ERK1/2信号通路介导PGI_2对γ-分泌酶亚基APH-1的调控作用

本文主要探讨环氧合酶-2的下游代谢产物PGI_2通过ERK1/2信号通路调控γ-分泌酶亚基APH-1蛋白表达的影响。应用免疫荧光技术检测PGI_2对人源和鼠源的神经母细胞瘤SH-SY5Y和鼠源神经母细胞瘤n2a细胞APH-1蛋白表达情况的调控作用,同时应用Western blot和Real-Time PCR的方法进一步检测PGI_2调控APH-1表达的具体机制,最后利用ELISA实验检测PGI_2对细胞内Aβ表达的调控作用。结果发现PGI_2处理SH-SY5Y和n2a细胞24 h后可通过ERK1/2信号通路增加APH-1蛋白表达,进而明显增加Aβ表达。以上结果说明COX-2代谢产物PGI_2可通过促进APH-1的表达,进一步增加γ-分泌酶的剪切活性,从而使Aβ产生增加,最终加速阿尔茨海默病的发病进程。     

ERK激活对SDF-1引起的大鼠海马神经元GABA分泌抑制的影响

目的:观察细胞外调节激酶(ERK)信号通路激活对基质细胞衍生因子(SDF-1)引起离体培养的大鼠海马神经元γ-氨基丁酸(GABA)分泌的影响。方法:新生SD大鼠海马神经元离体培养,Western blot法观察ERK1/2信号通路的磷酸化水平;ELISA法和RT-PCR技术检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059作用于离体培养的海马神经元后GABA分泌的改变;谷氨酸脱羧酶(GAD65/67)和γ-氨基丁酸转运体(GAT)的蛋白表达量及GAD65和GAT-1 mRNA表达水平。结果:SDF-1作用于海马神经元可引起ERK1/2磷酸化水平明显升高,同时加用CXCR4受体阻断剂AMD3100,可阻断SDF1引起的ERK1/2激活;SDF-1可明显抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌,同时加用ERK1/2特异性抑制剂PD98059,可部分逆转SDF-1对GABA分泌的抑制作用;SDF-1作用于离体培养的海马神经元,可抑制谷氨酸脱羧酶GAD65和GABA转运体GAT-1 mRNA的生成;ERK抑制剂PD98059可有效翻转SDF-1的作用。Western blot结果发现SDF-1可抑制海马神经元GAT-1和GAD65/67蛋白的表达,加用ERK1/2抑制剂可部分恢复GAT-1和GAD65/67蛋白合成。结论:SDF1作用于离体培养的海马神经元CXCR4,通过激活ERK1/2信号通路进而抑制GAD蛋白表达,可能是其介导GABA分泌抑制的通路之一。     

卡铂通过抑制ERK1/2通路诱导人卵巢癌细胞S和G_1期阻滞

卡铂(carboplatin,CBP)是一种抗肿瘤活性较强的化疗药物,通过诱导细胞周期阻滞抑制肿瘤细胞生长,但其诱导细胞周期阻滞的报告不甚一致.本研究探索卡铂对卵巢癌HO-8910细胞生长及细胞周期进程的影响.MTS结果显示,卡铂以浓度和时间依赖方式抑制卵巢癌HO-8910细胞生长,联合使用ERK1/2通路抑制剂PD98059可使卡铂抗卵巢癌细胞增殖作用增强.采用Giemsa染色法观察到,卡铂与PD98059单用或联用均能致卵巢癌细胞发生明显的形态学变化.流式细胞术检测细胞周期发现,随卡铂浓度的增高,S期阻滞作用增强;抑制ERK1/2通路可拮抗卡铂对HO-8910细胞S期阻滞作用,增加G1期阻滞作用,而对G2/M期细胞影响不明显.Western印迹结果显示,随卡铂浓度的增高,p-ERK1/2、Cdc2(Y15)和p-Cdc2(T161)的表达逐渐升高,Cyclin E1和Cyclin B1的表达逐渐降低;抑制ERK1/2通路可将卡铂上调,p-ERK1/2和p-Cdc2(T161)的作用反转为下调作用,上调Cdc2(Y15)的表达受阻,抑制Cyclin B1的下调作用,促进Cyclin E1的下调作用.本研究结果提示,卡铂通过抑制ERK1/2激活,诱导人卵巢癌HO-8910细胞S和G1期阻滞,抑制卵巢癌细胞生长.     

