井冈山区63种植物不同溶剂萃取物乙酰胆碱酯酶抑制活性的初步研究

采用乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制活性筛选模型,对采自井冈山及周边地区的63种植物(67个部位)乙醇提取物的不同溶剂萃取物进行AChE抑制活性研究。结果表明:在乙酸乙酯萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,其中剪刀草和戟叶蓼表现出较强的AChE抑制活性,抑制率均大于90%,其余大部分植物均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,蛇莓等6种植物的抑制率大于60%,其余大部分植物小于30%;在正丁醇萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、活血丹、菟丝子、剪刀草、冬青叶山茶叶、地念和车前草的抑制率大于80%,其余大部分植物的抑制率均大于40%。供试质量浓度在0.025 mg/mL时,秀丽四照花等22种植物抑制率均大于50%;在石油醚萃取物中,供试质量浓度在1 mg/mL时,紫萼变种、紫茎前胡、博落回、杠板归、地念、山橿、藤石松和车前草的抑制率大于90%,供试质量浓度在0.025 mg/mL时,紫茎前胡等17种植物抑制率大于70%。另外,有些植物萃取物不仅对AChE没有抑制活性,反而表现出一定的增强作用。     

五种广东野生蕨类植物乙酰胆碱酯酶抑制活性的初步研究

采用乙酰胆碱酯酶抑制活性筛选模型,对五种广东野生蕨类植物的石油醚及乙酸乙酯萃取物进行乙酰胆碱酯酶抑制活性的初步研究。结果表明,石油醚萃取物中,样品浓度为10 mg/mL时,肾蕨、金毛狗和芒萁对乙酰胆碱酯酶的平均抑制率较高,分别为73.35%,67.32%,58.5%;铺地蜈蚣的平均抑制率相对较低,为32.88%左右;海金莎的抑制率为负值,对乙酰胆碱酯酶活性没有抑制,表现出一定的增强作用。样品浓度为1 mg/mL时,海金沙的平均抑制率最低,约为15.86%,其次是铺地蜈蚣,22.83%,其余四种植物均大于40%。乙酸乙酯萃取物中,样品浓度为10 mg/mL时,芒萁的平均抑制率最低,为22.74%,其余四种蕨类的抑制率均较高,都在50%以上。样品浓度为1 mg/mL时,芒萁的平均抑制率最低,为11.1%,其次是金毛狗,平均抑制率为30.9%,其余三种蕨类的抑制率均大于40%。同种植物在相同浓度时,不同溶剂萃取物对乙酰胆碱酯酶呈现不同的抑制效果。本研究为从野生蕨类植物筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂提供参考。     

蛇足石杉内生真菌g5的乙酰胆碱酯酶抑制活性初步研究

为了初步研究蛇足石杉内生真菌g5发酵产物的乙酰胆碱酯酶(ACHE)抑制动力学以及对该株真菌做初步形态学鉴定,采用DTNB显色法检测g5发酵液醇提物抑制AChE活性的效果,并采用玻片培养法进行真菌鉴定.结果发现g5菌株属于半知菌目丛梗孢科青霉属;其发酵液醇提物对AChE的抑制作用表现为混合竞争型可逆抑制,其对游离酶的抑制常数KI>与对酶底物络合物的抑制常数KIS>分别为0.0789mL和1.1352mL,因此g5菌株代谢产物可作为开发AChE抑制剂类药物的潜在资源.     

4种地衣提取物抗氧化和抗肿瘤活性研究

本研究初步评估了4种药用地衣(太白茶、金刷把、黑石耳、红石耳)不同溶剂提取物的抗氧化活性及其粗多糖的抗肿瘤活性。通过测定清除DPPH自由基、羟基自由基和还原能力,对4种地衣不同溶剂提取物进行体外抗氧化活性评价,结果表明,金刷把和黑石耳的甲醇提取相清除DPPH自由基能力高于其它溶剂提取相,其IC50值(半抑制浓度)分别为0.7847 mg/mL和0.5595 mg/mL;黑石耳甲醇提取相(IC50=0.5747 mg/mL)清除羟基自由基能力优于阳性对照物Vc(IC50=0.6126 mg/mL);黑石耳氯仿提取相、金刷把乙酸乙酯提取相和太白茶甲醇提取相清除羟基自由基能力与Vc相当;4种地衣甲醇提取相还原能力均较强,且与其浓度呈较好的量效关系。利用MTT法分析4种地衣多糖对HeLa、A375和Hep G2细胞体外生长增殖的抑制作用,结果显示黑石耳粗多糖对Hep G2细胞的抑制作用较为突出(IC50=0.2567 mg/mL),而金刷把抑制HeLa细胞的生长增殖作用最强,其IC50值为0.4332 mg/mL。     

香椿嫩芽和老叶萃取物抗菌活性的比较研究

采用琼脂扩散法对香椿嫩芽和老叶萃取物的氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部分的抗菌活性进行了研究.嫩芽萃取物的抗菌活性明显高于老叶萃取物,其中嫩芽萃取物的乙酸乙酯部分表现出最强的抗菌活性,其最小抑菌浓度(MIC)为1.3 mg/mL.实验结果表明,香椿叶中的抑菌物质随着生长时间的延长而逐渐降低.     

