解脲支原体对兔输卵管黏膜上皮细胞致病性研究

目的：探讨解脲支原体(UU)对兔输卵管黏膜上皮细胞的粘附及其致病性。方法：采用雌性大白兔作为实验对象,用UU感染兔输卵管黏膜上皮细胞,经光学和电子显微镜观察UU对其粘附性和致病性。结果：UU感染后,兔输卵管管腔有较多渗出物,呈淡红染匀质状,黏膜层的上皮细胞轻度肿胀,黏膜下层有炎症细胞(以淋巴细胞为主)呈灶性浸润;在电镜下,UU粘附于输卵管黏膜上皮细胞上,同时上皮细胞游离面的纤毛互相粘连、倒状,纤毛细胞核膜欠完整．胞核染色质呈凝块状．胞浆内可见大量大小不等的空泡,无纤毛细胞顶面参差不齐,可见伪足样突出．微绒毛减少．胞浆内近细胞顶部有少量分泌颗粒和空泡变性,细胞间可见相嵌连接。结论：UU到达兔输卵管后可粘附于输卵管黏膜上皮细胞上并导致损伤。     

兔输卵管液和血清中维生素A,D,E含量的比较

输卵管液是由输卵管粘膜上皮细胞分泌和输卵管血管渗出的混合液。人和浦乳动物的输卵管液除维持输卵管内渗透压和调节pH值外,还对生殖细胞的进一步成熟、受精、受精卵的卵裂和运输有极其重要的作用。输卵管液内含有水、无机盐、糖、蛋白质和各种氨基酸。有些内含物质还和动物的性周期有关。但有多种生理功能和生殖功能的维生素A、D、E在输卵管液中的含量未见报道。我们采用荧光分析法对不同性周期兔输卵管液中和血清中维生素A、D、E的含量进行了测定与比较。     

中华大蟾蜍输卵管促受精因子的实验分析

在孕酮作用厂,切除卵巢的中华大蟾蜍输卵管上皮细胞不仅能够使外源移植的卵母细胞在输卵管中正常运行,还保证卵母细胞正常受精。根据输卵管卷曲部分泌物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,存在依赖孕酮的３３ｋＤ蛋白质。经兔抗３３ｋＤ蛋白抗体处理具输卵管分泌物的卵母细胞,受精率受到显著抑制·提示该蛋白有促受精活性。输卵管分泌物介入受精涉及复杂的多种因子。     

兔输卵管蛋白具有组织特异性而没有种属特异性

哺乳动物输卵管为配子的最终成熟、配子的运输、受精及早期胚胎发育提供了一个独特的、适宜的环境。可以推测：输卵管粘膜上皮细胞分泌的某些蛋白参与了这些过程。有证据表明：输卵管粘膜上皮细胞分泌因子与克服发育阻断作用的现象“相关”。而且,这些因子在功能上无种属专一性。我们则进一步发现：输卵管因子能克服早期胚胎发育阻断。通过纯化兔输卵管上皮细胞分泌蛋白,制备针对各种不同蛋白组份的多抗血清。进行抗体封闭实验。结果表明：抗６４ｋＤ输卵管蛋白（ＤＰＦ－１）多抗血清能完全阻断体外早期胚胎的正常发育,阻断率达１００％。另外,鼠ＤＰＦ－１抗血清的用量与小鼠早期胚胎体外发育阻断率呈一定的剂量效应关系。Ｉｎｖｉｖｏ抗生育实验,即通过主动免疫雌性小鼠,亦证实ＤＰＦ－１具有克服早期胚胎发育阻断的作用。凡经免疫的雌性小鼠,怀孕后检查发现,近半数的早期胚胎发育均遭阻断,这就进一步表明了ＤＰＦ－１在克服早期胚胎发育阻断并实现由母型向合子型调控过渡过程中的作用。为了深入研究ＤＰＦ－１的理化特性和生物学行为,本文对ＤＰＦ－１进行了初步纯化,并制备了ＤＰＦ－１单抗。选择健康、性成熟、雌性新西兰白兔经自然发情、交配后,１７小时处死。取出输卵管上皮细胞、     

鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的研究

鸡输卵管上皮细胞是卵清蛋白的主要分泌细胞,是研究输卵管特异表达蛋白调控的重要工具。在以往的研究中,多采用普通DMEM培养液对鸡输卵管上皮细胞进行分离与培养,容易造成其自身特性在体外培养过程中的改变。本研究我们优化了细胞分离方法,发现从输卵管漏斗部组织分离的输卵管上皮细胞增殖较快;用鸡输卵管上皮细胞培养基相比DMEM更适合促进细胞生长;与胰酶相比,用Accutase消化酶进行细胞传代,有利于输卵管上皮细胞特性维持。对所获得的输卵管上皮细胞鉴定发现,己烯雌酚能促进卵清蛋白的表达,说明分离培养的细胞保持了鸡输卵管上皮细胞特性。本研究建立的方法为输卵管特异表达蛋白调控以及家禽生物反应器的研究奠定了基础。     