血管平滑肌细胞中ERK通路与TGF-β_1/Smad通路的相互作用

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)中TGF-β/Smad与ERK信号转导通路是否存在相互调节关系。方法:原代培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,分四组:①对照组,②TGF-β1组,③ERK阻断剂(PD98059)组和④TGF-β1+ERK阻断剂(PD98059)组。分别用Western blot法检测VSMC内Smad2/3、ERK1/2蛋白表达及磷酸化Smad2/3、磷酸化ERK1/2蛋白含量,RT-PCR方法测VSMC中Smad2、Smad3mRNA的表达。结果:①与对照组相比,TGF-β1组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量增多(P0.05),ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量减少(P0.05),TGF-β1+ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量无差异;与TGF-β1组相比,TGF-β1+ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量减少(P0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无差异。②各组的Smad2、Smad3mRNA表达无差异。结论:TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA表达水平无影响。     

TGF-β1通过PI3K及ERK信号通路调节肺动脉高压过程中IGFBPs蛋白表达

目的:探讨大鼠肺动脉高压(PAH)过程中TGF-β1对胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)表达调节是否依赖于PI3K及ERK信号通路。方法:取健康成年SD大鼠26只,随机分成2组:PAH组,腹腔注射1%的野百合碱,剂量为60 mg/kg;对照(C)组腹腔注射生理盐水。于4周后超声检测肺动脉平均压力,取肺组织做HE染色,应用NIS-Element系统测量中膜厚度。原代培养肺动脉平滑肌(PASMC)细胞,分别加入TGF-β1及TGF-β1中和抗体后,Western-blot检测IGFBP3,IGFBP5,Smad2/Smad3表达。加入ERK特异性抑制剂PD98059或PI3K抑制剂LY294002,检测IGFBP3,IGFBP5表达。结果:野百合碱处理4周后,肺动脉高压组的平均肺动脉压力及右室/(左室+室间隔)比值显著高于对照组。TGF-β1可显著升高IGFBP3,IGFBP5及p-Smad3的表达(P0.05),而抑制TGF-β1则可显著降低三种蛋白的表达(P0.05)。加入LY294002抑制PI3K ERK后,IGFBP3和p-Smad2两种蛋白的表达量显著下调(P0.05)。加入PD98059抑制ERK后可显著降低IGFBP3及IGFBP5的表达水平(P0.05)。结论:PAH中TGF-β1升高可通过活化Smad2/Smad3上调IGFBP3和IGFBP5的表达。TGF-β1促进IGFBP3,IGFBP5表达的作用依赖于PI3K及ERK信号通路。     

卡铂通过抑制ERK1/2通路诱导人卵巢癌细胞S和G0/G1期阻滞

卡铂(carboplatin, CBP)是一种抗肿瘤活性较强的化疗药物, 通过诱导细胞周期阻滞抑制肿瘤细胞生长, 但其诱导细胞周期阻滞的报告不甚一致. 本研究探索卡铂对卵巢癌HO-8910细胞生长及细胞周期进程的影响. MTS结果显示, 卡铂以浓度和时间依赖方式抑制卵巢癌HO-8910细胞生长, 联合使用ERK1/2通路抑制剂PD98059可使卡铂抗卵巢癌细胞增殖作用增强. 采用Giemsa染色法观察到, 卡铂与PD98059单用或联用均能致卵巢癌细胞发生明显的形态学变化. 流式细胞术检测细胞周期发现, 随卡铂浓度的增高, S期阻滞作用增强; 抑制ERK1/2通路可拮抗卡铂对HO-8910细胞S期阻滞作用, 增加G1期阻滞作用, 而对G2/M期细胞影响不明显. Western印迹结果显示, 随卡铂浓度的增高, p-ERK1/2、Cdc2(Y15)和p Cdc2(T161)的表达逐渐升高, Cyclin E1和Cyclin B1的表达逐渐降低; 抑制ERK1/2通路可将卡铂上调,p-ERK1/2和p-Cdc2(T161)的作用反转为下调作用, 上调Cdc2(Y15)的表达受阻, 抑制Cyclin B1的下调作用, 促进Cyclin E1的下调作用. 本研究结果提示, 卡铂通过抑制ERK1/2激活, 诱导人卵巢癌HO-8910细胞S和G1期阻滞, 抑制卵巢癌细胞生长.     

