FABP5基因重组突变体蛋白抗前列腺癌细胞活性分析

为构建脂肪酸结合蛋白5 (FABP5)突变体的原核表达体系,评价突变体蛋白质体外抗前列腺癌细胞的活性.利用定点突变技术,突变FABP5蛋白脂肪酸结合的3个关键位点,并构建原核表达体系,对重组蛋白质进行原核表达、分离纯化.通过细胞毒性、细胞划痕和细胞侵袭试验,评价重组FABP5突变体蛋白质对前列腺癌细胞22RV1和PC3增殖、迁移和侵袭的影响.结果 显示定点突变后的DNA与表达载体pQE32连接并转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3),经序列测定正确,构建了重组表达工程菌,并诱导表达的重组蛋白经亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白;三突变体对细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用比3个单突变体和3个双突变体抑制效果明显;单突变体和双突变体组内对细胞的增殖、迁移和侵袭抑制作用差异较小;而野生型重组蛋白质对两株细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用.本研究从所有突变体中筛选出FABP5的三突变体重组蛋白质对前列腺癌细胞抑制作用较好,为后续开发去势抵抗性前列腺癌(CRPC)蛋白质药物提供参考.     

克隆用于干癣病态分析的脂肪酸结合蛋白的cDNA

新泻大学医学部教授小野辉夫等小组从小鼠皮肤中分离出新的脂肪酸结合蛋白(C-FABP),并克隆了cDNA。C-FABP与人干癣病表皮细胞大量表达的脂肪酸结合蛋白(PA-FABP)的同源性高达81.5％。C-FABP的表达可能与干癣病有某种关系。在大阪召开的第67届日本生化学会上发表了该项成果。 得到的C-FABP的cDNA编码了135个氨基酸,C-FABP是分子量约15000的蛋白。目前已得知FABP家族有心肌型、脂肪细胞型、髓磷脂型等多种,它们与这次新分离的C-FABP的同源性分别为48％、52.6％、54.1％。C-FABP参与静电性结合,含有在FABP家族中保守性强的精氨酸残基。但含     

影响猪肉嫩度的遗传因素

嫩度是猪肉品质的一个重要方面。影响猪肉嫩度的因素很多,遗传因素是改善猪肉嫩度的关键。本对肌纤维性状、钙蛋白酶蛋白水解系统和肌内脂肪的有关基因进行了论述,包括MyoD基因家族、钙调蛋白激酶(CaMK)基因、钙激中性蛋白酶(CAPN)基因、钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)基因、心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因、脂肪组织脂肪酸结合蛋白(F一FABP)基因、过氧化氢酶体激活增殖受体（PPARγ)基因以及与肌内脂肪有关的QTL。其中有些已被认为是肉嫩度的候选基因。对改善猪肉嫩度所面临的问题及研究前景进行了讨论。     

糖尿病和动脉粥样硬化的潜在靶标——FABP4（aP2）

脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（A-FABP／FABP4／aP2／ALBP）作为脂肪酸结合蛋白家族中的一员,在脂肪细胞和巨噬细胞中高表达。在鼠及人的肥胖个体中FABP4表达均增加。FABP4基因缺陷可改善胰岛素抵抗,并抑制动脉粥样硬化的发生发展。FABP4抑制剂减小了动物体内动脉硬化斑块的大小且提高了胰岛素敏感性。FABP4已经成为治疗糖尿病和动脉粥样硬化的重要潜在靶标。     

不同脂肪酸对中华绒螯蟹肝胰腺组织三种FABP表达的影响

本试验旨在研究不同脂肪酸水平对中华绒螯蟹肝胰腺中脂肪酸结合蛋白FABP3、FABP9和FABP10表达量的影响。取中华绒螯蟹肝胰腺组织进行体外培养,在液体培养基中分别加入50μmol/L、100μmol/L和250μmol/L 3种浓度的棕榈酸(PA),油酸(OA),亚油酸(LA),花生四烯酸(ARA),DHA和EPA 6种脂肪酸。分别在离体培养24 h后,运用Real-time PCR技术,研究组织内FABP3、FABP9和FABP10在不同种脂肪酸作用下的表达变化。研究表明,在培养基中加入100μmol/L、250μmol/L ARA后,FABP3的表达量显著性下调;而加入100μmol/L、250μmol/L亚油酸体外培养24 h后,FABP3的表达量显著性上调;在培养基中加入50μmol/L、100μmol/L、250μmol/LDHA、EPA、ARA和亚油酸体外培养24h后,都促进了FABP9基因的表达;在100μmol/L、250μmol/L亚油酸和ARA条件下,FABP10表达量发生显著性变化。FABP3、FABP9和FABP10的表达水平对脂肪酸的种类和浓度的不同反应,可能与实验动物所处的生理时期及对脂肪酸的需求有关。     

