HRP-HBVDNA探针在临检应用中的研究

本文介绍了一种简便的检测血清ＨＢＶＤＮＡ的方法。参照Ｒｅｎｚ等人的标记方法,构建了直接酶标ＨＲＰ ＨＢＶＤＮＡ探针。此探针经与固定在硝酸纤维素滤膜上的血清靶ＤＮＡ杂交后,可通过化学发光自显影检测技术观察结果。敏感度可检测０－１ｐｇ靶ＤＮＡ,相当于同位素探针的灵敏度。对６３份ＨＢｓＡｇＨＢｅＡｇ和Ａｎｔｉ ＨＢｃＥＬＩＳＡ阳性血清以及２４份ＨＢｓＡｇＡｎｔｉ ＨＢｃ阳性,ＨｂｅＡｇ阴性血清用ＨＲＰ ＨＢＶＤＮＡ探针进行检测,结果探针ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别为１００％（６３）和５８％（１４）;对５０份ＨＢｓＡｇ,ＥＬＩＳＡ阴性和ＡＬＴ正常的血清,探针ＨＢＶＤＮＡ全部阴性。实验结果表明本方法具有很大的推广应用价值。     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

乙型肝炎表面抗原凝难判定血清的研究

用中国药品生物品检定所检定合格的国内外ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂及ＡＢＢＯＴＴ抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃＥＩＡ试剂,对所收集的１３份ＨＢｓＡｇ疑难判定血清进行检测,并用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ,结果显示国内外ＨＢｓＡｇ试剂对部分ＨＢＶＤＮＡ阳性样品的检出率差异较大,提示这些样品可能为Ｓ基因突变株或ＨＢｓＡｇ含量较低,因此,ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂的敏感度仍有待进一步提高,并应进一步研制检测Ｓ基因突变株的     

用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

乙型肝炎患者HBV复制水平的定量PCR研究

本文采用定量ＰＣＲ方法观察了慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的复制水平。结果表明在ＨＢｅＡｇ阳性患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率和水平显著高于ＨＢｅＡｇ阴性患者（Ｐ＜０．０１）;血清ＨＢＶ－ＤＮＡ水平的高低与ＡＬＴ异常情况未发现有相关性。     

高复制型慢性乙型肝炎血清HBV复制指标与肝脏病变关系的探讨

本文报道５５例高复制型慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶ复制指标与肝脏病变的关系。５５例均为血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗－ＨＢｃ阳性,部分病例血清ＨＢｃＡｇ、ＤＮＡＰ、ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性,均作肝穿活检,病理报告ＣＡＨ５例、ＣＬＨ９例、ＣＰＨ４１例,前二者组成Ａ组,代表病变活动组;ＣＰＨ称Ｂ组,代表病变稳定组。结果显示Ａ组各项肝脏病变在ＨＢＶ复制情况下检出率普遍高于Ｂ组;ＡＬＴ异常时肝脏各项病变检出率达８０％以上者Ａ组也多于Ｂ组,而且Ａ组出现４例碎片状坏死、Ｂ组则无,显示乙肝病毒复制程度与肝脏病变活动性、广泛程度、肝功能受损等情况密切相关,因而提示抗病毒治疗的必要性。     

丙型肝炎病毒PNA打点杂交检测方法同RT—PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５＇端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ折方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异的检出血清中ＨＣＶ ＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法     

乙型肝炎病人尿细胞中HBV的实验研究

本文采用间接免疫荧光法（ＩＦ）,ＲＰＨＡ法,ＥＬＩＳＡ法及斑点杂交技术检测１０例无症状ＨＢ－ｓＡｇ携带者及８９例乙肝病人尿细胞中的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶＤＮＡ,发现尿细胞中有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ存在。结果提示：乙肝无症状携带者及乙肝病人尿细胞中具有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ,因此更进一步证实尿液具有传染性。     

丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT－PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及ＲＮＡ提取方法。ＲＴ－ＰＣＲ法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究ＨＣＶＲＮＡ量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的ＨＣＶＲＮＡ阳性样本。     

生物素标记HBV RNA探针的制备及应用

本文首次采用ＳＰ６５特殊质粒与人类的乙型肝炎病毒ＤＮＡ重组,制备了Ｂｉｏ－ＨＢＶ ＲＮＡ探针,能特异地与ＨＢＶ ＤＮＡ杂交,将该探针与缺口转移方法标记的Ｂｉｏ－ＨＢＶ ＤＮＡ探针进行了比较,结果显示出Ｂｉｏ－ＨＢＶ ＲＮＡ探针比Ｂｉｏ－ＨＢＶ ＤＮＡ探针的敏感性提高１０倍,并分别应用两种探针同时检测７０例乙肝病人血清中ＨＢＶ ＤＮＡ,阳性率各为３１．４２％、２８．５７％（Ｐ＞０．２５）。对Ｂｉｏ－     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的同步PCR扩增

