RT-PCR检测庚型肝炎病毒的研究

ＲＴ－ＰＣＲ检测庚型肝炎病毒的研究王孝华王健梅［１］林玉兵［２］陈禹保［２］孙钦喜［３］［１］湖南师大生物系［２］北京科海医疗生物工程公司［３］山东潍坊人民医院（湖南省临床检验中心,长沙４１０００６庚型肝炎病毒是Ｓｉｍｍｏｎｓ等于１９９５年证实的一种非Ａ－Ｅ型肝炎病毒［１］。随后在我国也证实有庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）存在［２］。有资料表明,ＨＧＶ在美国供血员中的流行情况较ＨＣＶ严重,并且与供血...     

有序差异显示:一种基因表达谱系统比较法

系统研究具有同一基因组的各种细胞群之间基因的差异表达谱十分重要。目前,研究基因差异表达的技术大致有ｍＲＮＡ差异显示［１］、ＲＤＡ［３］、ＳＳＨ［４、５］和ｃＤＮＡ阵列［６］等。近几年,还发展了一些研究基因差异表达谱系统的技术,如ＲＬＣＳ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｌａｎｄ－ｍａｒｋｃＤＮＡｓｃａｎｎｉｎｇ）［８］、ＧＥＦ（ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ－ｓｉｏｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ）［２］和ＲＮＡ指纹法［９］等。然而,这些技术或较为复杂,或灵敏度偏低。本文拟介绍一种有效的基因表达谱系统比较法——有序差…     

药物诱导后的人大肠癌细胞的[Ca^2＋]i的变化

采用荧光分光光度计法检测维甲酸（ＲＡ）、１,２５（ＯＨ）２ＶＤ３及佛波酯（ＰＭＡ）诱导ＣＣＬ２２９细胞分化后［Ｃａ２＋］ｉ变化,并观察内质网（ＥＲ）特异的Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ（ＴＧ）、ＩＰ３受体抑制剂Ｈｅｐａｒｉｎ对ＲＡ诱导［Ｃａ２＋］ｉ变化的影响,从而探讨ＲＡ诱导［Ｃａ２＋］ｉ变化与ＥＲ的关系。结果显示：ＲＡ和１,２５（ＯＨ）２ＶＤ３在数秒内引起［Ｃａ２＋］ｉ显著升高。在ＥＧＴＡ和Ｖｅｒａｐａｍｉｌ预处理细胞条件下,ＴＧ不能抑制ＲＡ引起Ｃａ２＋从细胞内钙池中外流,ＲＡ作用后ＴＧ仍能升高［Ｃａ２＋］ｉ。另外,Ｈｅｐａｒｉｎ也不能完全抑制ＲＡ升高［Ｃａ２＋］ｉ。提示ＲＡ诱导大肠癌细胞升高［Ｃａ２＋］ｉ可能通过ＥＲ上ＩＰ３敏感性和非敏感性钙池,亦可能细胞内存在除ＥＲ外对ＲＡ敏感的钙池。     

