牙龈卟啉杆菌的分离培养与鉴定

牙龈卟啉杆菌（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍａｎｕｓｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ．Ｐｇ）与成年人慢性牙周炎有密切关系。我们对７６例慢性成人牙周炎龈下菌斑中的Ｐｇ菌进行了分离培养鉴定,共分离出Ｐｇ５５株。从表型特征上看Ｐｇ与其它２株卟啉杆菌极为相似,经ＤＮＡ同源性测定Ｐｇ菌具有高度同源性、且Ｐｇ抗血清特异性较强,血清学手段可作为辅助鉴定该菌的简便方法。本文还对Ｐｇ菌超显微结构进行了研究。     

抗牙龈卟啉单胞菌血凝素2单克隆抗体的制备

目的制备抗牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)血凝素2(hemagglutinin-2,HA-2)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。方法用重组HA-2(recombinant HA-2,rHA-2)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞.用ELISA方法测效价。结果获得1株能够高效识别rHA-2的mAb,命名为4F11。此单克隆抗体的免疫球蛋白亚类为IgG1,效价达1?106。结论成功制备了重组牙龈卟啉单胞菌血凝素2的单克隆抗体mAb.将进一步用于牙龈卟啉单胞菌的诊断,并为牙周疾病的治疗研究奠定基础。     

牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合位点分析

目的 通过竞争性ELISA方法明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2(Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,Pg HA-2)与氯化血红素结合的多肽位点,为牙周病保护性抗体的制备奠定基础.方法 人工合成疑为Pg HA-2氯化血红素结合位点的多肽片段,制备抗Pg HA-2单克隆抗体(MAb QB),通过间接竞争性ELISA,进一步分析血红素特异性结合位点.结果 Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列为DGFPGDHYAVMISK.MAb QB可以抑制Pg HA-2与氯化血红素结合.结论 明确了Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列,确定了Pg HA-2氯化血红素结合位点的位置.为今后Pg HA-2氯化血红素结合位点的鉴定、功能结构区分析和多肽疫苗的制备奠定基础.     

牙龈卟啉单胞菌分子生物学研究进展

牙龈卟啉单胞菌已公认为是牙周炎的致病菌,它的一些表面结构诸如细胞外囊泡,菌毛,外膜蛋白,凝集素介导该菌对牙周组织粘附、定植,或作为毒性因子破坏牙周组织,随着分子生物学技术的发展,已对这些结构进行了分子克隆,本文拟就牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)简称Pg)分子生物学进展作一简要综述。1　菌毛基因的分子克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛作为该菌表面结构之一介导了该菌对牙周组织的粘附和定植。已纯化了41kda菌毛亚单位蛋白,并克隆了菌毛蛋白基因[1]。使用寡核苷酸M1和M2作为引物,采用PCR从9株Pg菌株中扩增了1.3kb的DNA片段,E…     

牙龈卟啉菌基因文库的建立

目的 通过构建牙龈卟啉菌47A－1的基因文库,为进一步深入研究牙龈卟菌的基因结构鉴定基础。方法 选择Sau3AI对牙龈卟啉菌47A－1染色体DNA作酶切,获得的DNA片段与BamBI酶解的质粒pUC18作体外连续并转化大肠杆菌JM109,在含有IPTG、X-gal和氨苄青霉素的LB琼脂平板上,用蓝、白筛选出选出含重组质粒的大肠杆菌扩增并分析。结果 得到的重组质粒经酶切、电泳分析,证实包含牙龈卟啉菌47A－1的插入片段。结论 牙龈卟啉菌47A－1的基因文库构建成功。     

牙龈卟啉单胞菌相关致病因子的研究进展

牙龈卟啉单胞菌是一种生长于口腔内的革兰阴性厌氧茵.它能够利用脂多糖、荚膜多糖、菌毛、牙龈蛋白酶等一系列致病因子,侵袭局部牙周组织并逃避宿主的免疫防御机制,是诱发牙周炎的重要因素之一,引起了学者们的广泛关注.因此,探讨牙龈卟啉单胞菌的致病因子对于牙周炎的防治具有重要意义.     

