导读与评议(2016年第2期)

正本期特约专稿刊登了梁国栋教授撰写的经蚊传播、我国少见的西尼罗病毒和Tahyna病毒的分离与毒株分析及相关感染病例的综述,是值得广大读者阅读与学习的重要文章。这是本刊近期刊登寨卡病毒(Zika virus)及其相关疾病后,再度刊登的需认     

导读与评议(2016年第4期)

正2016年8月6日在上海召开的《微生物与感染》全国编委会会议上,提出了如何在"导读与评论"栏目中突出重点。因此,从本期开始将对几篇特约专稿与论文加以重点介绍与评论。本期特约专稿由军事医学科学院生物工程研究所田德桥和陈薇撰写,题名为"基孔肯雅病毒与基孔肯雅热"。本刊已刊登过"Zika病毒与Zika病毒病"、"我国西尼罗病毒和Tahyna病毒的发现与流     

我国西尼罗病毒和Tahyna病毒的发现与流行

已发现100余种蚊传虫媒病毒在世界各地流行,其引发的人兽共患病是全世界关注的公共卫生问题。长期以来我国仅发现乙型脑炎和登革热两种蚊传虫媒病毒病,但近年来新发现西尼罗病毒和Tahyna病毒及其感染疾病流行。从我国新疆维吾尔自治区采集的蚊虫标本中分离到西尼罗病毒,大量血清学研究证明当地不仅存在西尼罗病毒感染所致疾病,还发生过西尼罗病毒感染引发的病毒性脑炎流行。目前已从新疆维吾尔自治区、青海省和内蒙古自治区采集的蚊虫标本中分离到Tahyna病毒,并发现其在自然界动物中的循环和导致的人类感染流行。西尼罗病毒和Tahyna病毒及其相关感染性疾病的发现为我国虫媒病毒及虫媒病毒病的预防与控制提出了新的挑战。     

导读与评论（2015年第3期）

本期特约专稿刊登了由廖万清院士团队撰写的人类免疫缺陷病毒患者真菌的机会感染。真菌机会感染也常见于其他终末期患者,文中介绍的多种真菌感染值得临床医师参阅。     

新城疫弱毒活疫苗中FAdV-4的分离鉴定及分子特征

【目的】当前我国鸡群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAd V)感染严重,该病毒既可水平传播也可经卵垂直传播,因此鸡胚源禽用弱毒活疫苗是否存在FAd V污染,进而造成疫病的传播尚不清楚。检测我国商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗中是否存在FAd V污染,探讨国内鸡群中FAd V感染和流行的可能原因。【方法】应用本实验室建立的FAd V PCR检测方法检测商品化新城疫La Sota弱毒活疫苗,并进行FAd V分离鉴定。经序列比对和进化分析,鉴定分离毒株所属种、血清型及进化特征。【结果】分离到一株禽腺病毒,命名为L160962。基因分析表明,分离株L160962的52k和hexon基因片段序列与C种内的血清4型毒株相似性最高,其中与中国毒株HN/151025和CH/HNJZ/2015的相似性为99.9%-100%,与奥地利毒株KR5的相似性为99.3%,但与A、B、D和E种FAd V的相似性分别为79.0%-83.3%。系统进化分析表明,L160962与C种内的血清4型禽腺病毒在同一分支,核苷酸相似性在99.9%以上,应划分为血清4型FAd V。基于分离株L160962的hexon基因构建的系统进化树的拓扑结构,分离株L160962与中国毒株亲缘关系最近,提示疫苗源分离株L160962与我国当前流行毒株相近。【结论】我国商品化的新城疫La Sota弱毒活疫苗中存在血清4型FAd V污染,这可能是我国鸡群中FAd V大面积感染和流行的原因之一。     