黄花棘豆的喹诺里西定生物碱

豆科棘豆属有毒植物含多种有毒生物碱,有关棘豆属中生物碱成分的研究,早在1929年Couch由兰伯氏棘豆(Oxytropis lambertii DC.)中分离到一种多羟基化的含氮有机化合物,这是最早报道由棘豆属植物中分离出的生物碱成分,由于当时条件限制未能确定其结构。1982年美国农业部西部研究中心的植物化学家Molyneux从绢毛棘豆(Oxytropis sericea)中分离到苦马豆碱(swainsonine)等吲哚里西定生物碱(indolizidinealkaloids);1989年沈阳药学院于荣敏等由小花棘豆(Oxytropis glabra DC.)中分离出多种喹诺里西定生物碱。喹诺里西定生物碱具有多种生理活性,对试验动物中枢神经系统产生抑制,呼吸抑制或兴奋,致幻、流产和致畸等作用。本文报道由黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala Bunge)中测得4种喹诺里西定生物碱。     

苦豆子生物碱对萝卜蚜的毒力及其对几种酯酶的影响

苦豆子Sophora alopecuroids(L.)的次生代谢物质为喹诺里西定生物碱类。本研究明确了该生物碱中的野靛碱对萝卜蚜(Lipaphis erysimi)有很高的毒杀作用,对其无翅成蚜的致死中浓度(LC₅₀浸渍法)为(432.59±2.12)mg/L,优于著名的杀蚜生物碱毒黎碱和烟碱,两者对该试虫的LC₅₀分别为(684.70±2.28)mg/L和(1090.65±2.01)mg/L。用小菜蛾(Plutella xylostella)幼虫作试虫,得知苦豆子7种主要生物碱对昆虫的乙酰胆碱酯酶(AChE)有抑制作用,其抑制程度排序为：总碱>野靛碱>槐胺碱>槐定碱>槐果碱>氧化苦参碱>苦参碱>苦豆碱。野靛碱和苦豆碱对a-乙酸萘酯酶、a-乙酸萘酯羧酸酯酶及酯酶同功酶的活性亦表现不同程度的抑制作用。     

蛇足石杉内生真菌FS4次级代谢产物的研究

以蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)茎部来源的一株内生真菌FS4为研究对象,分别进行了分离鉴定,抑制乙酰胆碱酯酶活性试验和次级代谢产物研究。通过形态观察和18S rRNA基因序列分析,菌株FS4初步确定为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。抑制乙酰胆碱酯酶试验结果表明,菌株FS4菌体的提取物具有很强抑制乙酰胆碱酯酶生物活性,在样品浓度为2 mg/mL时,抑制率为84.6%。通过对菌株FS4次级代谢产物的研究,共得到5个单体化合物(1~5),采用LC-MS、NMR等现代波谱学技术鉴定出化合物的结构分别为:麦角甾醇(1),邻苯二甲酸二辛酯(2),1'-9-12-亚油酸-2'-3'-二羟基丙酯(3),Microsphaerone C(4),烟曲霉酸(5)。其中化合物3,4和5为首次发现具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,在0.2 mg/mL的浓度下,其乙酰胆碱酯酶抑制率分别为73.5%,84.1%和77.6%,IC_(50)值为分别为0.057、0.038、0.05 mg/mL。     

具抗菌及乙酰胆碱酯酶抑制活性珊瑚真菌的筛选

为开发利用珊瑚真菌资源,以徐闻珊瑚保护区珊瑚样品中分离鉴定的43株海洋真菌为研究对象,采用双层平板法和Ellman法分别对其进行抗菌和乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制活性筛选。结果显示,43株菌株至少对一种指示菌有抑制作用,且有12株菌株对革兰阳性菌和革兰阴性菌均表现出不同程度的抗菌活性,抗菌谱较广;当浓度为1 mg/mL时,有8株菌株的发酵液提取物对乙酰胆碱酯酶的抑制率达到50%以上。其活性菌株中曲霉属(Aspergillus)为优势属。     