Ex-FABP 作为鸡腹脂性状主要候选基因的研究

细胞外脂肪酸结合蛋白 (extracellular fatty acid-binding protein, Ex-FABP) 基因是脂肪酸结合蛋白 (fatty acid-binding protein, FABP) 家族的另一成员,参与鸡的脂肪酸、肌纤维、骨骼等调控过程 . 利用 PCR-SSCP (single strand conformation polymorphism) 和 DNA 测序的方法,对不同品种的杂交鸡进行了 Ex-FABP 基因 5′调控区部分序列的多态性分析,发现了 3 个单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphisms, SNPs) 位点 . 其中,此片段中的碱基 C (－1000) 的插入和碱基 T → C (－1011) 的突变,导致此处比野生型基因少了 1 个 cap ,多了 1 个 Nkx-2 、 1 个 AhR/Ar 和 2 个 CF1 等转录因子结合位点的产生 . 利用 SAS 软件对 Ex-FABP 基因 5′调控区的 SNPs 与屠体性状的最小二乘分析,发现基因型 BB (突变型) 与腹脂重存在极显著相关 (P<0.01). 研究结果表明,细胞外脂肪酸结合蛋白 (Ex-FABP) 基因是影响脂肪沉积、控制腹脂性状的主要候选基因 .     

FABP4基因在阿勒泰羊尾脂沉积与代谢模型中的表达变化规律

FABP4(Fatty acid binding protein 4)参与细胞内脂肪酸的转运和脂肪酸代谢,是当前研究动物脂肪沉积与代谢的热门候选基因。为了研究FABP4基因在绵羊尾脂沉积与代谢中的作用,文章采用生物信息学方法分析了FABP4氨基酸序列在各物种中的保守性;利用半定量RT-PCR方法检测了该基因在阿勒泰羊主要组织中的表达;采用饥饿法成功建立了模拟阿勒泰羊尾脂沉积与代谢的动物模型,利用qPCR和iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术同时验证FABP4基因mRNA和蛋白在阿勒泰羊非饥饿组与饥饿组尾脂中的表达变化。序列分析结果表明,绵羊FABP4氨基酸序列在物种间高度保守,提示FABP4基因可能由于其重要的生物功能而在进化中表现出其物种的保守性。组织表达谱结果显示,FABP4 mRNA在阿勒泰羊肠脂与尾脂中均高丰度表达,暗示FABP4基因可能在脂肪中行驶着重要的生理生化功能。qPCR与iTRAQ结果显示,FABP4 mRNA与蛋白在两种极端条件下尾脂中的表达差异均不显著(P>0.05),表明FABP4基因可能不是绵羊尾脂沉积与代谢两种极端差异表型的决定基因。以上研究结果为进一步研究FABP4基因在绵羊尾脂中的生物功能奠定了基础。     

高原暴露人群返回平原后脱习服期神经损伤康复程度评价及FABP、SDH检测结果分析

目的:探索高原脱习服期神经损伤类指标、脂肪酸结合蛋白(FABP)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的变化规律。方法:选择返回平原后的高原暴露人群61人为观察组,选择未上高原且工作性质、年龄等因素大致相同的84人作为对照组,分别测定其人髓磷脂碱性蛋白(MBP)、人S蛋白100(S100)、人神经特异性烯醇化酶(NSE),FABP及SDH。结果:MBP、NSE、S100、SDH四项均值组间无统计学差异,FABP均值观察组大于对照组(P<0.05),且FABP与高原暴露时间呈正相关,与返回平原的时间呈负相关(P<0.05)。结论:①返回平原近5年的观察组人群其神经系统及能量代谢方面的损害情况已基本康复;②观察组人群在脂代谢方面的脱习服过程尚未结束。     

