取雄性黑麂的基因组DNA,并用同一对引物对其进行扩增,亦得到Sry基因的片段,对此扩增片段进行克隆,测序,结果表明其与Y2染色体得到的Sry基因片段完全一样,与人SRY基因的同源性均为83%。 Abstract：The single Y chromosome of Muntiacus reevesi and Y1,Y2 ,X+4,1 chromosome of Muntiacus crinifrons were obtained by flow-sorting ,then they were amplified through DOP-PCR . After that, the metaphase karyotype of Muntiacus crinifrons were painted by using the product of the DOP-PCR of the Y chromosome of Muntiacus reevesi as a special probe and the result showed that Y2 chromosome was the real Y chromosome of Muntiacus crinifrons. Secondly the product of the DOP-PCR of Y1,Y2,X+4,1 chromosome of Muntiacus crinifrons were used as the templates of the next amplification using the special primer devised according to the human SRY gene .One band was obtained only from Y2 chromosome, then it was cloned to the T-vector and sequenced. The Sry gene sequence of Muntiacus crinifrons was acquired and the conclution was that there are 83% homology between the human and Muntiacus crinifrons. It was testified that in all mammal Sry gene is consertive. On the other side the Sry gene was located to the Y2 chromosome of the Muntiacus crinifrons.     

黑麂的核型

我们在进行麂属核型进化的研究过程中,发现我国特有动物—黑麂(Muntiacus crinifrons)的染色体数目较少,比已知脊椎动物中,染色体数最少的赤麂(Muntiacus muntjak vaginalis)略多,与Wurster等(1972)报导的一头捕自马来西亚的雌性赤麂(Muntiacus,muntjak muntjak)的染色体数目相同,但形态有差异。现简报如下。 材料和方法 雌性:用肺成纤维细胞培养法,在含有15％小牛血清的F_(12)培养基中培养,温度38℃。终止培养前4小时加入秋水仙素,用胰酶消化法收获细胞,细胞悬浮在0.075M的氯化钾液中低渗15分钟,用甲醇—冰乙酸(3:1)液固定30分钟(每次15分钟)。空气干燥法制片。Giemsa染色。测量计算10个中期分裂相,按Leven等(1964)的标准进行染色体分组。     

麂属(Muntiacus)动物线粒体12SrRNA和细胞色素B基因序列分析及其分子进化关系

对麂属（Muntiacus)中的3种动物;赤麂（M.muntjak)（2n=6♀,7♂）,小麂（M.reevesi)(2n=46）,黑（M.crinifrons(2♀,9♂）线粒体DNA12SrRNA和细胞色素B783bp左右的片段进行序列分析,并根据序列信息建立分子系统树,同时探讨了这3种动物的起源,分类地位及进化关系。     

黑麂睾丸及精子的形态学观察

研究了成年雄性黑麂(Muntiacus crinifrons)的睾丸和附睾尾精子形态.Gimsa染色后在显微镜下观察了黑麂精子的顶体形态,统计了顶体畸形和原生质滴存在情况,并与成年黄淮山羊(Copra hircus)的睾丸进行了对比.结果发现.黑麂睾丸长轴4.25 cm,短轴2.05 cm,明显低于成年黄淮山羊睾丸.黑麂精子长54.80 μm,顶体呈圆柱形,顶体约覆盖精子头部的2/3,这个比例明显高于黄淮山羊.黑麂精子畸形率为21.50%,附睾尾部的精子活力为0.20,附睾尾精子原生质滴率为30.17%,顶体异常率为30.50%,与黄淮山羊基本接近.本实验为进一步研究黑麂的繁殖性能和保护提供了参考.     

小麂、黑麂、赤麂精母细胞联会复合体的比较研究

本工作以界面铺张——硝酸银染色技术,对小麂(Muntiacus reeuesi)、黑麂(M.crinifrons)和赤麂(M.muntjak)的精母细胞联会复合体(Syna ptonemal complex,SC)进行亚显微结构的比较研究。结果表明: 1.SC的平均相对长度和臂比指数同有丝分裂细胞相应染色体的数值有很好的一致性。根据SC的相对长度和臂比指数绘制了三种麂的SC组型图。雄性黑麂减数分裂前期形成一个复杂的易位多价体,意味着其核型的演化过程涉及两次染色体易位和一次臂间倒位。 2.在减数分裂前期,性染色体的形态和行为同常染色体的有明显差异,如性染色体嗜银性较强,配对延迟等。XY的配对起始于早粗线期,在中粗线期,Y的全长均同X配对;XY-SC开始解体于晚粗线期。 3.在粗线期,X染色体未配对区域出现自身折叠,形成“发夹”状结构。这种“发夹”结构的形成,可能是在性染色体的进化过程中,X染色体通过不对称易位得到的重复片段在减数分裂前期同源配对的一种细胞学表现。     

浙江黑麂栖息地评价及保护对策

运用地理信息系统技术,在分析黑麂栖息地的地形、植被、水系和人为干扰等地理特征的基础上,系统研究九龙山和古田山自然保护区黑麂栖息地分布、栖息地质量与空间格局。结果表明,在九龙山自然保护区有黑麂潜在栖息地3172．6hm^2,由于人类活动的影响导致栖息地丧失501．5hm^2,目前尚存的黑麂适宜栖息地2671．1hm^2。它们主要分布于上寮坑、九龙山、内北坪、外九龙和大岩前附近区域。古田山自然保护区有黑麂潜在栖息地4635．75hm^2,在人类活动影响下丧失栖息地1118．11hm^2,目前尚存的黑麂适宜栖息地3517．64hm^2。它们主要分布于青尖、古田山、巧观尖、催顶尖附近区域。目前九龙山和古田山自然保护区内的黑麂栖息地基本上处于多斑块破碎化状态。为了使黑麂能得到更好的保护,对这两个研究区域黑麂栖息地的恢复和重建工作亟待加强。