正交试验法确定测定意大利蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶反应的最佳条件

用正交试验法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系的pH值、反应温度和反应时间5个因素对测定意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica Spinola头部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响, 并从试验组合中选出最佳条件。蜜蜂AChE活性的测定采用Gorun(1978)改进的Ellman方法, 以碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)为底物, 5, 5' 二硫双硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂, 测定反应物在412 nm波长下的光密度值, 用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量, 经计算得到蜜蜂头部AChE的比活力。对正交试验结果进行极差分析和方差分析, 结果表明各因素对实验结果影响的大小顺序为：温度＞pH值＞时间＞酶浓度＞底物浓度。并得出测定蜜蜂头部AChE活性的最佳条件是：酶终浓度0.2头/mL、底物终浓度0.8 mmol/L、pH值7.5、温度40℃及反应时间5 min。     

斑点野生稻拒食活性组分的分离及其对斜纹夜蛾消化酶活性的影响

为了进一步评估斑点野生稻Oryza punctata的抗虫性,采用液 液分配萃取和硅胶柱层析的方法,从斑点野生稻甲醇提取物中分离获得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水的萃取物,测定了其对斜纹夜蛾Spodoptera litura 3龄幼虫拒食活性。结果显示,氯仿萃取物比其他4种萃取物具有更高的拒食活性,在25 mg/mL的浓度下,24 h和48 h的拒食率分别为55.62%和52.66%。氯仿萃取物经硅胶柱层析后,得到14个组分。比较14个组分的拒食活性,发现组分4和10为主要的活性组分。这两个组分对斜纹夜蛾幼虫中肠脂肪酶和α-淀粉酶的活性都具有一定的抑制活性,其中组分10对脂肪酶具有显著的抑制效果,以1 mg/mL的浓度活体处理48 h和72 h抑制率分别达19.82％和34.60％; 对α-淀粉酶的影响在48 h和72 h内都具有显著的抑制效果,随着处理时间的延长,其抑制率逐步提高,72 h的抑制率分别为25.06％和27.40％。结果提示斜纹夜蛾幼虫中肠脂肪酶和α-淀粉酶可能是斑点野生稻拒食活性成分的作用靶标。     

乙酰胆碱酯酶性质改变与昆虫抗药性的关系

乙酰胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键性酶,同时又是有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂的靶标,因此一直是人们研究的热点。就近年来昆虫乙酰胆碱酯酶(AChE)在生化和分子生物学方面的研究进展、昆虫AChE基因结构及表达的变化对动力学参数、昆虫抗药性的影响机制以及害虫与天敌AChE的比较研究进行了简要综述。     

甲基毒死蜱对红细胞膜乙酰胆碱酯酶的抑制作用及其与膜脂相互关系

以人红细胞膜为材料,研究了甲基毒死蜱与膜上乙酰胆碱酯酶(AChE)的相互作用及其与膜脂的关系。结果显示,甲基毒死蜱对人红细胞膜AChE有明显的抑制作用,与膜温育30min,其半数抑制浓度约为0.10 mmol/L。动力学分析表明,其抑制作用为非竞争性。0.2％Triton X-100并不改变AChE对甲基毒死蜱的敏感性,亦即AChE上甲基毒死蜱的作用部位与其所处的脂质微环境无关。     

重组乙酰胆碱酯酶的表达及其分子进化研究进展

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是酶抑制法检测农药残留的核心试剂。但天然提取的AChE存在含量低、纯化困难、稳定性差等不足,因此,高性能的重组AChE制备成为研究学者关注的热点。文中综述了重组AChE的表达、和分子进化等方面的研究成果,并指出酶定向进化策略与表面展示技术结合是重组AChE活性改造的未来趋势。     

白茶对弹性蛋白酶活性的抑制研究

为了解白茶对弹性蛋白酶活性的作用,测定了6个白茶样品对猪胰弹性蛋白酶(PPE)活性的抑制作用。结果表明,6个白茶样品中CB4对PPE抑制活性最强,为69.73%;且随体积分数增加,酶抑制活性增强,呈剂量依赖性抑制。白茶水提液的4个萃取层中乙酸乙酯层(WEA)的抑制活性最强,达到82.58%。CB4的多酚总量(TPs)较高,且表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)和咖啡碱(CAF)含量最高。WEA萃取层中TPs、EGCG、ECG和ECG含量均最高,CAF含量极低。PPE活性抑制率与TPs、EGCG和CAF含量呈极显著正相关,相关系数均大于0.90。0.1～1.0 mg/mL EGCG和0.05～2.0 mg/mL CAF对PPE无抑制活性,0.05～2.0 mg/mL没食子酸(GA)对PPE活性具有促进作用,且GA的促进作用与其浓度呈正相关。可见,白茶具有潜在抗衰老活性,但对PPE起抑制作用的活性成分不是EGCG、GA和CAF。     