鸡脂肪酸结合蛋白基因的克隆和测序分析

根据哺乳动物脂肪酸结合蛋白基因序列设计一对引物对鸡基因组进行PCR扩增,将163bp扩增片段进行克隆和测序,并与猪的脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding protein,FABP）基因序列进行同源性比较。该基因因片段与猪的心脏脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid binding protein,H-FABP）基因有68%的同源性,与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty acid binding protein,A-FABP）基因有75%的同源性,演绎成氨基酸之后与猪的脂肪型脂肪酸结合蛋白相应的氨基酸有75%的同源性。Northern结果表明该基因只在脂肪组织中表达。     

FABP4对脂多糖诱导Kupffer细胞NF-κB活化和炎症的影响

目的:研究脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)对脂多糖(LPS)诱导Kupffer细胞(KCs)NF-κB通路活化和炎症反应的影响。方法:通过梯度离心的方法分离大鼠KCs,按照1×10~5接种于6孔板,贴壁后饥饿24 h,不同浓度脂多糖(LPS,0、5、10和20ng/mL)刺激24 h,提取蛋白和RNA,通过Western-Blot检测NF-κB通路蛋白表达变化,利用荧光定量PCR检测IL-1β和IL-6m RNA表达变化;利用RNAi沉默KCs FABP4表达,通过Western-Blot和荧光定量PCR检测其对LPS诱导NF-κB通路活化的影响;分别利用FABP4细胞因子刺激和慢病毒上调FABP4的表达,通过Western-Blot和荧光定量PCR检测其对KCs NF-κB通路和炎症反应的影响。结果:LPS能够以浓度依赖的方式(0、5、10和20 ng/m L)诱导KCs FABP4 m RNA和蛋白的表达,以20 ng/mL最为明显(P0.05);沉默FABP4可以显著减弱LPS(20 ng/m L)诱导的p-p65和p-IκBα的表达,以及炎症细胞因子IL-1β和IL-6的释放(P0.05);外源性FABP4(10 ng/mL和20 ng/m L)刺激24h后,能够明显诱导p-p65和p-IκBα的表达,促进炎症因子(IL-1β和IL-6)的合成(P0.05);利用慢病毒上调FABP4,可以显著诱导p-p65和p-IκBα的表达以及炎症因子(IL-1β和IL-6)的表达(P0.05),而抗氧化剂NAC(10μM)处理,则显著减弱此效应(P0.05)。结论:FABP4介导了LPS刺激KCs NF-κB通路的活化和炎症反应。     

特种五谷虫脂肪酸的体外抗肿瘤、抗HIV-1整合酶活性及组成分析

为研究特种五谷虫(大头金蝇Chrysomya megacephala蝇蛆的俗称)脂肪酸的体外抗肿瘤、抗HIV-1整合酶活性,并确定其组分构成,通过溶剂萃取和油脂酶解获得2种脂肪酸FA1和FA2,采用MTT法/SRB法测定其体外抗人白血病细胞HL-60/人肺癌细胞A-549活性,以及采用Biotin-ELISA法检测其对HIV-1整合酶的抑制作用;并由GC-MS分析确定其脂肪酸组成。结果表明：FA1和FA2对人白血病细胞/人肺癌细胞均有显著的抑制活性,其IC₅₀值在35～65 μg/mL;对HIV-1整合酶同样具有强烈的抑制活性,IC₅₀值分别为86.7 μg/mL和98.5 μg/mL。GC-MS分析表明,FA1和FA2化学组成相似,均含有15%～16%的多不饱和脂肪酸（PUFA),其中有2个组分为ω-6 PUFA。提示特定培养的五谷虫,其脂肪酸成分具有显著的体外抗肿瘤、抗HIV-1整合酶活性,其中含有的PUFA,尤其ω-6 PUFA,可能是主要活性组分;FA2在来源上和FA1存有相关性。     

FABP5-PPARγ信号通路对血管性痴呆大鼠学习记忆及脂质代谢的影响

目的:探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)-过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆及脂质代谢的影响及其作用机制。方法:①采用双侧颈总动脉结扎法制备VD模型大鼠,设立正常对照组(WT组)、假手术组(sham组)及VD模型组;②设立WT组和WT+FABP5抑制剂组。4周后行Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;采用RT-qPCR及Western blot方法测定脑内FABP5、PPARγ、p-PPARγ及脂蛋白脂肪酶(LPL)在转录水平和蛋白水平的表达;用试剂盒检测脑组织中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及游离脂肪酸(FFA)含量。结果:与WT组和sham组相比,VD模型和FABP5抑制剂组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05,P<0.01),脑内的FABP5、PPARγ、p-PPARγ及LPL在转录水平和蛋白水平上表达显著降低(P<0.05,P <0.01);脑内的TC、TG和FFA含量明显提高(P<0.05,P<0.01)。结论:FABP5可通过PPARγ和LPL影响VD大鼠的学习记忆和脂质代谢...     

