食源微生物对季铵盐类消毒剂的抗性

季铵盐类消毒剂基于其高效低毒的杀菌效果,在食品加工、畜牧养殖、公共场所消毒各个方面得到广泛的应用,但是滥用消毒剂会使环境、工农业相关产品中的耐药菌大量产生。本文对国内外关于微生物对季铵盐类消毒剂的抗性概况、耐药基因及其表达产物的特征,以及相应的研究理论和方法进行了综述。     

生牛奶中分离大肠杆菌对季铵盐类消毒剂耐药性研究

目的为调查牛奶中大肠杆菌Escherichia coli的污染状况和对常见季铵盐类消毒剂的耐药情况,为大型养殖场季铵盐类消毒剂的合理使用提供指导。方法对从74份生牛奶样品中分离的45株大肠杆菌采用琼脂稀释法测定4种季铵盐类消毒剂[十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、苯扎氯铵(BC)、双十烷基二甲基氯化铵(DDAC)、氯代十六烷基吡啶(CPC)]的最小抑菌浓度(MIC),采用PCR法检测10种消毒剂耐药基因,并分析其MIC值与耐药基因之间的相关性。结果大肠杆菌对4种消毒剂表现出不同程度的抗性,所检测的4种消毒剂对大肠杆菌的MIC值均大于标准菌株,且比例为BC=DDACCTABCPC。大肠杆菌季铵盐类消毒剂的耐药基因检出率为ydgF(84.44%)ydgE(80.00%)sugE(c)(66.67%)emrE(40.00%)mdfA(37.78%)qacEΔ1(33.33%)qacE(17.78%)qacF(13.33%)qacG(11.11%)sugE(p)(4.44%)。分析大肠杆菌消毒剂基因检出情况与MIC值之间的关系发现,qacF基因的检出率与128 mg·L~(-1)的CPC之间差异有统计学意义。结论由此可见,牛奶中存在大肠杆菌污染严重的现象对季铵盐类消毒剂耐药情况不容乐观,需进一步规范季铵盐类消毒剂的使用。     

大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂耐药性研究

本实验对大熊猫肠道分离的88株大肠杆菌、32株肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂BC、CTPC、CTAB及DDAC的最小抑菌浓度(MIC)值进行测定,并扩增了消毒剂的耐药基因。结果显示,大肠杆菌对季铵盐类消毒剂MIC值为:BC的MIC值介于8~128 mg/L;CTPC的MIC值在32~256 mg/L之间;CTAB的MIC值为64~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~128 mg/L。肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的耐药情况为:BC的MIC值介于16~512 mg/L;CTPC的MIC值在64~256 mg/L之间;CTAB的MIC值介于128~512 mg/L;DDAC的MIC值介于8~64 mg/L。可见,肺炎克雷伯氏菌对季铵盐类消毒剂的MIC值要大于大肠杆菌对季铵盐类消毒剂的MIC值。耐药基因检测结果表明,大肠杆菌季铵盐类消毒剂的染色体型耐药基因扩增率为68.18%~98.86%,最高为sug E(98.86%),emr E最低(68.18%),没有检测出qac E、qac F、qac G,检出率最高的可移动遗传元件介导耐药基因为qac EΔ1(19.31%)。肺炎克雷伯氏菌的染色体型耐药基因检出率为13.64%~28.41%,ydg E最高(28.14%),emr E检出率最低(13.64%),可移动遗传元件介导耐药基因sug E(p)检出率最高(6.82%),qac EΔ1、qac F、qac G基因未检出。测定大熊猫源大肠杆菌及肺炎克雷伯氏菌对消毒剂的耐药性,对圈养大熊猫消毒剂的规范使用,防控大熊猫细菌性疾病以及细菌对消毒剂耐药性有着重要意义。     

鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因检测

目的 了解深圳市人医院鲍曼不动杆菌抗季铵盐类消毒剂基因的检出率及基因型特点.方法 收集深圳市人民医院临床标本中分离鲍曼不动杆菌67株,PCR检测分离株的qacA/B、qacE△1、qacC、qacG和qacJ 5种抗季铵盐类消毒剂基因.结果 67株鲍曼不动杆菌中qacE△l基因阳性42株(62.6％),qacA/B与qacG基因各有一菌株阳性,未检测出qacC或qacJ基因阳性菌株.结论 深圳市人医院鲍曼不动杆菌中抗季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型.     