小鼠子宫颈部位输卵管蛋白表达的初步研究

用RT-PCR及免疫印迹法检测证实小鼠子宫颈粘膜上皮细胞具表达输卵管蛋白的能力,宫颈部所获得的输卵管蛋白转录产物, 310到 714的405bp的cDNA片段经序列测定及blast比较表明与输卵管部位表达的输卵管蛋白完全一致(100%)。小鼠子宫颈输卵管蛋白在动情周期的表达波动情况与输卵管粘膜上皮的类似,其表达于小鼠动情期明显增加。Westernblot显示小鼠子宫颈提取物中存在两种不同分子量(60KD,30KD)的输卵管蛋白。原位杂交结果则提示子宫颈粘膜上皮细胞含丰富的输卵管蛋白mRNA信号。通过"原体中风"实验未发现输卵管蛋白在体外对精子活动有影响,其功能尚须进一步分析。     

音乐在黑猩猩采血训练中的应用初探

为探究外源促性腺激素对伊拉兔(Oryctolagus cuniculu)生殖器官中表皮生长因子(EGF)表达水平及其作用特点的影响,本实验以伊拉兔为研究对象,随机选取30只(雄兔6只,雌兔24只),将雌兔随机分为超排处理组(n = 12),即肌肉注射70 U 孕马血清促性腺激素(PMSG)和100 U人绒毛膜促性腺激素(hCG)和对照组(不注射任何激素,n = 12)。并运用实时定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western-blot)及免疫组化方法,研究经超排处理的伊拉兔卵巢、输卵管和子宫中表皮生长因子的表达与定位情况。结果显示,在超排处理后的伊拉兔卵巢、输卵管和子宫中,表皮生长因子mRNA与蛋白的表达量极显著高于对照组的卵巢、输卵管和子宫(P < 0.01),其阳性信号分别定位于卵巢的初级卵母细胞、颗粒细胞、内膜细胞、间质细胞和血管内皮细胞,输卵管的纤毛细胞、基细胞、黏膜上皮和肌层中,以及子宫的上皮细胞和内膜细胞中。研究表明,超排使用的外源促性腺激素可促进卵巢、输卵管和子宫中表皮生长因子表达量升高,提示其可能参与伊拉兔的生殖过程并调节卵巢、输卵管和子宫的功能。     

牦牛输卵管上皮细胞分离培养和纯化鉴定

为建立牦牛输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法,通过选取牦牛输卵管,运用机械刮取法和0.25%胰蛋白酶消化两种方法分离上皮细胞进行体外培养。对不同分离方法的培养效果比较,培养细胞进行形态学观察与传代培养、MTT比色检测细胞活力并制定生长曲线,原代及传代上皮细胞的免疫组织化学鉴定,冷冻解冻后经台盼蓝排斥试验检测活细胞数。结果表明该试验分离出的原代细胞,纯化后传代培养,经鉴定为牦牛输卵管上皮细胞,培养的细胞生长状况良好,建立了一套牦牛输卵管上皮细胞分离培养及纯化鉴定的方法。     

P物质对兔离体输卵管峡部平滑肌活动的影响

本文在离体状态下观察P物质对不同性激素状态兔输卵管峡部平滑肌活动的影响。动物分成动情组、间情组、去卵巢组。实验结果:(1)P物质对间情兔输卵管峡部平滑肌的收缩有明显的抑制作用。(2)P物质对动情兔和去卵巢兔输卵管峡部平滑肌的收缩没有影响。结果表明P物质对不同性激素状态下的兔输卵管峡部平滑肌的作用不一致。     

猪输卵管上皮细胞基因时段特异性与其胚胎早期发育关系

台湾大学农学院畜产学系科技人员为探讨母猪发情后期不同生理阶段输卵管上皮细胞基因表现的特异性与猪胚早期发育的关系 ,他们将试验猪分别经超数排卵处理、人工授精配种 ,并在注射hcG(人绒毛膜促性腺激素 )后 5 0～ 6 0、72、85、96及 12 0h ,用外科手术截取其输卵管 ,从输卵管上皮细胞中抽取totalRNA ,并对此样品分别用DDRT PCR测试 ,同时比较各不同时段猪输卵管上皮细胞基因表现的差异。经测试的 4 0组anchorprimers和arbitrargprimers配对组合中 ,仅 6组特定的引子配对可明确分辩猪输卵管上皮细胞中表现不同时段有生理特异性基因片…     