COX-2特异性抑制剂罗非昔布对阿尔茨海默病Aβ沉积的影响

本文应用免疫荧光、Western blot及ELISA等实验方法检测COX-2特异性抑制剂罗非昔布对阿尔茨海默病Aβ沉积的影响。实验分为三组,即对照组、AD模型组以及罗非昔布处理组。实验结果发现,与对照组小鼠相比,APP/PS1转基因小鼠脑内Aβ沉积及老年斑的数量增多、体积增大,Aβ1-40和Aβ1-42的含量增加,β-分泌酶和γ-分泌酶(包括BACE1、PS1、PS2、NCT)表达升高,并且小鼠脑内COX-2表达升高;小鼠经罗非昔布干预后,脑内Aβ沉积和老年斑数量减少、APP裂解酶和COX-2表达水平较AD模型组明显降低,以上结果说明COX-2特异性抑制剂罗非昔布可能通过抑制COX-2从而间接降低β-分泌酶和γ-分泌酶的活性,下调PS1、PS2、BACE1、NCT等分泌酶的表达,最终减少Aβ沉积和老年斑的形成,缓解阿尔茨海默病的发生与发展。     

MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其机制研究

目的:探讨MEK/ERK信号通路对人结膜上皮细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)的MEK抑制剂PD98059处理人结膜上皮细胞(HConEpiC),通过CCK-8法检测不同浓度PD98059作用不同时间(0、12、24、48 h)对人结膜上皮细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度PD98059对人结膜上皮细胞ERK1/2、P-ERK1/2表达的影响。结果:相比对照组(0μmol/L),不同浓度(12.5、25、50、100μmol/L)PD98059处理后的人结膜上皮细胞增殖率明显下降,呈剂量-效应关系,且随处理时间增加(12、24、48 h)其抑制作用也显著增强,差异均有统计学意义(P0.05)。不同浓度PD98059处理人结膜上皮细胞24 h后,其ERK及p-ERK1/2表达随处理浓度增加而降低,与对照组(0μmol/L)相比差异有统计学意义(P0.05),且二者表达量与细胞增值抑制率均呈显著负相关(r=-0.995、r=-0.968,P0.05)。结论:PD98059可抑制人结膜上皮细胞增殖,这可能与其下调ERK表达和减少其活化有关。     

石杉碱甲对阿尔茨海默病转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白表达的影响

本文主要观察石杉碱甲对阿尔茨海默病转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白表达的影响。应用免疫荧光技术检测Aβ在C57BL/6野生型小鼠、APP/PS1转基因小鼠及石杉碱甲治疗组小鼠脑内的表达情况,同时应用Western blot和Real-Time PCR的方法检测Aβ形成所需的β-、γ-分泌酶亚基Bace1及PS1在脑内的表达。结果发现石杉碱甲治疗后的AD模型小鼠脑内Aβ表达及含量与AD组相比明显减少,Bace1及PS1的表达都有明显的减少。以上结果说明石杉碱甲可通过降低APP/PS1转基因小鼠脑内Bace1、PS1的表达进而降低γ-分泌酶的活性,从而使AD小鼠脑内的Aβ蛋白表达水平下降,提示石杉碱甲在AD的临床治疗方面具有重要的理论意义。     

ERK活化对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的作用。方法原代培养大鼠的平滑肌细胞（ASMCs）,给予ERK激动剂表皮生长因子EGF和抑制剂PD98059干预ASMCs生长,依处理方式不同分为5组：（1）正常对照组（2）哮喘对照组;（3）E组：EGF20 ng/mL;（4）P＋E组,PD98059 10μmol/L1 h后添加EGF 20 ng/mL;（5）PD组,PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖能力,流式细胞术（FCM）测定细胞周期和cyclinD1的蛋白含量,RT-PCR方法检测cyclinD1mRNA表达水平。结果（1）与哮喘对照组比较,E组ASMCs S＋G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白阳性表达率和cyclinD1 mRNA的A值均显著升高,PD组均显著降低（P〈0.05）。P＋E组与哮喘对照在此4项指标上比较无明显差异。（2）哮喘（对照组、E组、PD组和P＋E组）组与正常对照组,其S＋G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白和cyclinD1 mRNA的表达均显著增高（P〈0.05）。结论ERK活性促进哮喘大鼠ASMCs的增殖,增加cyclinD1在哮喘平滑肌细胞中的表达,导致气道重塑的形成,提示ERK可能对CyclinD1的表达具有调节作用。     