复合季铵盐消毒剂含量的测定与滴定误差分析

研究复合季铵盐消毒剂含量的测定与滴定误差分析。探讨了四苯硼钠标准液配制及对滴定分析终点颜色的影响,并与单季铵盐定量分析方法进行了对比。结果表明:四苯硼钠两相滴定法适合于复合季铵盐定量分析,但要注意四苯硼钠标准液配制的正确性及滴定终点颜色的判断。     

评价两种消毒剂对IVF实验室微环境和妊娠结局的影响

目的在辅助生殖体外受精(in vitro fertilization,IVF)实验室的胚胎操作过程中,根据消毒剂对胚胎质量和妊娠结局的影响,评价季铵盐消毒剂是否比75%酒精消毒液更适合用于IVF实验室。方法回顾分析2016年1月至9月在我中心行IVF的619例新鲜移植周期,根据IVF实验室使用的消毒剂不同分为两组,A组383例为使用75%酒精消毒组,B组236例使用季铵盐组。对比两组的VOC浓度、获卵数、获卵率、受精率、多精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚形成率、着床率、临床妊娠率以及流产率。结果相比于A组,B组的VOC浓度显著降低;A、B两组的获卵数、获卵率、受精率、多精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚形成率和流产率的差异均不具有统计学意义(P0.05);但B组的着床率和妊娠率显著高于A组(P0.05)。结论两组对胚胎的体外培养质量没有显著性的影响,但使用季铵盐组相比于75%酒精组胚胎着床率和妊娠率显著提高。因此,季铵盐消毒剂比75%酒精更适合作为IVF实验室消毒剂。     

铜绿假单胞菌耐消毒剂基因检测

目的了解深圳市人民医院临床分离的铜绿假单胞菌耐季胺盐类消毒剂基因(qac)的检出率及基因型。方法收集深圳市人民医院近几年铜绿假单胞菌临床分离菌株63株,应用PCR法检测菌株的qacA/B、qacC、qacG、qacJ和qacE△1基因。结果63株铜绿假单胞菌中,qacE△1基因阳性51株(80.9%),qacA/B基因阳性5株(7.9%),其余的基因型未检出。结论我院临床分离的铜绿假单胞菌中耐季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型。     

双链季铵盐复合邻苯二甲醛消毒液研制及比较

通过将邻苯二甲醛、双链季铵盐与相应助剂进行复配,制备一种新型的复合消毒剂,并进行灭菌消毒试验、清洗效果及稳定性试验。实验证明邻苯二甲醛复合消毒剂浓度在2000 mg/L时对白色念珠菌的杀灭效果达100%。该复合消毒剂原液经45℃恒温放置15 d,邻苯二甲醛的下降率为2.26%左右,稳定性和杀菌能力有明显提高。对油脂清洗率达98%以上,具有消毒清洗双功能。因此邻苯二甲醛复合消毒剂对消化内镜消毒灭菌效果高,耗时短,用法简便,并可降低对医务人员健康的危害性,是值得在医院临床推广使用的高效消毒剂。     

阳离子脂质体的细胞毒性

基因治疗中,基因载体起着关键作用。阳离子脂质体作为一种非病毒基因载体,在基因治疗中有着广阔的应用前景。阳离子脂质体的细胞毒性与类脂结构有关,按照头部结构的不同,阳离子脂质体有季铵盐类、胺类、氨基酸或多肽类、胍盐和杂环类等。本文主要介绍了头部结构为季铵盐类、胺类、氨基酸或多肽类的阳离子脂质体及不同的连接键和尾部导致的细胞毒性分析。     

鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素及消毒剂的耐药性研究

为研究鸡蛋生产链中沙门氏菌的污染情况及抗生素、消毒剂耐药情况,本文鉴定了鸡蛋生产链中分离得到的111株沙门氏菌(Salmonella)血清型,并测定了抗生素和消毒剂对沙门氏菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentrations, MICs),检测了其对抗生素和消毒剂的耐药基因的表达情况。研究结果表明,沙门氏菌对甲氧苄啶(Trimethoprim, TMP)耐药率最高(N=100,P=90.09%),对阿莫西林/克拉维酸(Amoxicillin and clavulanate, AMC)、头孢噻呋钠(Sodium ceftiofur, CFS)、庆大霉素(Gentamicin, CN)敏感。沙门氏菌共产生6种不同的耐药谱型,TMP是最主要的耐药谱型(N=36,P=32.43%),52.25%的菌株(N=58)具有多重耐药性。苯扎氯铵(Benzalkonium chloride, BC)与氯化十六烷基吡啶(Cetylpyridinium chloride, CPC)对沙门氏菌的MIC的范围分别为：8~128 μg/mL、8~256 μg/mL。相对于质控菌株Escherichia coli ATCC10536,101株沙门氏菌对BC和CPC同时具有较高的耐药性(P=90.99%),109株沙门氏菌对抗生素和消毒剂具有共同耐药性(P=98.20%)。抗生素耐药基因检出率最高为blaTEM(N=49, P=44.14%),未检测出qnrA、qnrB、qepA基因,仅检测出qacEΔ1消毒剂耐药基因(N=63, P=56.76%)。抗生素耐药基因sul1和消毒剂耐药基因qacEΔ1具有显著相关性(P<0.01)。S. Derby对TMP、土霉素(Oxytetracycline, OTC)、阿莫西林(Amoxicillin, AML)、环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)同时表现较高的耐药性,S. Derby检出了11种抗生素耐药基因,消毒剂耐药基因qacEΔ1的检出率为81.25%(N=52)。鸡场中养殖内环境沙门氏菌对抗生素和消毒剂的耐药率以及耐药基因检出率均高于养殖外环境,鸡蛋包装、储存及销售等环节中沙门氏菌耐药率及耐药基因检出率均较高。由此可见,鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素、消毒剂耐药性较严重,且存在共同耐药的现象。因此,需要进一步规范防控鸡场中沙门氏菌,规范抗生素和消毒剂的使用以及加强鸡蛋生产链条中卫生安全的监管。     

南方食品中沙门氏菌污染调查及分型

摘要:【目的】系统调查我国南方代表性地区食品中沙门氏菌污染情况,并对分离株进行血清分型和肠杆菌基因间重复共有序列聚合酶链式反应(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Polymerase Chain Reaction,ERIC-PCR)分型研究,为溯源和控制食品中沙门氏菌的污染提供数据。【方法】采用定性法和最大可能数(Most Probable Number,MPN)法对七大类食品(肉与肉制品、水产品、速冻食品、熟食、蔬菜、乳制品和食用菌)中的沙门氏菌进行检测。利用血清分型和分子分型确定南方沙门氏菌血清型的分布和优势血清型,研究分离株的遗传多样性。【结果】从400份食品样品共检出75 份沙门氏菌阳性样品,污染率为18.8%(75/400)。其中,97.3%(73/75)的阳性样品污染水平均低于10 MPN/g。对93株分离株进行血清分型,分属9个群、29种血清型。优势血清型为德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby)和鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)。利用ERIC-PCR对96株沙门氏菌(包括93株分离株和3株标准株)进行分型研究发现,在相似系数为0.75时可分为15个聚类簇,56种型别,分离株的基因型别呈现多样性。【结论】南 方食品中沙门氏菌的污染率较高,但污染水平低。S. Derby和S. Typhimurium为优势血清型。初步建立了沙门氏菌ERIC-PCR指纹图谱数据库,南方食品中沙门氏菌的血清型和基因型呈现多样性。     