利用气液界面无血清培养原代兔气管上皮细胞的研究

用低温酶消化法分离兔气管上皮细胞,具有细胞损伤小,活力及纯度高的优点,成纤维细胞污染极低。人胎盘胶原提高了气管上皮细胞贴壁性。无血清培养基能促进细胞增殖,分化和成熟。气液界面培养方式更好地模拟了气管上皮细胞的天然生长环境,在膜上呈复层生长,有利于细胞的分化成熟及功能表达。光镜下细胞形态及免疫组化细胞角蛋白染色阳性证实培养细胞为气管上皮细胞。本文所建立的兔气管上皮细胞体外气液界面无血清培养方法为研究气 管上皮细胞的生理和病理提供了一个十分有用的模型。     

兔输卵管、子宫组织内去甲肾上腺素(NE)含量与激素状态关系研究

本文应用荧光分析法测定不同激素状态兔输卵管及子宫组织内NE含量。各组NE含量随内、外源性激素而变化;各部位NE含量相比,输卵营峡部NE含量最高,比壶腹部高2.5—3倍,而子宫NE含量最低;成年动情兔峡部收缩活动比未成熟幼兔强,但动情兔峡部NE含量却比幼兔低,若给幼兔注射苯甲酸雌二醇输卵管收缩活动增强,NE含量亦明显降低,显示兔内、外源雌激素占优势状态时NE含量与收缩活动呈反相关;给幼兔注射黄体酮输卵管各部NE变化不同,壶腹部NE上升,远峨部无变化,近峡部有所下降。结果提示激素调节输卵管、子宫活动是相当复杂的过程。     

FSH促进牦牛输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的研究

为在胚胎共培养过程中添加相关激素提高哺乳动物胚胎发育的研究提供理论依据,本研究探讨了促卵泡生成素(FSH)对牦牛输卵管上皮细胞分泌特异性糖蛋白的影响。体外分离培养牦牛输卵管上皮细胞,并在细胞中添加不同浓度的FSH,作用6 h后运用荧光定量PCR分析输卵管特异性糖蛋白mRNA的表达水平,并用细胞免疫标记对其分泌输卵管蛋白的部位进行分析。结果显示,FSH的浓度为0.5-5.0μg/m L时,输卵管蛋白的表达量随着FSH浓度的上升而增加,在5.0μg/m L的FSH作用后,输卵管蛋白的mRNA表达量最高;浓度超过10.0μg/m L时,输卵管蛋白基因的表达量降低。结果表明,FSH具有促进输卵管上皮细胞分泌输卵管特异性糖蛋白的作用,且具有剂量依赖性,其最佳作用浓度为5.0μg/m L,输卵管蛋白主要由细胞质分泌。     

兔输卵管峡部平滑肌阵发性活动与卵巢激素的关系

本文记录了不同卵巢激素状态下兔离体输卵管峡部平滑肌收缩活动及肌电变化。成年动情兔和排卵兔输卵管峡部活动强,呈现阵发性收缩或放电;幼兔及切除卵巢成年兔峡部活动弱,无典型的阵发收缩,若给这种兔补充雌激素阵发性收缩又可出现。结果表明峡部平滑肌阵发性活动与卵巢激素有密切关系,雌激素在维持阵发性活动中起着相当重要的作用。     

HeLa细胞表达分泌重组eGFP—DPF-1在卵母细胞上的定位

将兔输卵管蛋白(DPF-1)基因连结于增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因5′端,构建了真核表达重组质粒(pEGFP-N1／DPF-1),转染HeLa细胞,获得稳定表达分泌融合蛋白eGFP—DPF-1的HeLa细胞株。该融合蛋白呈现的分子量达120KD,提示经翻译后修饰。取兔卵母细胞-卵丘细胞复合物(COC)、去除卵丘细胞后的卵母细胞或输卵管内的卵母细胞,与该株细胞共培养或培养于该株细胞条件培液中,观察兔输卵管蛋白在兔卵母细胞上的分布。结果显示DPF-1大量结合于卵母细胞透明带,先结合于透明带内层,然后维持在内层多外层少的分布状态上;在卵母细胞质膜表面则呈点状均匀分布。DPF-1在卵母细胞上的分布不受其周围颗粒细胞的阻碍,且颗粒细胞上未见有DPF-1结合的痕迹。本实验首次证实体外真核细胞表达分泌的输卵管蛋白能与卵母细胞结合,并借助绿色荧光蛋白作为示踪信号体外直接观察到该表达产物在卵母细胞上的动态分布,为进一步深入分析输卵管蛋白的功能提供了线索,也为研究输卵管内其他蛋白在配子／早胚上定位提供了可行的办法。     

