中药桑寄生凝集素的分离及体外抗肿瘤活性的研究

采用硫酸铵分级沉淀和酸化的Sepharose-4B亲和层析分离得到桑寄生凝集素;通过A-PAGE和SDS-PAGE电泳分析,确定所得凝集素组分和亚基情况;通过MTT法对所得到的凝集素进行体外抗肿瘤活性研究。研究结果表明,桑寄生凝集素包含两种组分,共含有四个亚基,亚基分子量分别为36.8 kDa、33.4 kDa,31.3 kDa和29.3 kDa;凝集素具有抗肿瘤效果,对肝癌BEL-7402细胞和胃癌MGC-823细胞的IC50分别为24.2μg/mL和20.9μg/mL。     

桑寄生凝集素的纯化及部分性质研究

利用DEAE一纤维素柱盐离子浓度梯度洗脱,再经猪胃粘蛋白-Sepharose 4 B亲和柱可以从中药桑寄生中分离纯化出桑寄生凝集素。经pH8.9,Tris-EDTAN_2a-borate的PACE和SDS-PAGE测定均呈现单一蛋白带,测得其分子量为67 500,中性糖含量为14.6％,DNS法测得N-末端氨基酸为缬氨酸。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含酸性氨基酸,而碱性氨基酸含量较少,不含精氨酸。当凝集素浓度为15.6μg/mL时,即可凝集兔红细胞,而对人的A、B、O型血细胞,凝集素浓度高达1000μg/mL,也不发生凝集反应。Gal、GalNAc、山梨糖、岩藻糖和松三糖对凝集兔红细胞的能力有抑制作用。桑寄生凝集素是一种促有丝分裂原,对猪血淋巴细胞的转化率达78％,细胞分裂比率为11.2％。     

广西柳树桑寄生内生真菌的分离鉴定与抗肿瘤活性菌株筛选

该研究从广西钦州市采集健康的柳树桑寄生的根、茎和叶中分离并纯化内生真菌,对真菌进行形态学鉴定,提取内生真菌的DNA,采用真菌ITS序列对内生真菌进行分子鉴定。利用A549和H460细胞作为抗肿瘤活性指示细胞,采用MTT法测定真菌乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性。经过初步分离分析,从柳树桑寄生中纯化出27株内生真菌,经鉴定它们分别属于7个目9个属15个种。拟盘多毛孢属和间座壳属为优势属,其中拟盘多毛孢属全部定植于寄生根;其次为新壳梭孢属、拟茎点霉属和球座菌属,各分离到3株;其他包括青霉属、镰刀菌属、炭疽菌属和派伦霉属,各分离到1株。抗肿瘤活性研究表明,有一株与Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性达100%的拟盘多毛孢属菌株Gen24表现有抑制肿瘤细胞A549和H460生长的特性,在真菌乙酸乙酯浸提物浓度为800μg·mL~(-1)时,对A549细胞的抑制率达到了56.92%,对H460细胞的抑制率达到了70.11%。该研究结果表明广西柳树桑寄生内生真菌较丰富,在寄主中的分布表现了一定的组织特异性,而且还存在一些具有抗肿瘤活性的菌株及其活性物质可供进一步深入研究。     

中药抗肿瘤的研究进展

肿瘤是危害人类健康最严重的一类常见病、多发病,目前虽有多种治疗方法,但毫无疑问,综合治疗是肿瘤治疗的根本原则。临床治疗肿瘤西医一般采用手术、放疗、化疗三大疗法,疗效快捷,确有根治效果,但往往有明显的损伤和毒副作用。而中医一般采用扶正祛邪、活血化瘀、清热解毒三大治则,讲究辩证论治,虽然对局灶的缩小或消除效果缓慢,但能改善机体的整体条件,另外对西医三大疗法有减毒、     

江浙蝮蛇蛇毒中抗肿瘤蛋白的分离纯化及活性研究

利用离子交换和凝胶过滤层析等分离技术从江浙蝮蛇蛇毒中分离纯化到一种抗肿瘤蛋白,经SDS-聚丙酰胺凝胶电泳检测其分子量为58．2ku。MTT法测定该蛋白对K562细胞的LC50为4．96μg／mL,电子显微镜观察其能引起K562细胞的凋亡,琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯状条带,实验结果表明该蛋白对K562细胞有明显的抑制作用。     

蚯蚓中抗肿瘤蛋白组分的提取分离及其抗肿瘤活性

以赤子爱胜蚓为原料 ,通过蛋白质的丙酮沉淀和凝胶过滤 ,分离得到一组抗肿瘤活性蛋白成分 (简称蚯蚓抽提物 ) ;这组成分富含Fe、Zn、Cu以及Se等微量元素 ,蛋白含量为 6 0 4 3± 2 36 %(n =5 ) .体外实验中 ,通过MTT法和SRB法测定了蚯蚓抽提物对多种人癌细胞株 (HCT 116、SY5Y、K5 6 2、MGc80 3和HeLa)以及正常细胞株 (HEK2 93和COS 7)的抑制杀伤率 .结果表明 ,蚯蚓抽提物对癌细胞的杀伤有一定的选择性 ,受试人癌细胞达到 5 0 %生长抑制率所需作用浓度约 6 0～110mg L ;但是 ,10 0℃煮沸 5min后 ,该抑制活性完全消失 .通过纤维蛋白平板法 ,测得蚯蚓抽提物同时具有纤溶酶和纤溶酶原激活酶的活性 .体外测得丝氨酸蛋白酶抑制剂aprotinin和PMSF能显著抑制蚯蚓抽提物的细胞杀伤活性 .体内实验中 ,蚯蚓抽提物能有效延长荷瘤 (S180 )小鼠的生存时间 ,并使其身体机能得到明显改善 .腹膜内注射剂量为 2 8mg kg和 36mg kg时 ,生命延长率分别为135 3%和 12 3 5 % ,和标准药物 (环磷酰胺 )治疗后结果 (76 5 % )相比 ,有显著性差异     