中国首次分离的Tahyna病毒毒株的生物学特性及分子进化特征分析

2006年夏季,本课题组在新疆喀什地区伽师县库蚊标本中分离到我国首株Tahyna病毒XJ0625株,并发现当地不明原因发热患者存在该病毒感染。本研究通过细胞培养、动物实验、电镜观察、间接免疫荧光及交叉保护中和试验等研究对XJ0625病毒株的细胞易感性、动物致病性、形态学及抗原性等特征进行观察,并应用分子生物学软件对其分子进化特征加以分析。结果发现该毒株可以引起BHK-21细胞病变,乳鼠颅内接种该毒株可以引起死亡。与其他布尼亚病毒形态相似,Tahyna病毒为球形有包膜病毒。该病毒与国际流行Tahyna病毒Bardos92株的抗体作用,在间接免疫荧光试验中呈现阳性荧光信号。空斑减少中和试验结果显示该抗体对XJ0625病毒株的中和效价为1∶3 200。核苷酸序列分析显示,该病毒与Bardos92株处于同一个进化分支,二者S节段同源性为91.8%,M节段同源性为81.9%。     

实验感染的三带喙库蚊和来亨鸡体内西尼罗病毒的分离与鉴定

采用C6/36细胞培养分离活病毒、间接免疫荧光染色检测病毒抗原、RT-PCR扩增病毒基因片段和PCR产物测序等方法,对实验感染的三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus和来亨鸡血液样本中的西尼罗病毒进行分离和鉴定。结果表明,接种实验感染蚊虫研磨液和来亨鸡血液样本的C6/36细胞出现细胞融合、空泡形成的病变效应; 用西尼罗病毒抗血清进行间接免疫荧光染色,感染病毒的细胞呈现黄绿色荧光,为阳性反应; 采用3对不同引物的RT- PCR体系扩增分别出现预期的408 bp、498 bp和559 bp的基因片段,序列测定证实扩增序列与实验所用毒株相应的基因序列基本相同。从而证实实验感染三带喙库蚊和来亨鸡体血液内的西尼罗病毒与实验感染所用的西尼罗病毒Chin-01株一致。     

中国新疆维吾尔自治区不明原因发热人群中Tahyna病毒感染状况调查

本研究通过对新疆地区不明原因发热人群血清Tahyna病毒抗体进行检测,以了解Tahyna病毒在当地的感染状况及分布特征。通过间接免疫荧光方法对新疆维吾尔自治区南部喀什地区、北部伊犁地区742例不明原因发热患者急性期血清标本进行Tahyna病毒抗体检测,并对IgM抗体阳性标本平行进行Tahyna病毒、Snowshoe hare病毒和Inkoo病毒三种抗原性相似的布尼亚病毒的蚀斑减少中和试验。研究结果显示新疆南部喀什地区采集不明原因发热患者急性期血清中,IgM抗体阳性率5.3%,IgG抗体阳性率18.3%;新疆北部伊犁地区采集的急性期患者血清标本中并未发现TAHV IgM抗体阳性;蚀斑减少中和试验结果显示,TAHV IgM抗体阳性患者血清中Tahyna病毒中和抗体滴度较其它两种布尼亚病毒中和抗体滴度升高明显。本研究证实新疆南部地区不明原因发热人群存在Tahyna病毒的急性感染和既往感染,为相关疾病的进一步监测提供基础。     

猪札幌病毒的研究进展

猪札幌病毒(porcine sapovirus,PoSaV)是一种经粪-口途径传播引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对环境友好生态型养殖业构成一定威胁。研究表明,某些PoSaV与人SaV核苷酸序列具有很高的同源性,且越来越多来源于人和猪的SaV重组新毒株被发现,提示PoSaV具有跨种间感染及传播给人的潜在风险。迄今,PoSaV的入侵与感染、变异与迁移、免疫与致病、暴发与流行、跨种间感染与传播等机制尚不清楚。本文主要对PoSaV形态与抵抗力、基因组结构与功能、基因重组、传播方式、流行病学、受体等方面的研究进展进行综述。     