牙龈卟啉菌牙龈蛋白酶K的基因克隆和序列分析

利用PCR方法 ,分别扩增牙龈卟啉菌牙龈蛋白酶K (KGP)的催化结构域 (KGPcd)和凝集素结构域 (KGP-hag)的基因片段 ,将基因片段插入pGEM-T easyVector,通过限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定, KGPcd和KGP hag的序列与国外文献报道一致。克隆到牙龈卟啉菌KGP的KGPcd和KGP hag基因 ,为体外表达其活性蛋白奠定了基础。     

牙龈卟啉单胞菌蛋白酶及疫苗的研究进展

牙龈卟啉单胞菌 (P g) ,革兰阴性厌氧菌 ,是人类牙周炎的主要致病菌[1] 。动物实验表明它在小鼠、大鼠和灵长类动物的龈下定植与牙周炎的发生和进展相关。P g可以调整真核细胞信号转导途径 ,为了满足新陈代谢的需要 ,P g基因表达的调节可以控制在转录水平。证据表明 ,P g的感染会导致严重的全身系统疾病如心血管疾病和分娩早产儿。P g含有大量毒性因子[2 ] ,如菌毛 ,血凝素[3 ] ,脂多糖等 ,其中Arg、Lys样半胱氨酸蛋白酶在牙周致病作用中占据了一个重要地位 ,他们通过激活宿主前体酶 ,例如 :血纤维蛋白酶原 ,或通过暴露细胞隐位及改变血…     

牙龈卟啉菌特异性克隆探针的筛选

目的 从牙龈卟啉菌47A－1的基因文库中筛选出特异性片段,制备成特异性克隆探针,方法 将牙龈卟啉菌47A－1基因文库中的重组质粒大量扩增和纯化,采用地高辛标记法制备成探针,与口腔中14种常见细菌DNA进行杂交鉴定,检测其特异性,从中筛选出对牙龈叶卟啉菌具有特异性的克隆探针。结果 重组质粒pZJ1与牙龈卟啉菌47A－1杂交,而与其它细菌DNA均不杂交,包括牙龈卟啉菌ATCC33277和W83。结论 重组质粒pZJI可制备成高特异笥克隆探针。     

牙龈卟啉单胞菌血凝素2氯化血红素结合位点多肽对牙龈卟啉单胞菌生长抑制作用

目的探讨牙龈卟啉单胞菌血凝素2（Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,PgHA-2）的氯化血红素结合位点多肽对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,Pg）摄取氯化血红素生长的影响。方法合成多肽DHYAVMISK（肽1）,DEYAVMISK（肽2,肽1中第2位氨基酸突变为谷氨酸）,ALHPDHYLI（肽3,HA-2结合位点不相关多肽）。将肽l、肽2、肽3分别与氯化血红素琼脂糖珠预孵育,加入Pg重组血凝素2（Porphyromonas gingivalis recombinant HA-2,PgrHA-2）,收集与氯化血红素结合的PgrHA-2,SDS—PAGE电泳,分析多肽对PgrHA-2与氯化血红素结合的抑制作用。肽1、肽2、肽3与氯化血红素预孵育后,加入到CDC液体培养基中培养Pg,测定菌液A600值,分析多肽对Pg生长的抑制作用。结果肽1浓度依赖性抑制PgrHA-2与氯化血红素结合,而肽2和肽3对PgrHA-2与氯化血红素的结合无抑制作用。在24、48和72h时间点,肽1组的A600值较肽2、肽3和PBS组明显降低（P〈0．05）。结论本研究表明PgHA-2氯化血红素结合位点多肽DHYAVMISK与Pg竞争结合氯化血红素,抑制Pg的生长,为开发新的牙周病防治方法奠定基础。     