除草剂阿特拉津生物降解研究进展

阿特拉津（Ａｔｒａｚｉｎｅ）又称氯乙异丙嗪［２－氯－４（乙基）－６－（异丙氨基）－１,３,５－三嗪］,商品名莠去津,是一种广泛使用的三嗪类除草剂,用于阔叶杂草和禾草的防除,如玉米、高梁、甘蔗和库区杂草等。阿特拉津虽然是一种低毒除草剂,但由于它被微生物矿化的过程十分缓慢,在土壤中的半存留期长达４-５７周,所以在施用过这种除草剂的土壤中以及地下水和表面水中,其浓度远远超过３ｐｐｂ的最大允许值,造成对环境的污染［１］。阿特拉津在世界范围内已经使用了近４０年,其在环境中的扩散引起广泛重视,因此研究这种化合物的生物降解机理十分必要。虽然自１９８２年以来先后在诺卡氏菌属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）［２,３］、红球菌属（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｕｓ）［４,５］、不动杆菌属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）［６］、土壤杆菌属（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）［７］和假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）［１,８,９］等多个细菌属中分离到降解阿特拉津的菌株,但直到９０年代中期,对这一生物降解过程所涉及到的基因、酶和中间代谢物仍知之甚少。自１９９５年Ｗａｃｋｅｔ实验室从施用过阿特拉津的土壤中分离到假单胞菌ＡＤＰ菌株以后［１］,阿特拉津的生物降解机理研究获得了迅速发展。此后,又从根瘤菌属（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）［１０］以及棍状杆菌属（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ）、产碱杆菌属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｓ）［１１］和Ｒａｌｓｔｏｎｉａ等多个细菌属中分离到降解阿特拉津的细菌。本文主要对假单胞菌ＡＤＰ菌株降解阿特拉津的酶学、遗传学和生物工程研究概况作简要介绍 。     

凝血酶对荧光标记的人单个血小板游离[Ca^2＋]和膜电位的动态影响

本文将ｆｌｕｏ－３和ｄ_ｉ－ＢＡ－Ｃ４（３）荧光标记的血小板固定于纤维蛋白原表面,以５７０型粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）动态观察了凝血酶激活的人单个血小板细胞内游离［Ｃａ~（２＋）］（钙离子浓度）和膜电位的变化。静息状态时细胞游离［Ｃａ~（２＋）］和膜电位荧光较低,波动不明显。当加入０．１Ｕ／ｍｌ凝血酶激活时,［Ｃａ~（２＋）］（细胞内游离钙离子浓度）与膜电位迅速升高,随后［Ｃａ~（２＋）］出现反复振荡,幅度达约５００荧光单位,而膜电位基本上保持峰值水平。［Ｃａ~（２＋）］_ｉ升高与膜电位变化在时间和程度上不一致。本文结果提示,凝血酶引起血小板［Ｃａ~（２＋）］振荡和膜去极化,后者不是Ｃａ~（２＋）内流引起的。     

尖吻蝮蛇出血毒素Ⅲ三维荧光光谱研究

蛇毒中含有多种金属蛋白质,它们具有不同的生物学活性,如抗凝血因子（ＡＣＦ）、糖苷水解酶（ＮＡＤａｓｅ）、纤溶组分（ＦＰ）及出血毒素等,它们的许多生物活性、荧光光谱和结构的性质等方面的研究已见报道［１］．徐洵等［２］从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离出３种出血毒...     

银杏叶提取物黄酮甙的HPLC测定中Q,K,I响应因子的确定

银杏叶提取物黄酮甙的ＨＰＬＣ测定中Ｑ、Ｋ、Ｉ响应因子的确定杜方麓曾建国陈宇飞熊晓伟候团章（湖南中医学院（湖南华湘进出口集团（湖南宏生堂药物研究所）有机植化教研室）宏生药业公司）银杏叶提取物的黄酮甙含量测定方法报导已有很多［１］,最近有人提出［２］在测...     

高必需氨基酸转基因马铃薯的研究

８０年代以来,马铃薯遗传转化系统日趋成熟,转基因工程植株已被广泛应用于基础科学研究［１］。作为食物蛋白和能量主要来源的马铃薯,提高其蛋白质含量及质量的遗传工程研究正受到人们的普遍关注［２］。Ｙａｎｇ等［２］将旨在改善氨基酸平衡的ＣＡＴ－ＨＥＡＡＥ（氯酶素乙酰转移酶－高含量人体必需氨基酸）融合基因导入马铃薯,获得了Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ的证据,但尚缺少氨基酸分析的资料。玉米醇溶蛋白（ｚｅｉｎ）［３］是一个富含甲硫氨酸的贮存蛋白,它和人工合成的ＨＥ…     

小麦谷氨酸脱羧酶的纯化及部分性质研究

谷氨酸脱羧酶（ｇｌｕｔａｍａｔｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,ＧＡＤ,ＥＣ４．１．１．１５）催化谷氨酸脱羧生成γ－氨基丁酸（γ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒａｔｅ,ＢＡ）,植物中已从南瓜［１］、马铃薯和林生山黧豆［２］纯化了ＧＡＤ．ＧＡＤ活性在禾本科作物中作为...     