一株H3N2亚型猪流感病毒广东分离株的基因组序列分析

从广东省疑似流感发病猪分离到1株H3N2亚型猪流感病毒(A/Swine/Guangdong/01/2005(H3N2)),对其各个基因进行克隆与测序,并与GenBank中收录的其它猪流感、禽流感和人流感的相关基因进行比较,结果表明,HA全基因与广东2003~2004年分离的H3N2猪流感毒株的核苷酸序列同源性在99%以上,与纽约90年代末分离的H3N2人流感毒株同源性在98.5%以上;NA基因与纽约1998~2000年分离的H3N2人流感毒株的核苷酸序列同源性在99%以上;NS基因、M基因的核苷酸序列与H1N1亚型猪流感毒株A/swine/HongKong/273/1994(H1N1)的核苷酸序列同源性较高,分别为97.9%、98.4%,与美洲A/swine/Iowa/17672/1988(H1N1)的核苷酸序列同源性分别为96.7%、97.1%;其他基因的核苷酸序列与H3N2人流感毒株具有很高的同源性。因此,推测其M和NS基因来源于H1N1亚型猪流感病毒,HA、NA及其他基因均来源于H3N2亚型人流感病毒。表明此H3N2亚型猪流感病毒为H3N2亚型人流感病毒和H1N1亚型猪流感病毒经基因重排而得到的重组病毒。     

地方土猪脑心肌炎病毒的分离、鉴定及全基因组序列分析

脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种自然疫源性人兽共患病病原,但有关地方土猪EMCV的分离、鉴定及全基因组研究等尚未见报道。本研究应用"细胞接种与RT-PCR方法相结合"技术,成功分离到国内首株淮南猪源EMCV,命名为HNXX13株,并对其进行了系统鉴定和全基因组序列测定分析。结果显示,该病毒粒子大小约为24~30nm,呈圆形,不耐酸和热,对胰蛋白酶敏感,对氯仿不敏感,二价阳离子没有保护作用,所感染BHK-21细胞的细胞浆内可见到特异的绿色荧光;基因组全长为7 725bp(GenBank登录号:KF771002),与不同动物源参考毒株的核苷酸同源性为81.0%~99.9%,与国内猪源参考毒株同源性为99.5%以上;基于全基因组序列和ORF的系统发育进化树显示,EMCV可分为G1、G2和G3 3个群,HNXX13株与国内其他参考毒株同属于G1群。研究结果表明,地方土猪可感染EMCV并引起发病,丰富了我国EMCV分子流行病学资料,并提醒在进行地方品种养殖中要充分考虑人兽共患疫病传播的生态学;EMCV存在较大的地域差异,其传播具有一定的区域限制性;EMCV在地方土猪和鼠之间可能存在着交叉感染与传播;EMCV在感染地方土猪时可能会发生个别氨基酸的突变,以适应不同的猪种。     

家养野猪源猪圆环病毒2型安徽株的分离鉴定及其全基因组序列分析

目的对安徽省临诊疑似PMW S家养野猪病例进行猪圆环病毒2型(PCV2)分离鉴定,并对分离株的全基因组进行克隆与序列分析。方法应用PK-15细胞进行PCV2的分离与增殖,根据PCR、IFA、电镜技术进行PCV2分离株的鉴定,克隆分离株的全基因组,并对序列进行分析。结果获得1株来自安徽家养野猪源PCV2分离株,命名为YZ0901。该毒株全基因组长为1 767 bp,属于PCV2b基因型。与GenBank已发表的国内外参考毒株的同源性介于93.9%~99.2%,与安徽分离毒株彼此之间的同源性介于93.4%~99.5%。结论安徽省家养野猪中存在PCV2感染,分离毒株与家猪源病毒差异不大,PCV2核苷酸序列比较稳定,其进化不存在明显的地域相关性,家养野猪源PCV2的基因型与当地PCV2流行株的基因型密切相关。     

西尼罗病毒研究进展

西尼罗病毒（West Nile virus,WNV）属黄病毒科,为正单链RNA病毒。它在人类中的感染导致以发热为主要症状的传染性疾病,主要由蚊虫叮咬传播。自20世纪50年代首例报告西尼罗病毒自然感染所致脑炎后的几十年内,西尼罗病毒脑炎在欧洲及中亚地区散在、小规模流行。西尼罗病毒脑炎于1999年在美国的爆发及随后几年在北美的流行引起了极大的关注。这次爆发流行中新出现的种种迹象,如其中间宿主——野生鸟类的大量死亡,人类感染者中中枢神经系统受损比例的增高等,提示近期的遗传变异已使西尼罗病毒感染的病理学与流行病学发生了较显著的变化。另外,随着感染的流行,蚊虫叮咬以外的传播途径,如输血、器官移植、母婴传播等日益受到人们重视。同时,人们对阻止疫情所急需的疫苗的研制也在进行之中。本文就近几年来对西尼罗病毒的感染、免疫与流行病学方面的研究进展进行了综述。     