抗人Leptin单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

本研究用本室制备的重组人Leptin为抗原,以鼠伤寒沙门氏裸菌为佐剂,通过脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB/c鼠,以PEG为促融剂,将免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞进行融合,HAT、HT选择性培养基、间接ELISA筛选阳性克隆,有限稀释法进行4次克隆化,获得三株能稳定分泌抗人Leptin单抗的杂交瘤细胞株。对所获得的细胞株及其分泌的单抗特性进行较系统的鉴定显示,获得的单抗特异性高,亲和力强,免疫球蛋白亚类均为IgG3。初步应用的研究显示,获得的单抗不仅可用于体外Leptin的免疫印迹检测,而且可通过免疫组化、免疫荧光等技术用于脂肪组织中Leptin的检测,为Leptin的基础和临床研究奠定了基础。     

PRODUCTION AND WESTERN BLOT CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES SPECIFIC FOR CAMPYLOBACTER JEJUNI AND CAMPYLOBACTER COLI

Reference strains of the Lior serogroups of Campylobacter jejuni and C. coli most frequently encountered in human infections were examined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and western blotting. Seven components appeared to be common to all strains. Purified components were obtained from one strain by electrophoretic separation and elution from preparative SDS-PAGE gels. The purified components were used to immunize BALB/c mice for monoclonal antibody production and to screen hybridoma tissue culture supernatants for specific antibody by enzyme immunoassay. Antibodies from selected hybridomas were characterized on western blots of C. jejuni, C. coli, C. fetus, Salmonella typhimurium, Proteus vulgaris, Citrobacter diversus and Escherichia coli whole cell lysates. At least nine of the monoclonal antibodies appeared to be specific for C. jejuni and C. coli and thus may be useful in tests for the rapid detection of these organisms in foods and other specimens.     

乙型肝炎病毒表面抗原a、d、r亚型单克隆抗体的制备与应用

本文成功地建立了分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原(抗-HBsAg)a,d、r3种亚型决定簇抗体的4株杂交瘤细胞。经一系列生化、免疫学鉴定,证明4株细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)均具有各自的亚型特异性。反复克隆培养16周,并液氮冻存8个月后复苏,抗体的效价仍稳定不变。用纯化的McAb制备RPHA诊断试剂,检测了80例有乙型肝炎自觉症     

南方鲇免疫球蛋白单克隆抗体的制备及特性

采用PEG沉淀结合Sepharose-4B柱层析法分离纯化了健康非免疫状态下南方鲇血清免疫球蛋白,在SDS-PAGE电泳条件下血清免疫球蛋白重链和轻链的分子量分别约为77 kD和27 kD。应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了4个南方鲇免疫球蛋白特异性的单克隆抗体细胞株,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。经抗体亚级份测定,其中IgG1有2株,IgG2a有1株,IgG2b有1株;抗体滴度为104—106,有三株单抗具有Western-blot反应特性,识别南方鲇免疫球蛋白的重链。4株单抗都能特异地识别南方鲇、鲇的免疫球蛋白,而与鲫、草鱼、罗非鱼、斑点叉尾、光泽黄颡鱼血清以及水产动物常见病原菌如气单胞菌、爱德华氏菌、弧菌、柱状屈桡杆菌、沙门氏菌及大肠杆菌等无任何交叉反应。单克隆抗体F4-A12对纯化的南方鲇免疫球蛋白的检测灵敏度为31 ng。实验结果证明这些单抗具有高度特异、高度灵敏等特点,可用于南方鲇免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断,具有广阔的应用前景。     

邻氯青霉素单克隆抗体的制备及特性鉴定

采用碳化二亚胺法,将邻氯青霉素（cloxacillin）与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术获得了一株能稳定分泌抗邻氯青霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株2H8-B1-F4。间接ELISA方法测定,抗体亚类为IgG1,其细胞上清抗体效价为1：1000,腹水效价为1：4×105。与其结构类似物苯唑青霉素、双氯青霉素的交叉反应率为21.3％和19.6％,和氨苄青霉素、羟氨苄青霉素和苄青霉素无交叉反应。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。为进一步研制检测邻氯青霉素的 ELISA试剂盒奠定基础。     