HeLa细胞表达分泌重组eGFP-DPF-1在卵母细胞上的定位

将兔输卵管蛋白(DPF-1)基因连结于增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因5′端,构建了真核表达重组质粒(pEGFP-N1/DPF-1),转染HeLa细胞,获得稳定表达分泌融合蛋白eGFP-DPF-1的HeLa细胞株。该融合蛋白呈现的分子量达120 KD,提示经翻译后修饰。取兔卵母细胞-卵丘细胞复合物(COC)、去除卵丘细胞后的卵母细胞或输卵管内的卵母细胞,与该株细胞共培养或培养于该株细胞条件培液中,观察兔输卵管蛋白在兔卵母细胞上的分布。结果显示DPF-1大量结合于卵母细胞透明带,先结合于透明带内层,然后维持在内层多外层少的分布状态上;在卵母细胞质膜表面则呈点状均匀分布。DPF-1在卵母细胞上的分布不受其周围颗粒细胞的阻碍,且颗粒细胞上未见有DPF-1结合的痕迹。本实验首次证实体外真核细胞表达分泌的输卵管蛋白能与卵母细胞结合,并借助绿色荧光蛋白作为示踪信号体外直接观察到该表达产物在卵母细胞上的动态分布,为进一步深入分析输卵管蛋白的功能提供了线索,也为研究输卵管内其他蛋白在配子/早胚上定位提供了可行的办法。     

微血管铸型的扫描电镜观察

用扫描电镜观察了ＡＢＳ丁酮溶液灌注的鼠兔输卵管微血管、家歙鸽小肠绒毛微血管和丽斑麻晰肺微血管构筑情况。结果表明：（１）鼠兔输卵管的血液来自生殖动脉的２－４输卵管支。输卵管支进入管壁邓在管壁内分支形成三个血管层。浆膜层血管呈网网络状,肌层血管丛呈平行树枝状分布,粘膜血管层呈致密的网状。     

第22届国际生物学奥林匹克竞赛试题理论B-1·细胞生物学和植物科学

<正>理论B整套试题总分:120分,时间:150 min每个问题可以有1个或1个以上的正确答案(每题3分)。细胞生物学问题组:下图描绘了某特定细胞表面结构的横切面在电子显微镜下观察的结果。回答问题B1和B2。B1.拥有上述结构的有:A.草履虫B.大肠杆菌C.裸子植物的管胞D.人输卵管上皮细胞E.人气管上皮细胞F.人小肠上皮细胞B2.这种结构的功能和它的主要化学组成是什么?     

第22届国际生物学奥林匹克竞赛试题理论B—l·细胞生物学和植物科学

正理论B整套试题总分:120分,时间:150 min每个问题可以有1个或1个以上的正确答案(每题3分)。细胞生物学问题组:下图描绘了某特定细胞表面结构的横切面在电子显微镜下观察的结果。回答问题B1和B2。B1.拥有上述结构的有:A.草履虫B.大肠杆菌C.裸子植物的管胞D.人输卵管上皮细胞E.人气管上皮细胞F.人小肠上皮细胞B2.这种结构的功能和它的主要化学组成是什么?     

谷胱甘肽-硫-转移酶M2基因在小鼠生殖器官中的表达

利用半定量RT-PCR和原位杂交的方法检测Gstm2基因在成年雄性和雌性小鼠生殖器官中的表达,并初步评价其在生殖过程中的作用。在雄性小鼠的睾丸、附睾、输精管和雌性小鼠的卵巢、输卵管、子宫、胎盘中,半定量RT-PCR的方法均检测到Gstm2的表达,在胎盘中表达水平较低,其余组织表达水平较高。利用原位杂交的方法在睾丸的间质细胞检测出较强的信号,在附睾中有微弱的信号,而输精管上皮细胞没有检测到信号;在输卵管上皮细胞和妊娠第3d的子宫上皮细胞中检出较强的信号。由于Gstm2在RNA水平在小鼠的生殖器官中广泛表达,因此我们推测Gstm2可能在小鼠精子发生、睾酮合成、精子的成熟和运输、卵子的发生和运输、胚胎着床等生殖过程中发挥作用,此结果为深入研究Gstm2在生殖生理中的功能打下基础。