ERK1/2信号通路活化对Tamoxifen所致胶质瘤细胞凋亡的影响

为了探讨ERK1/2信号通路在他莫昔芬(tamoxifen, TAM)所致胶质瘤细胞凋亡中的作用,以C6和U87MG胶质瘤细胞为研究对象,经TAM处理后,采用MTT法检测细胞的存活率;倒置显微镜和DAPI染色观察细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡; Western-blot法检测细胞内ERK1/2磷酸化水平。最后应用ERK1/2抑制剂(PD98059)与TAM共同作用,观察其对胶质瘤细胞内ERK1/2磷酸化水平和细胞凋亡的影响。实验结果显示:TAM可呈浓度和时间依赖性地抑制胶质瘤细胞生长; TAM处理组的细胞凋亡明显增加且呈浓度依赖性;TAM能增加细胞内ERK1/2磷酸化水平;以PD98059阻断ERK1/2的激活,能增强TAM诱导细胞凋亡的作用。实验结果表明TAM能够抑制胶质瘤细胞生长和促进其细胞凋亡, ERK1/2信号通路的激活参与调控TAM所致胶质瘤细胞凋亡。     

激活多巴胺Ⅰ类受体对氧化性低密度脂蛋白诱导的人单核细胞THP-1分泌NO/NOS的影响

目的:探讨激活多巴胺Ⅰ类受体(DR1)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核细胞(THP-1)分泌一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)的影响及可能机制。方法:THP-1细胞经佛波酯PMA诱导分化,分为正常对照组(control),氧化型低密度脂蛋白处理组(ox-LDL),DR1激动剂干预组(SKF),DR1阻断剂干预组(SCH),ERK阻断剂干预组(PD98059);应用油红O染色法鉴定泡沫细胞;硝酸还原法检测NO、NOS的变化情况;免疫荧光和Western blot检测各组细胞蛋白表达情况。结果:ox-LDL刺激48 h可形成泡沫细胞;DR1在THP1细胞上表达,oxLDL刺激后,DR1蛋白表达降低(P0.01);激活DR1受体能够明显抑制由ox-LDL引起的NO、i NOS增多(P0.01);在MAPK阻断剂PD98059存在的情况下,SKF的作用部分丧失。结论:激活DR1受体可抑制ox-LDL引起的THP-1细胞NO的大量产生,此过程可能由ERK信号通路所介导。     

激活多巴胺I类受体对氧化性低密度脂蛋白诱导的人单核细胞THP-1分泌NO/NOS的影响

目的：探讨激活多巴胺Ⅰ类受体（DR1）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人单核细胞（THP-1）分泌一氧化氮/一氧化氮合酶（NO/NOS）的影响及可能机制。方法：THP-1细胞经佛波酯PMA诱导分化,分为正常对照组（control）,氧化型低密度脂蛋白处理组（ox-LDL）,DR1激动剂干预组（SKF）,DR1阻断剂干预组（SCH）,ERK阻断剂干预组（PD98059）;应用油红O染色法鉴定泡沫细胞;硝酸还原法检测NO、NOS的变化情况;免疫荧光和Western blot检测各组细胞蛋白表达情况。结果：ox-LDL刺激48 h可形成泡沫细胞;DR1在THP1细胞上表达,ox-LDL刺激后,DR1蛋白表达降低（P<0.01）;激活DR1受体能够明显抑制由ox-LDL引起的NO、iNOS增多（P<0.01）;在MAPK阻断剂PD98059存在的情况下,SKF的作用部分丧失。结论：激活DR1受体可抑制ox-LDL引起的THP-1细胞NO的大量产生,此过程可能由ERK信号通路所介导。     

野菊花总黄酮增强细胞自噬促进β淀粉样蛋白清除

目的探讨野菊花总黄酮(total fl avonoids of Chrysanthemu m,TFC)清除β淀粉样蛋白的作用和分子机制。方法采用CCK-8法观察不同浓度TFC对SH-SY5Y神经细胞株增殖的影响,ELISA法检测TFC对转染过表达淀粉样前体蛋白(APP)和淀粉蛋白前β位分解酶1(BACE1)的CHO细胞培养上清液中Aβ水平的影响,MDC染色检测TFC处理后的神经元内自噬小体的形成,Western blot检测自噬蛋白LC3表达水平。结果 CCK-8法分析显示,TFC对SH-SY5Y神经元活力无明显影响;ELISA检测显示,TFC处理使过表达APP和BACE1的CHO细胞培养上清液中Aβ水平呈浓度依赖性降低;荧光倒置显微镜下观察和Western blot检测发现,TFC处理后SH-SY5Y细胞自噬增加,LC3/LC3自噬标志物蛋白表达增强。结论 TFC可能通过增强细胞自噬而促进Aβ的清除,减少Aβ细胞毒性。     