7种消毒剂对鲟4种病原菌体外抑菌效果

为了筛选高效的消毒剂用于防治鲟细菌性疾病,采用二倍稀释法测定了7种消毒剂对鲟4种病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。结果显示,高铁酸钾对鲟4种病原菌抑菌效果最好,MIC为8 mg/L,MBC为8¹6 mg/L,戊二醛、甲醛、苯扎溴铵、过氧化氢及季铵盐络合碘5种消毒剂抑菌效果中等,聚维酮碘对鲟4种病原菌抑菌效果最差,聚维酮碘对鲟4种病原菌的MBC最大值为2048 mg/L。根据上述研究结果,选择抑菌效果好的消毒剂高铁酸钾进一步研究了鲟4种病原菌随时间和高铁酸钾浓度变化的生长趋势,显示消毒液浓度为5 mg/L、9 mg/L的消毒液在短时间能抑制病原菌生长繁殖,病原菌数量同样能在短时间内繁殖恢复到原来的水平,浓度为13 mg/L、17 mg/L的高铁酸钾消毒液能快速杀灭病原菌,病原菌在较长时间维持在较低水平,甚至病原菌全部被杀死。研究对于使用高铁酸钾防治鲟养殖实践中的疾病具有重要的指导意义。     

饲料中添加壳聚糖季铵盐对凡纳滨对虾生长及非特异免疫的影响

实验研究壳聚糖季铵盐对凡纳滨对虾生长性能及非特异性免疫能力的影响。在饲料中分别添加0、0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的壳聚糖季铵盐, 制成5组等氮等能饲料。将900尾[初体质量(3.820.34) g]健康的凡纳滨对虾随机分成5组(45尾4平行), 养殖时间56d。结果表明:饲料中添加壳聚糖季铵盐显著影响凡纳滨对虾的生长, 0.15%实验组凡纳滨对虾的增重率和特定生长率最佳(P0.05)。饲料中添加壳聚糖季铵盐0.1%、0.15%和0.20%能显著提高凡纳滨对虾血清溶菌酶和碱性磷酸酶及酚氧化酶的活性(P0.05)。饲料中添加壳聚糖季铵盐可显著提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力(P0.05), 0.15%组的保护效果最好, 其相对免疫保护率为33.24%。壳聚糖季铵盐能显著提高凡纳滨对虾的生长性能和抗病能力, 本实验条件下适宜的添加量为0.15%。     

食品中不同环境条件对沙门氏菌持留菌形成的影响

由于食品环境因素对于沙门氏菌持留菌形成的影响尚不明确,选取食品中常见环境因素pH、NaCl和温度,研究其对沙门氏菌持留菌形成的影响。采用两倍梯度稀释法测定环丙沙星最低抑菌浓度(MIC),根据不同浓度倍数MIC处理沙门氏菌的结果,将50倍MIC处理4 h作为分离并得到持留菌的条件。采用单因素实验分别控制不同的pH、NaCl浓度和温度等沙门氏菌生长的环境条件,结果发现：与pH为7.0、1.0%NaCl、37℃时的沙门氏菌持留菌相比,pH为4.0、6.0%NaCl、15℃时的沙门氏菌持留菌形成数量上升,分别上升了1.47、1.32和1.54(以lg(存活率)计),P<0.05)。此外,本文验证了沙门氏菌持留菌的数量和比例与沙门氏菌生长呈正相关关系,为后续探究食品环境中沙门氏菌持留菌形成机制和防控奠定了基础。     

IMSA技术快速检测沙门氏菌方法的建立及应用

[目的]建立和评价一种快速、准确地检测食品中沙门氏菌的检测方法,对食品安全控制具有重要意义。[方法]应用等温多自配引发扩增技术(Isothermal Multiple Self-matching-initiated Amplification,IMSA),设计筛选出沙门氏菌的特异性基因inv A基因的IMSA引物,并建立检测沙门氏菌的IMSA法。对建立的方法进行特异性和灵敏度试验;确定人工污染样本能被该方法检出的最短增菌时间和最低检测灵敏度;利用IMSA法和培养法对13份食品样本进行检测,评价两者的一致性。[结果]该方法仅对沙门氏菌特异性扩增,灵敏度达3.02×10~2CFU/m L;人工污染样本最短培养6 h可被IMSA法检出,检出限为3.17CFU/25 g; 13份食品样本的IMSA法与培养法结果一致性为100%。[结论]IMSA技术检测沙门氏菌的灵敏度高、特异性强、结果准确,可在7h内完成食品中沙门氏菌的检测,适合用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