THE USE of FLOW CYTOMETRY FOR the RAPID CHARACTERIZATION of MONOCLONAL ANTIBODY PRODUCTION

Flow cell cytometry is reported here as a rapid fluorescent immunoassay method to characterize monoclonal antibody production in hybridoma cultures. Actinomyces viscosus was the bacterium chosen as a model to illustrate this procedure. Fluorescein isothiocyanate (FITC), coupled to staphylococcal Protein A (PA), was used as the fluorescent marker to detect and quantitate antigen-antibody reactions. Flow cell cytometry was also used with rabbit polyclonal antibodies to A. viscosus coupled with PAFITC for comparison and verification of the two procedures. Over 25,000 individual bacteria could be analyzed in a single cytometer injection within 2 min. the data, presented as histograms and figures, supported the feasibility of this method and also provided an in-depth analysis of the degree of fluorescence, cell size, distribution and light scatter not available with most other immunoassay methods.     

转化生长因子-β_1单克隆抗体TB21的生物学特性(英文)

转化生长因子-β_1(TGF-β_1)是转化生长因子家族中的一个重要成员,具有多种生物学功能,特别是调节细胞的生长和分化,参与细胞外基质合成,创伤愈合和胚胎形态发生等生物学过程。近年来,发展了一些抗TGF-β_1多克隆抗体和个别重组人TGF-β_1的单克隆抗体,对研究各种细胞的TGF-β_1的合成,定位和其它生物学效应发挥了作用。本文报道了抗人血小板TGF-β_1单克隆抗体TB 21的制备及其主要生物学特性,尤其是它对TGF-β_1免疫识别的专一性,以及调变对TGF-β_1敏感细胞的生长和增殖抑制的活性。结果表明,TB_(21)单克隆抗体为IgG_1亚型;对TGF-β_1有较高亲和力,亲和常数(Kaff)为1.47×10~8M~(-1);Westernblot 显示TB_(21)抗体能专一地结合25 Kd 成熟型分子和其12.5 Kd 的单体分子,对CCL/64细胞生长抑制和对NRK-49 F 成纤维细胞软琼脂集落形成的鉴定都证明TB21单抗对TGF-β_1的生物学效应有专一性的中和作用,可用于TGF-β_1的有关生物学研究。     

草鱼生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用经草鱼生长激素(gcGH)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/O-Ag14)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,得到7株阳性杂交瘤细胞株,其中2株为强阳性。交叉试验表明,这些杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)同大鳞大马哈鱼生长激素(sGH)、大鳞大马哈鱼促性腺激素(sGTH)及牛生长激素(bGH)均不起反应。小鼠腹水McAbs滴度高达1:1280000。受体-gcGH-McAb夹心试验表明,McAb确与有活性的gcGH有特异反应。用间接ELISA方法可检测到浓度为0.125#g/ml的gcGH。     

新城疫病毒单克隆抗体的特性及应用

建立了8个分泌抗新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,根据它们的免疫生物学特性可以分为三种类型:(1)具有FA和ELISA特性(FN1、FN4、FN29、FN30、FN35、FNl22);(2)具有FA、ELISA和HI特性(FN7);(3)具有ELISA、HI特性和中和能力(FN106),根据FN30和FN106的ELISA试验,可将11个NDV毒株分为二种不同的抗原群,应用FN4-FITC,FN7-FITC和FN29-HRP试剂,对人工感染NDV和野外送检病例检测结果表明,单抗试剂的DFA阳性率(92.3％)高于病毒分离阳性率(87.2％),两种方法的符合率89.7％,这些单抗试剂用于临床诊断敏感性和特异性高,且方法快速、简便。