BPA 激活 GPER-EGFR-ERK1 /2 信号通路诱导乳腺癌细胞增殖

目的:研究雌激素G蛋白偶联受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)-表皮生长因子受体(epidermal growthfactor receptor,EGFR)-细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK)信号通路在双酚A促乳腺癌细胞SKBR-3增殖中的作用。方法:采用CCK8试剂盒检测SKBR-3细胞的增殖情况,利用Western Blot观察ERK1/2磷酸化变化。结果:与对照组相比,10-11~10-7 M浓度的双酚A具有促乳腺癌细胞增殖作用,10-9M浓度的双酚A可诱导细胞增殖最大效应(细胞活力高于对照组约38.84%,P<0.001);预孵GPER、EGFR、ERK1/2特异性抑制剂G15、AG-1478、PD98059后,双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖明显减少,细胞活力与单纯双酚A(10-9 M)处理相比降低约14.27%、12.23%和17.98%(P<0.05);双酚A(10-9 M)处理细胞0.5、1、3小时后,发现磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达明显高于对照组,双酚A可快速激活ERK1/2;而阻断GPR30和EGFR后,ERK1/2的磷酸化表达减少。结论:双酚A诱导的乳腺癌细胞增殖可能与GPR30-EGFR-ERK1/2信号通路有关,但不是唯一通路。深入研究双酚A对促进乳腺癌细胞增殖机制,可能为乳腺癌的防治提供新的方向。     

细胞外信号调节激酶在小鼠神经干细胞增殖中的作用

本文旨在探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)对小鼠神经干细胞增殖的影响.分离E14.5小鼠皮层神经干细胞,通过Western blot检测神经干细胞增殖过程中磷酸化ERK1/2的表达情况,以及不同浓度PD98059处理对神经干细胞ERK1/2磷酸化及神经球形成的影响,并用CCK-8法检测PD98059对神经干细胞增殖的影响.结果显示:ERK1/2在体外培养的神经下细胞增殖过程中被激活;PD98059显著抑制ERK1/2磷酸化及神经干细胞的成球率,且存在剂量效应依赖关系;加入PD98059后神经干细胞的生长被抑制.以上结果表明,ERK1/2在小鼠神经干细胞增殖中具有重要的作用,阻断ERK1/2信号通路后可抑制神经干细胞的增殖.     

表达APPswe_(695)基因细胞系的构建及Aβ分泌水平的分析

为探究β-淀粉样前体蛋白(amyloid-βprecursor protein, APP)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)发病过程中的作用及构建应用于AD发病机理研究的实验细胞模型,该研究构建了过表达APP695瑞典型突变体(APPswe_(695))的SH-SY5Y细胞系(APPswe_(695)细胞)并分析了该细胞系中Aβ的分泌水平。采用慢病毒介导转染方法,将APPswe_(695)表达质粒转染至SH-SY5Y细胞,抗性药物筛选阳性转染细胞。分别采用RT-PCR、Western blot技术验证APPswe_(695) mRNA、APP蛋白的表达, ELISA分析Aβ1-40和Aβ1-42的分泌水平。结果显示,转染慢病毒包装的APPswe_(695)质粒后,细胞的APPswe_(695)mRNA表达呈现阳性;与野生型细胞和转染质粒空白细胞相比,转染APPswe_(695)基因细胞表达APP695的瑞典型突变蛋白(APPswe_(695))。APPswe_(695)具有与内源性APP770相同的细胞分布。转染APPswe_(695)基因后,细胞内分泌Aβ水平增加(P0.05)而细胞外液中Aβ含量并没有显著变化。由此说明, APPswe_(695)细胞能够表达被转染的APPswe_(695)基因, APPswe_(695)细胞倾向于产生更多的胞内而不是胞外Aβ,APPswe_(695)细胞可应用于阿尔茨海默病发病机理及药物治疗的研究。     