MdrL外排泵在单核细胞增生李斯特菌对苯扎氯铵耐受中的作用

【背景】季铵盐类消毒剂特别是苯扎氯铵(Benzalkonium chloride,BC)在食品工业中的广泛应用导致单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)对BC的敏感性下降。外排泵是介导Lm对BC耐受的主要机制。【目的】调查Mdr L外排泵在Lm对BC耐受中的作用。【方法】利用同源重组技术构建mdr L基因缺失株。比较野生株EGD-e和突变株Δmdr L在对BC的耐受性、亚致死浓度BC(2μg/m L)胁迫下的生长情况以及致死浓度BC(16μg/m L)下的存活率等方面的差异。【结果】构建mdr L基因缺失株Δmdr L及回复突变株CΔmdr L。mdr L的缺失不影响菌株对BC的最小抑菌浓度。生长曲线测定结果显示,与野生株相比,突变株在亚致死浓度BC作用下的生长迟滞期延长、平均最大生长率和平均最大光密度值均降低。当BC浓度为4μg/m L时,梯度稀释后的野生株和突变株在平板上的生长显现出明显的差异。与野生株相比,突变株在致死浓度BC作用下的存活率降低2个log值。透射电镜的观察结果显示,加入BC后,突变株的细胞明显变细长。此外,野生株和突变株对溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)的积累和外排无明显差异。【结论】Mdr L外排泵介导Lm对BC的耐受,但是与Lm对EB的外排无关。     

鸡的沙门氏菌基因图

科学家们已经首次研制出了鸡的基因蓝图,这为可能减少人类食物沙门氏菌中毒迈出了一步。最新的进展使科学家们接近了对鸡类抗沙门氏菌基因的鉴定工作。一旦这种基因被发现和克隆,可将它们转入到非抗性品种中,从而保护它们。在动物健康与农业和食品研究院工作的Nat Bumstead博士和他的同事们     

应用MUCAP试剂快速检测沙门氏菌

报告了用4-甲基伞形酮辛酯(4-Methylumbelliferyl-caprylate, MUCAP)快速检测沙门氏菌的特异性、敏感性和实用性。经HE,DHL,SS和麦康凯琼脂平板分离的65株沙门氏菌标准菌株和48株从食品中分离的沙门氏菌,用MUCAP测试均呈阳性反应;394株非沙门氏菌中呈阳性反应的假单胞菌、气单胞菌、邻单胞菌可通过氧化酶试验与沙门氏菌区分开;与粘质沙雷氏菌的交叉反应改用加1％蔗糖的分离平板也可排除。此方法的敏感性和特异性均达到97％以上,而且操作简便、快速,数分钟内即可完成。     

壳聚糖季铵盐合成及其抗氧化性能研究

通过Eschweiler Clarke反应得到N,N-二甲基壳聚糖中间体。然后与碘甲烷反应生成水溶性的壳聚糖季铵盐:N,N,N-三甲基壳聚糖碘化铵(TMCI)。检测三种不同取代度的季铵盐产品对羟基自由基(.OH)、超氧自由基(O2-.)的清除率。结果发现:取代度为33.9%时,对.OH的最大清除率为40.2%,对O2-.的最大抑制率为65.6%。并且季铵盐产品对两种自由基的清除率都随着取代度的增大而减小,取代度为80.3%的产品对这两种自由基几乎无清除作用。     

用荧光标记O-I噬菌体快速检测食品源沙门氏菌

[目的]利用O-I噬菌体几乎可裂解沙门氏菌属细菌的特性建立快速检测食品中沙门氏菌的方法.[方法]用核酸荧光染料SYBR gold染料标记O-I噬菌体侵染100株试验菌及120份食品样品菌,荧光显微镜鉴定沙门氏菌;并测灵敏度.[结果]100株试验菌中40株沙门氏菌可见杆状荧光,而10株变形杆菌、20株志贺氏菌、20株大肠杆菌和10株葡萄球菌均无荧光;沙门氏菌检测灵敏度达10 CFU/100 μL;120份食品样品中沙门氏菌的O-I噬菌体检测与生化鉴定结果的阳性率分别为9.17%和10%,符合率为91.7%.[结论]试验表明用荧光标记的O-I噬菌体可以快速、直观、准确、大量地检测食品中沙门氏菌.