苦豆子提取物对黄瓜和番茄病原菌的抑制作用

苦豆子主要分布在我国西北沙漠地区,是一种抗逆性极强的豆科多年生药用植物。本实验采用带毒平板菌丝生长法和琼脂打孔药剂扩散法测定了苦豆子地上部分乙醇粗提物及其石油醚、氯仿、正丁醇和水层的不同极性溶剂萃取物对瓜果腐霉、黄瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、黄瓜角斑病菌和番茄疮痂病菌的抗菌活性。结果表明,正丁醇萃取部分和氯仿萃取部分对真菌生长有较强的抑制活性,正丁醇萃取部分对细菌亦有较强的抑制活性,推测苦豆子中的生物碱是主要的抗真菌成分,存在于正丁醇萃取部分的黄酮和三萜类配糖体等成分同时具有抗真菌和抗细菌活性。     

生化毒理学的研究——梭曼与乙酰胆碱酯酶作用的生化机理

梭曼(soman,特己基甲基氟膦酸酯)、沙林(sarin,异丙基甲基氟膦酸酯)、维埃克斯[VX,O-乙基-S-(2-二异丙胺乙基)甲基膦酸酯]等是一类重要的神经性化学战剂,其中以梭曼中毒最难防治。它们对乙酰胆碱酯酶(AChE)产生极强的抑制作用,使乙酰胆碱在神经末梢大量集聚,引起抽筋、惊厥,最后死亡。氯磷啶、双磷啶等重活化剂是神经性毒剂中毒急救中的重要药物,它们可以使沙林和VX抑制的AChE恢复活性,但对梭曼抑制的AChE很     

麻疯树籽壳不同极性部位DNA损伤保护作用及其化学成分分析

为了资源化利用麻疯树籽壳,通过Fentons试剂诱导质粒pUC19 DNA损伤法分析了麻疯树籽壳乙醇提取物不同极性萃取部位(石油醚,氯仿,乙酸乙酯及正丁醇)的DNA损伤保护作用;采用DPPH、ATBS及超氧阴离子自由基清除能力与铁离子还原力评价了其抗氧化能力;利用GC/MS分析了其乙酸乙酯(JEE)和氯仿萃取物(JCE)的化学成分。结果显示,麻疯树籽壳提取物中,JEE的DNA损伤保护作用最强,其次为JCE和正丁醇萃取物(JBE),而JPE作用最弱;四个萃取部位都具有一定的抗氧化活性,且以JCE和JEE的抗氧化能力较强。JCE的DPPH和超氧阴离子自由基清除能力略高于JEE(IC50分别为4.88μg/mL和3 506.59μg/mL),但二者没有显著差异;而JEE的ABTS自由基清除能力和铁离子还原力却显著高于JCE(IC50分别为2.21μg/mL和33.76μg/mL)。此外,JCE和JEE化学成分GC/MS分析显示,二者均以酚类物质为主,相对含量分别为73.92%和49.01%,且二者主要酚类物质均为临香豆酸,相对含量分别为39.25%和20.77%。该研究结果显示麻疯树籽可以用作抗氧剂的生产原料,为其进一步开发利用提供了科学依据。     

关于苦马豆属学名的讨论

本文根据国内外豆科研究文献的考证,讨论了苦马豆属(Sphaerophysa DC.)及其近缘属的区别,重新确认了国产苦马豆属和苦马豆的学名。     

蛇足石杉内生真菌无柄盘菌Pezicula sp. JR14中抑制乙酰胆碱酯酶的次级代谢产物分离

采用形态学及ITS-rDNA序列分析法,对具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的蛇足石杉内生菌株JR14进行鉴定,确定为无柄盘菌Pezicula sp.。开展了乙酰胆碱酯酶抑制活性化合物的分离,从Pezicula sp. JR14乙酸乙酯提取物中分离到4个化合物,利用核磁共振及质谱技术将其鉴定为behenic acid (1)、himeic acid B (2)、secalonic acid A (3)和palmitic acid (4)。采用改进的Ellman比色法对分离的化合物进行活性检测,结果表明,himeic acid B (2)具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其IC₅₀为205μg/mL（0.64mmol/L）。