动物FABP基因家族研究进展及育种应用探讨

脂肪酸结合蛋白家族(FABPs)是脂质结合蛋白超家族成员,它们广泛存在于哺乳动物的小肠、肝、心、脑、骨骼肌等多种细胞内。在调节细胞内长链脂肪酸(LCFA)的摄取、转运和代谢等生理活动发挥着重要的作用。本研究对几种常见的脂肪酸结合蛋白,如心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)基因的基因多态性、在动物育种上的应用等相关研究进展进行了阐述,为利用FABPs基因改良和提高畜产品品质提供参考。     

烟实夜蛾脂肪酸结合蛋白基因的克隆、序列分析与表达

应用RT-PCR技术,从烟实夜蛾Helicoverpa assulta幼虫脂肪体组织和血细胞总RNA中反转录扩增脂肪酸结合蛋白(fatty-acid binding protein,FABP)基因的cDNA片段,克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达并进行检测。结果表明：扩增得到的片段全长399 bp(GenBank登录号为DQ299942),编码132个氨基酸残基,预测分子量15.0 kD,等点电5.83。FABP融合了GST。原核表达后经电泳检测到约41 kD大小的外源蛋白,Western blot检测表明是目的蛋白。     

急性心肌缺血时心肌脂肪酸代谢障碍及药物治疗

急性心肌缺血时,心肌脂肪酸(FA)代谢障碍主要表现为血中游离脂肪酸(FFA)升高、FFA及其中间产物在心肌细胞内堆积和心肌生物膜磷脂水解。心肌FA代谢障碍,干扰甚至破坏细胞膜结构和功能、抑制细胞关键酶活性、增加心肌氧耗(MVO_2),从而扩大心肌梗塞范围和诱发合并症。β-阻滞剂、葡萄糖-胰岛素-钾(GIK)、肉毒碱、抗脂解类药及某些中草药有效成份能改善急性心肌缺血时心肌FA代谢,保护心肌生物膜功能,因而对缺血心肌有显著的保护作用。     

PML(NLS~–)蛋白在NB4细胞及其裸鼠移植瘤中定位的验证

验证中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)切割PML-RARα后,PML(NLS–)蛋白的存在和定位。将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞,用Western blot法验证质粒转染成功;提取电转染质粒成功的NB4细胞的胞浆蛋白,用Western blot法检测NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达;免疫荧光法和激光共聚焦检测电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白的表达及定位;同时,建立NB4细胞、K562细胞和电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠皮下瘤模型,用Western blot、免疫组化法检测PML(NLS–)蛋白在移植瘤组织细胞中的表达与定位。结果表明,Western blot检测电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞成功表达NE蛋白;NE酶成功切割PML-RARα,Western blot检测到电转染质粒pCMV-HA-NE的NB4细胞表达PML(NLS–)蛋白;免疫荧光和激光共聚焦均可检测到电转染质粒成功的NB4细胞中PML(NLS–)蛋白定位于细胞胞浆;Western blot和免疫组化法检测到电转染质粒成功的NB4细胞裸鼠移植瘤中的PML(NLS–)蛋白的表达且定位于细胞胞浆,而NB4和K562细胞裸鼠皮下瘤中PML蛋白主要定位于胞核。综上所述,该文成功将质粒pCMV-HA-NE电转染NB4细胞并用Western blot、免疫荧光、激光共聚焦、免疫组化验证PML(NLS–)蛋白存在于NB4细胞胞浆,这一现象可以为急性早幼粒细胞白血病的临床早期诊断与治疗提供新的依据。     

腰大池引流联合法舒地尔治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血的疗效及对血清sICAM-1、FABP、MCP-1水平和脑积水形成的影响