培养乳鼠心肌细胞自发性〔Ca~（2＋）〕_i瞬间变化的实验模型

使用Ｃａ￣（２＋）敏感的荧光指示剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ,对培养的心肌细胞测定细胞内Ｃａ￣（２＋）的瞬间变化。结果为,在一个心搏周期中,经过大约１８０ｍｓ的时间,［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化达到最大值,然后恢复到基线水平（最小值）,经历了２６０ｍｓ。测得平均［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的最大值及最小值分别为３４６±３８ｎｍｏｌ／Ｌ和１０２±１８ｎｍｏｌ／Ｌ。血管紧张素Ⅱ１００ｎｍｏｌ／Ｌ引起［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化最大值明显增加,但对［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的基线水平没有明显的影响。ｒｙａｎｏｄｉｎｅ３μｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化的幅度明显降低。ＫＣｌ５０ｍｍｏｌ／Ｌ使［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ瞬间变化完全停止,并明显增加［ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的基线水平。结果提示,本实验模型可用来观察［Ｃａ￣（２＋）］＿ｉ的瞬间变化。     

GM_3抑制人白血病J6－2细胞肌醇磷脂代谢循环

采用无载体￣（３２）Ｐ和［￣３Ｈ］肌醇标记磷脂,观察了促分化剂神经节苷脂ＧＭ＿３对人单核样白血病Ｊ６－２细胞肌醇磷脂代谢的影响,ＧＭ＿３抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入Ｊ６－２细胞磷脂酰肌醇（ＰＩ）,促进［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入磷脂酰肌醇－４,５－二磷酸（ＰＩＰ＿２）,抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ掺入磷脂酸（ＰＡ）,抑制［￣３Ｈ］肌醇掺入三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）．ＧＭ＿３的上述作用均为浓度依赖性的,随ＧＭ＿３浓度的提高而增强．上述结果表明,ＧＭ＿３抑制Ｊ６－２细胞的肌醇磷脂代谢循环．     

用磁性脂质体使酶固定

用磁性脂质体使酶固定徐小妹许孙曲（南方冶金学院,江西赣州３４１０００）关键词磁性脂质体固定化酶１．引言磁性脂质体的研究已有很大进展［１］。近年来,用磁性脂质体使酶固定的研究是其中的一大进展。Ｍｉｈａｍａ等［２］在聚乙烯乙醇（ＰＥＧ）与马来酸（ＭＡ）合...     

文摘

基因工程９８０１３４人工纤维状蛋白：一篇综述［英］／ＨｅｓｌｏｔＨ．／／Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ．－１９９８，８０（１）．－１９～３１［译自ＤＢＡ，１９９８，１７（１９），９８－０８２７８］从以下方面综述了人工纤维状蛋白（ＡＦＰｓ）：家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏ...     

植物发育基因克隆技术的新进展

过去２０年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有ＤＮＡ标签法（ＤＮＡｔａｇｇｉｎｇ）［１,２,３］,作图克隆法（ｍａｐ－ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ）［４］,差别筛选法（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）［５］和扣除杂交法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）［６,７,８］。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在ＰＣＲ技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。１９９２年,ＬｉａｎｇＰ和ＰａｒｄｅｅＡ［９］首次提出并运用了ｍＲＮＡ差别显示技术（ｍＲＮＡｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ,ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）来进行基因的分离。实践表明,ｍＲＮＡ差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）［１０,１１］和抑制性扣除（或减去）杂交（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＳＳＨ）［１２］等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。     

草珊瑚及其栽培

草珊瑚及其栽培刘贤旺赖学文（江西中医学院,南昌３３０００６）草珊瑚［Ｓａｒｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｎａｋａｉ］又名九节茶,肿节风,接骨木等,为金粟兰科多年生常绿草本或亚灌木。分布于江西、浙江、安徽、福建、台湾、湖南、湖北、广东、广西、...     