我国首株猪盖他病毒的分离与鉴定

盖他病毒(Getah virus,GETV)是一种广泛分布于欧亚大陆及澳大利亚北部太平洋沿岸的人兽共患虫媒病毒,我国目前各地仅从蚊子中分离到该病毒。本研究在对一猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)流产胎儿进行多重RT-PCR检测时,由检测猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的一对引物扩增出一非特异性条带,测序及在NCBI数据库中BLAST结果显示,该序列与GETV序列高度相似。经病毒分离、传代、蚀斑纯化,获得一株能够在Marc-145细胞上稳定生长的分离物。电镜观察显示,该病毒有囊膜及纤突,直径约70 nm,接近于球形,具有披膜病毒科甲病毒属成员的典型形态特征,将该分离物命名为HNJZ-S1株盖塔病毒(Getahvirus)。全基因序列分析结果显示,分离物HNJZ-S1基因组全长11 689 bp,与GenBank中现有14株GETV序列相似性为97.4%～99.3%,其与韩国猪源毒株AY702913(登录号AY702913)序列相似性最高(99.3%)。遗传进化分析显示,HNJZ-S1与日本蚊源毒株12IH26、马源毒株14-I-605-C1、14-I-605-C2及中国蚊源毒株HB0234亲缘关系最近,处于同一进化分支。其E2基因推导的氨基酸序列分析结果显示,HNJZ-S1与韩国猪源毒株AY702913和QIAG9302以及日本马源毒株14-I-605-C1、14-I-605-C2和中国蚊源毒株HB0234等处于同一进化分支。本研究首次从我国发病猪群中检测并分离到GETV,也是迄今为止中国唯一一株来自脊椎动物的盖他病毒,对猪源GETV的感染谱和致病性、感染和传播机制、环境微生物学及公共卫生等相关研究具有重要意义,并为之提供了宝贵的研究素材。     

辽宁发现库蚊黄病毒

2011年从辽宁省丹东地区蚊虫样品中分离到6株病毒,采用逆转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)检测方法,结果黄病毒属通用引物和库蚊黄病毒特异性引物均为阳性。6株病毒核苷酸序列经基因库(GenBank)比对后,证实6株病毒为库蚊黄病毒,为我国首次报道。将病毒NS5基因和E基因核苷酸序列与GenBank中10株库蚊黄病毒参考毒株核苷酸序列进行比较,并构建遗传进化树,结果显示本次分离的6株病毒与美国和日本的毒株亲缘关系较近。     

中国4省猪场猪盖他病毒感染调查及病原分离鉴定

为了解我国猪盖他病毒(Getah virus,GETV)流行情况,本研究利用RT-PCR和病原分离方法在国内首次对晋、冀、豫、皖4省231个猪场的801份猪脏器和组织进行GETV的病原学调查及部分基因序列分析。试验结果显示,从4省的猪群样品中均检出GETV,其中从231个猪场中32个阳性养殖场的病料中检出37份阳性样品,猪场阳性率为13.9%,样品阳性率为4.62%,并首次从种公猪精液中检出GETV。对该病毒Cap和NSP3基因扩增产物的进行序列分析,发现目前中国猪群中的GETV与日本近年猪源、马源及蚊源毒株亲缘关系最近,其次中国近年蚊源和韩国猪源毒株;遗传进化分析显示49个已知序列的GETV可分为3个群或谱系,其中75.5%的毒株属于2000年以后报道的Ⅲ群,具有明显的地域和年代特征且未发现物种特征。从样品中分离出两株GETV HNNY-1和HNJZ-S2,其全基因组均为11 689bp,且与Cap和NSP3基因序列分析结果基本一致,均与2012年以来的所有日本毒株亲缘关系最近。本研究首次揭示在我国4省份猪群中均有GETV存在且种公猪也可带毒,应引起人们重视。鉴于国内外目前均把该病毒看作是人兽共患病病原,因此有必要对其在中国猪群中的感染谱、传播途径、流行规律、致病性及防控措施等进行深人研究,为实时了解其在人畜间的感染和流行情况、制定有效防控措施提供科学依据。     