介绍了一种从人血清中同步扩增和检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ的方法。ＨＣＶ－ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,这种ｃＤＮＡ和从ＨＢＶ中抽提出的ＤＮＡ一起,用根据ＨＢＶ、ＨＣＶ保守区序列设计的特异引物进行同步ＰＣＲ扩增,这种方法对于检测ＨＢＶ和ＨＣＶ重复感染很有用处     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝,肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

要用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以＾３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝,肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明的ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态,胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

广西HBsAg阳性母亲的胎儿肝、肾细胞中乙肝病毒DNA存在状态的研究

采用核酸分子杂交Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法,以３２Ｐ标记的ＨＢＶＤＮＡ为探针,检测ＨＢｓＡｇ阳性母亲引产的４０例胎儿的肝、肾组织。结果有２例胎肝和１例胎肾细胞ＤＮＡ出现大于３．２ｋｂ的杂交带,表明ＨＢＶＤＮＡ已处于整合状态。胎肾细胞基因组中查出ＨＢＶＤＮＡ整合为首次报道。     

两株乙型肝炎病毒基因组结构分析及其复制和抗原表达特性的比较

为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的核苷酸结构及复制和抗原表达特性,分别从２例ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性、ＨＢＶ ＤＮＡ滴度为１０＾１４和１０＾１３拷贝／ｍｌ的慢性乙型肝炎患者（编号为５６和２－１８）血清中扩增、克隆了ＨＢＶ全基因组,并测定了核苷酸序列。两株病毒基因组转染ＨｅｐＧ２细胞的培养上清中ＨＢｓＡｇ水平基本相同,但＃５６毒株表达的ＨＢｅＡｇ约为＃２－１８株的３倍,Ｓｏｕｔｈｅｒｍ印     

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原多肽检测丁肝病毒IgM抗全及其初步应用

用人工合成的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶ－Ａｇ）肽建立了检测抗ＨＤＶ－ＩｇＭ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。本法操作简便、快速、重复性好、特异性强,与抗ＨＡＶ－ＩｇＭ＇抗ＨＢｃ－ＩｇＭ、抗ＨＢｓ－ＩｇＭ、抗ＨＣＶ－ＩｇＭ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ、抗ＲＶ－ＩｇＭ、类风湿因子（ＲＦ）及抗核抗体（ＡＮＡ）阳性血清均不起反应,且可被２－巯基乙醇阻断而不起反应。经初步临床应用,３１例正常人血清抗ＨＤＶ－ＩｇＭ全部阴性,２８例慢     

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析

从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ,他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常,肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期,血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性,抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性,但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性,核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失,对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ）,从血清学检测和序列分析结果推测,在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中,ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态,抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。     

喹诺酮类药物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

本文以２．２．１５细胞株为模型,以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ、细胞存活率为观察指标,综合评价了喹诺酮类药物吡哌酸（ＰｉｐｅｍｉｄｉｃＡｃｉｄ）、氟哌酸（Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、环丙氟哌酸（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｓｘａｃｉｎ）、氟嗪酸（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）体外抗ＨＢＶ效果。结果表明：吡哌酸、氟哌酸、环丙氟哌酸、氟嗪酸对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ５０％抑制浓度（ＩＤ＿（５０））分别为１１μｇ／ｍｌ、６４μｇ／ｍｌ、９３μｇ／ｍｌ、１０５μｇ／ｍｌ和１９９μｇ／ｍｌ、１１１μｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌ、２１７μｇ／ｍｌ,细胞存活率为５０％时的药物浓度（ＣＤ＿（５０））分别为２１９μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌ、１８１μｇ／ｍｌ、１６９μｇ／ｍｌ,在所选定的用药浓度范围内不同程度抑制培养上清液及细胞内ＨＢＶＤＮＡ及其复制中间体的产生。尤其对超螺旋结构ＤＮＡ（ｓｃＤＮＡ）有不完全抑制作用。     

中国丙型肝炎病毒基因型研究新进展

为了进一步了解中国丙型肝炎病毒基因型感染状态 ,我们建立了 5′ ＮＣＲＡＢＣ程序酶切分型法 :首先采用ＲＴＰＣＲ技术 5′ ＮＣＲ扩增ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中的ｃＤＮＡ ,然后按照ＡＢＣ程序进行分型 ,Ａ应用ＢＨＨ(ＢｓｒＢⅠ ,ＨａｅⅡ ,ＨｉｎｆⅠ )复合内切酶消化 5′ ＮＣＲｃＤＮＡ ,Ｂ应用ＢｓｔＵⅠ消化 ,Ｃ应用ＨａｅⅢ消化 ,电泳检测片段大小。应用该方法对临床采集的ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行分型 ,在国内首次发...