文摘

文摘基因工程９８００９８血清中小型基因组ＤＮＡ片段的直接ＰＣＲ［英］／Ｓａｎｄｆｏｌｄ,Ａ．Ｊ．…∥ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．－１９９７,２３（５）．－８９０～８９２［译自ＤＢＡ,１９９８,１７（１）,９８－０００１９］开发了一种简易、快速的方法,...     

中国灰蝶科一新记录属三新记录种

本文报道发现于我国云南的灰蝶科Ｌｙｃａｅｎｉｄａｅ１新记录属：塔灰蝶属Ｔｈａｄｕｋａ Ｍｏｏｒｅ,［１８７９］;３新记录种：塔灰蝶Ｔｈａｄｕｋａ ｍｕｌｔｉｃａｎｄａｔａ Ｍｏｏｒｅ,［１８７９］,佩娆灰蝶Ａｒｈｏｐａｌａ ｐｅｒｉｍｕｔａ （Ｍｏｏｒｅ,［１８５８］）和迪花灰蝶Ｆｌｏｓ ｄｉａｒｄｉ（Ｈｅｗｉｔｓｏｎ,１８６２）。     

粉防己碱对血管紧张素Ⅱ促进心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

血管紧张素（ＡＮＧ）Ⅱ对新生大鼠无血清培养第二代心肌成纤维细胞（ＦＢ）具有剂量依赖性的促进增殖、ＤＮＡ和ＲＮＡ以及胶原合成的作用。ＡＮＧⅡ１０７ｍｏｌ／Ｌ浓度时,ＦＢ的［３Ｈ］胸腺嘧啶核苷（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）,［３Ｈ］尿嘧啶核苷（Ｕｒｉｄｉｎｅ）,［３Ｈ］脯氨酸（Ｐｒｏｌｉｎｅ）掺入较对照组分别增加１６７％,５８％,１７４％,此刺激作用可被特异性ＡＮＧⅡ受体拮抗剂阻断;粉防己碱预处理也可抑制ＡＮＧⅡ上述作用,且呈剂量依赖性。以上结果提示：ＡＮＧⅡ通过受体介导直接刺激心肌ＦＢ增殖和胶原合成,引起心肌纤维化;钙拮抗剂粉防己碱对ＡＮＧⅡ导致的心肌纤维化具有抑制作用。     

植物生化他感与农业生产

植物生化他感与农业生产杨世诚（山东潍坊教育学院生物学．２６２５００）１９３７年奥地利科学家Ｍｏｌｉｓｏｈ首先提出了生化他感（Ａｌｌｅｌｏｐａｔｈｙ）的概念［１］，它是指植物在生长发育过程中，通过不断排出次生代谢产物──如生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、强心...     

杏仁核内注射CCK—8抑制胃运动的机制

应用脑核团内微量注射和核团电刺激方法,观察杏仁基底内侧（ＢＭＡ）对胃运动的影响,分析ＢＭＡ与下丘脑腹内侧核（ＶＭＨ）的机能联系。结果如下：（１）双侧ＢＭＡ内注射八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）（５０ｎｇ／ｌμｌ）,出现胃内压（ＩＧＰ）和胃运动频率（ＧＭＦ）显著下降（Ｐ〈０．０１）。（２）ＢＭＡ内注射ＣＣＫ－Ａ受体阻断剂［Ｌ３６４,７１８］（１００ｎｇ／ｌμｌ）或ＣＣＫ－Ｂ受体阻断剂［Ｌ３６５,２６０］