TGF-beta1 通过PI3K及ERK信号通路调节肺动脉高压过程中IGFBPs蛋白表达

目的：探讨大鼠肺动脉高压(PAH)过程中TGF-beta1对胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）表达调节是否依赖于PI3K及ERK 信号通路。方法：取健康成年SD 大鼠26 只,随机分成2 组：PAH组,腹腔注射1%的野百合碱,剂量为60 mg/kg;对照(C)组腹腔 注射生理盐水。于4 周后超声检测肺动脉平均压力,取肺组织做HE 染色,应用NIS-Element 系统测量中膜厚度。原代培养肺动脉 平滑肌（PASMC）细胞,分别加入TGF-beta1 及TGF-beta1 中和抗体后,Western-blot 检测IGFBP3,IGFBP5,Smad2/Smad3 表达。加入 ERK特异性抑制剂PD98059 或PI3K 抑制剂LY294002,检测IGFBP3,IGFBP5 表达。结果：野百合碱处理4 周后,肺动脉高压组 的平均肺动脉压力及右室/(左室+室间隔)比值显著高于对照组。TGF-茁1 可显著升高IGFBP3,IGFBP5 及p-Smad3 的表达（P<0. 05）,而抑制TGF-beta1 则可显著降低三种蛋白的表达（P<0.05）。加入LY294002 抑制PI3K ERK 后,IGFBP3 和p-Smad2 两种蛋白的 表达量显著下调（P<0.05）。加入PD98059 抑制ERK 后可显著降低IGFBP3 及IGFBP5 的表达水平（P<0.05）。结论：PAH 中 TGF-茁1 升高可通过活化Smad2/Smad3 上调IGFBP3和IGFBP5 的表达。TGF-beta1 促进IGFBP3,IGFBP5表达的作用依赖于PI3K 及ERK 信号通路。     

牛蒡苷元对H89 诱导的SH-SY5Y 细胞损伤的保护作用

目的：考察牛蒡苷元对H89 诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞损伤的保护作用。方法：用蛋白激酶A 抑制剂H89 处理SH-SY5Y 细胞,建立细胞损伤模型。将SH-SY5Y 细胞分成正常组（正常细胞）、模型组（经H89 处理的细胞）、H89+ 牛蒡苷元组（经H89 处理后给予牛蒡苷元处理的细胞）和H89+ 丹酚酸B 组（阳性对照组,经H89 处理后给予丹酚酸B 处理的细胞）。采用MTT 法检测细胞活力、免疫荧光细胞化学法检测细胞中β- 淀粉样肽和神经营养因子-3 的表达以及Hoechst 33258 染色法检测细胞凋亡率。结果：H89 诱导的细胞损伤模型造模成功。牛蒡苷元在低浓度（0.5 μmol · L-1）时对细胞损伤模型的保护作用最佳,与模型组相比,H89+ 低浓度牛蒡苷元组细胞的细胞活力显著提高（P<0.01）,细胞中β- 淀粉样肽的表达下调5.17%（P<0.05）,而神经营养因子-3 的表达上调80.54%（P<0.01）,凋亡细胞百分比也显著降低（P<0.05）。结论：低浓度牛蒡苷元对H89 诱导的SH-SY5Y 细胞损伤具有显著保护作用。     

缺血后低压灌注处理对兔脊髓缺血/再灌注损伤的保护及ERK传导通路在其中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶 (ERK)传导通路对低压灌注缺血后处理兔缺血/再灌注损伤脊髓的保护作用及机制.方法 84只日本大耳白兔随机分为7组,分别为C组(对照组,不给予缺血后处理)、PB组(缺血后处理组)、D、PD1、PD3、PD9组分别于腹主动脉开放前1min鞘内注射DMSO 20μl、PD98059 1μg(20μl)、PD98059 3μg(20μl)、PD98059 9μg(20μl)之后进行缺血后处理及PD组(腹主动脉开放前1min鞘内注射PD98059 3μg(20μl),之后不行缺血后处理).分别于再灌注1、3、7、28d时采用Tarlov评分评价后肢运动功能.每组于再灌注1d时处死6只动物,取L3～5节段脊髓组织,采用Western blot技术测定p-ERK1/2 及Bcl-2,Bax蛋白表达.结果 1、3、7、28d,PB组Tarlov评分明显高于其它各组(P<0.05),缺血后处理可以明显上调p-ERK1/2及凋亡抑制基因Bcl-2的表达,下调凋亡促进基因Bax的表达(P<0.05),而这些调节作用可以被ERK1/2阻断剂PD98059抑制.结论 p-ERK1/2在低压灌注缺血后处理对缺血再灌注损伤脊髓的保护中起重要作用.