人源H5N1禽流感病毒血凝素分子遗传变异特征分析

从GenBank获取已公布的人及相应国家禽感染的H5N1禽流感病毒HA核酸和蛋白序列,用生物软件ClustalX1.83和MEGA4.0对HA基因序列和蛋白分析,构建HA核苷酸遗传进化树.结果表明,HA蛋白上再次出现既能与人又能与禽受体特异性结合的QNG;东南亚和东亚人感染毒株亲缘关系密切,西亚、南亚和非洲人感染毒株遗传距离近;进化树组成和HA蛋白关键位点氨基酸的变异,揭示多数国家的人感染的毒株与当地禽感染毒株高度同源,具有地域性特征,部分国家之间存在着病毒扩散现象.     

急性弛缓性麻痹病例中ECHO11病毒的基因特征分析

该文首次分析了我国ECHO11病毒的分子流行病学资料。1999~2004年,ECHO11病毒是山东省急性弛缓性麻痹(AFP)病例中分离到的优势毒株,2003年从山东省482例AFP病例中共分离到11株ECHO11病毒,其中相关的10例病例分布跨越山东省大部分地区,但发病日期集中在7月和12月。该研究试图通过对VP1编码基因全序列的测定和分析,为探讨ECHO11病毒与AFP之间的病因关系提供线索。分子流行病学研究提示,11株E-CHO11毒株都位于同一传播链,核苷酸同源性为97.2%~100%,氨基酸同源性为99.6%~100%,其中7月和12月的分离株之间相差8~9个核苷酸,氨基酸序列一致。这说明山东省2003年7月和12月分别发生了ECHO11病毒流行,但这些毒株与AFP的病因关系尚需进一步研究。11株病毒组成了A基因型中的一个新亚型,在进化树上单独呈密切相关的一簇,与同基因型内的其它亚型的核苷酸同源性为82.2%~84.7%,氨基酸同源性为94.8%~97.6%。     

22株猪瘟病毒E2基因部分编码序列的序列分析

RT－PCR方法获得了13株猪瘟病毒分离株、石门系强毒、中国C株及法国温度敏感株Thiverval株的E2基因部分编码序列的拉增片段,并对其进行了测序,得到了251bp的E2基因部分编码序列。利用DNAStar软件对其中224bp的片段进行了序列分析,并与已发表的Alfort、Brescia等毒株进行比较,结果13株猪瘟分离株所测片段均为猪瘟病毒E2基因的序列,与石门系强毒的序列相比所有毒株的碱基替换随机地分布于整个序列,无碱基缺失和碱基插入。其中变化较大的区域位于序列的3′端。2 2株HCV E2基因部分编码序列的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为78.1%-100%、78.4%-100%,其中13株猪瘟病毒流行毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为:78.1%-100%、78.4%-100%,4株70－80年代分离的毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为：79.0%-88.3%、81.1%-87.8%,9株90年代分离的毒株的核苷酸及氨基酸同源性范围分别为：90.3%-100%、83.8%-100％;说明猪病毒流行株的变异呈现一定的多样性。     

A型塞尼卡病毒的分离鉴定及生物学特性研究

本文报道了对分离自湖北地区的A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)CH-HB-2017毒株进行鉴定和生物学特性研究。全基因序列分析显示,该分离株与国内毒株CH-HN-2017、CH-HNSL-2017、CH-FJ-2017和美国毒株USA-IA44952-2015、USA-IA44662-2015和USA-SD41901-2015的同源性高。该SVA可在猪肾传代细胞(IBRS-2)和猪睾丸细胞(Swine testis cells,ST)中复制增殖,感染后都能产生CPE,通过病毒一步生长曲线、蚀斑试验和定量PCR等试验表明,该毒株对IBRS-2细胞更易感,病毒滴度更高。本实验成功分离到1株SVA流行毒株,并研究了该毒株的生物学特性,为深入研究该病毒奠定基础。