目的:分析腰大池引流联合法舒地尔治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血的疗效及对血清可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、脂肪酸结合蛋白质(FABP)、核细胞趋化蛋白(MCP-1)水平和脑积水形成的影响。方法:选择我院2016年3月~2018年3月收治的112例动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者,按随机数字表法分为对照组(n=48)和研究组(n=64)。对照组采用腰大池引流治疗,研究组基于对照组联合法舒地尔治疗。比较两组临床疗效,治疗前后血清sICAM-1、FABP、MCP-1水平、血压、大脑中动脉血流参数水平和神经功能的变化,脑积水发生率及不良反应发生情况。结果:治疗后,研究组总有效率显著高于对照组(89.02%vs.72.91%,P<0.05)。两组治疗后血清sICAM-1、FABP、MCP-1、血压、大脑中动脉血流参数水平和神经功能缺损评分量表(NIHSS)均较治疗前下降,格拉斯哥昏迷评分(GCS)均较治疗前上升,研究组以上指标较对照组改变更明显(均P<0.05)。两组不良反应发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腰大池引流联合法舒地尔治疗动脉瘤性蛛网膜下腔出血的疗效明显优于单用腰大池引流治疗,其可显著降低血清sICAM-1、FABP、MCP-1水平,降低脑积水发生率,改善患者预后。     

Leptin降低脓毒症后肺肠FABP水平及其机理

目的：研究脓毒症对肺肠组织脂肪酸结合蛋白（FABP）水平及相关酶活性的影响,探讨FABP在急性炎症反应中的作用。方法：建立小鼠盲肠结扎致脓毒症模型,采用放射免疫分析法和96孔分光光度分析法分别检测肺肠组织匀浆液中FABP及髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）等与自由基清除相关的酶的水平、同时以HE染色方法观察肺肠组织病理组织学改变。结果：脓毒症6h和12h后肺组织匀浆放免测定脂肪酸结合蛋白（FABP）水平显著上升（108.11±94.03 vs 204.98±70．72,67．22±19.47 vs 154.29±60.14）。腹腔给药Leptin（0.1mg／kg）、消炎痛（2mg／kg）后12h可见肺组织FABP水平又下降并低于脓毒症水平（P〈0.05）。同样,脓毒症后12h肠组织FABP升高,Leptin保护后水平显著下降（419.80±80.06vs191、09±96．75）,而消炎痛保护未见显著FABP下降。同时,脓毒症后肺肠组织内MPO、SOD活性改变随时间有不同变化,Leptin和消炎痛保护对其的影响与FABP改变并无显著的相关性。结论：Leptin可以保护脓毒症肺肠等重要脏器的功能,表现为细胞损伤标志FABP的水平可以明显低于未保护组水平,但可能同组织MPO、SOD等氧自由基清除因素并不相关。     

脂肪酸结合蛋白研究进展

脂肪酸结合蛋白(fatty acid binding proteins,FABPs)家族目前已知类型有12种,主要表达在哺乳动物的各种组织中,具有组织表达的特异性。脂肪酸结合蛋白的主要功能是进行脂肪酸的转运,特别是多不饱和脂肪酸的转运。脂肪酸结合蛋白还具有许多其他的生物学功能,如影响血管的生成和细胞的增殖分化等。而在哺乳动物胎盘形成的过程中,FABPs也起着重要作用。FABPs还与许多代谢综合征等疾病的发生发展密切相关。现主要对脂肪酸结合蛋白的功能、与生殖过程和疾病的关系作一综述。     

细胞色素c的释放是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要环节

通过末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口翻译法和DNA凝胶电泳观察多巴胺(DA)对PC12细胞凋亡的诱导作用, 并经蛋白质印迹法检测胞浆细胞色素c、Bcl-2和Bax蛋白以及活化型半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)水平. 结果表明, 在DA诱导PC12细胞凋亡的过程中, 可见PC12细胞中活化型caspase-3蛋白表达, 胞浆中细胞色素c水平明显增高, 同时Bcl-2蛋白水平下降, 而Bax蛋白水平明显增加. 环孢菌素A预处理对细胞色素c释放和caspase-3激活有明显的抑制作用, 而对Bcl-2和Bax蛋白影响不明显. 结果提示, Bcl-2和Bax蛋白、细胞色素c以及caspase-3可能参与DA诱导PC12细胞凋亡, 线粒体细胞色素c向胞浆释放可能是其中的中心环节.