近十年抗肿瘤中药的研究进展

本文重点就近十年来动物体内实验筛选中 ,抗肿瘤效果显著的中药研究进展作一阐述 ,从植物药、动物药、矿物药三方面分别论述 ,为新药的研制与开发提供新思路     

蛋白核小球藻凝集素的分离纯化及部分性质研究

蛋白核小球藻藻粉的PBS抽提液经硫酸铵二步分级沉淀 ,再经DEAE Sepharose和SephadexG 10 0层析 ,从中分离纯化得到蛋白核小球藻凝集素 (CPL)。经测定 ,该凝集素为单个亚基的蛋白质 ,相对亚基分子量为 1 4× 10 4 — 1 5× 10 4 ,分子中不含糖。在氨基酸组成中 ,苯丙氨酸 (Phe)的含量最高 ,其次是天冬氨酸 (Asp)和谷氨酸 (Glu) ,不含组氨酸 (His)。CPL能够凝集兔、绵羊及鸽子红细胞 ,其中对兔红细胞的凝集活性最大 ,最低浓度为 6 88μg/mL ,对鸡、鸭及人红细胞 (A型、O型及B型 )无凝集活性。卵黏蛋白和 7种单糖对CPL的凝血活性具有抑制作用。CPL具有很好的热稳定性 ,在 90℃处理 10min不失活。     

江珧活性蛋白的分离及抗氧化作用研究

采用匀浆、硫酸铵分级沉淀和Sephadex G-100柱层析的方法从江珧的闭壳肌及内脏团分别分离到3个和2个活性蛋白峰,经化学发光法进行体外抗氧化测定,这些活性蛋白都具有清除超氧阴离子自由基、羟自由基、过氧化氢和抑制脂质过氧化作用,其中闭壳肌第三个蛋白峰(PB3)与内脏团第二个蛋白峰(PN2)抑制能力最强。     

赤子爱胜蚓（Eisenia foetida）中抗肿瘤与纤溶酶原激酶活性蛋白质的分离与鉴定

采用SephadexG 75和HiPrep 1 6 / 6 0DEAE离子交换等方法从赤子爱胜蚓 (Eiseniafoetida)中提取到一组活性蛋白质成分 ,双向电泳分析证明它们为一组pI在 3 .0～ 4 .0之间的酸性蛋白质 ;利用体外K5 6 2、HeLa、SY5Y等肿瘤细胞抑制实验和纤维蛋白平板实验 ,跟踪测定活性 ,证明乙醇沉淀组分D2 (8)是既具肿瘤抑制 ,又具有激酶活性的蛋白质成分。同时应用非变性电泳对乙醇沉淀组分进行分离 ,并利用电洗脱、凝胶原位酶解和ESI MS等蛋白质组学方法 ,鉴定了其中 6种蛋白质的分子量、氨基酸组成、N末端序列和肽质量指纹图信息 ,其中条带 9与D2 (8)组分为同一种蛋白质 ;研究证明蚯蚓中含有既具抗肿瘤活性又具有激酶活性的蛋白质成分。采用的方法可适用于活性蛋白质成分的整体分离与鉴定     

甘肃河西地区抗癌植物资源

本文对甘肃河西地区抗癌植物进行了初步整理 ,对它们的分布、产量、抗癌成分进行了分析 ,提出了加强基础研究 ,综合利用 ,开发与保护相结合的开发对策。     

三种花生幼胚蛋白质提取方法比较研究

植物组织(或细胞)的蛋白质提取效率与效果直接影响蛋白质双向凝胶电泳等实验的结果。为探索建立适用于花生幼胚蛋白质(双向凝胶电泳用)提取的最佳条件,尝试了磷酸缓冲液直接提取法、改良的荔枝胚胎蛋白提取法和Trizol(附加)提取法等3种提取方法,根据蛋白提取得率、试剂成本、双向电泳图谱的质量(蛋白质斑点的丰度、分布特点)进行初步评价。结果表明,磷酸缓冲液直接提取法简单但总体效果较差,改良的荔枝胚胎蛋白提取法综合评价最好,与双向凝胶电泳条件更兼容。     

癌症发生的分子生物学研究方法以及生物治癌药物的开发

癌症属于一种综合性疾病,主要是由于遗传基因渐发性的突变和诱导因子逐步产生所致.从而导致正常细胞分裂周期失控,细胞分裂处于无限制状态.致使癌症发生的原因复杂,研究方向途径各异,为此我们简略地分析和介绍当前分析癌症发生的分子生物学研究方法,如cDNA微阵法,PCR技术,端粒结构变化以及DNA的甲基化等.同时,对当前生物治癌药物的方法进展进行了介绍和推介,包括单克隆抗体,癌症疫苗以及阻抑癌症发生传导系统中的抑制因子等.     

蛋白质异戊烯化修饰与抗肿瘤研究

蛋白质经过异戊烯化翻译后修饰正确的定位于膜上,在生物体内的信号转导过程（如异三聚体G蛋白）中起非常重要作用。其修饰过程包括异戊烯化、蛋白水解、甲基化以及棕榈化等。目前已知主要有3种蛋白质异戊烯化转移酶：法尼酰基转移酶（FTase）、二牛龙牛儿基转移酶I（GGTaseI）、二牛龙牛儿基转移酶Ⅱ（GGTaseII）。作用于异戊烯化修饰的关键酶或下游因素是目前抗肿瘤的主要策略之一。