戊糖片球菌热胁迫应答机制探究

目的以发酵柚子皮中分离到的戊糖片球菌WPPE03、WPPE04作为研究对象,用标准株CGMCC1.2695作为对照,探索其热胁迫相关机制。方法通过平板计数法,确定戊糖片球菌的热适应条件和热致死条件;采用扫描电子显微镜观察细胞热应激前后形态学变化;应用RT-qPCR分析热休克蛋白及细胞膜脂肪酸合成相关基因转录水平变化,阐明热胁迫机制。结果确定了三株戊糖片球菌热适应条件(47℃,60min)和热致死评价条件(62℃,15min);发现了热致死条件处理菌体,膜表面会出现凹陷、皱褶,部分菌体出现破裂、胞内物质外溢等现象,而热致死条件处理前先经过热适应处理,菌体破裂现象明显减少;同时,证明了热应激处理过程中,相关热休克蛋白基因表达显著上调(P0.05),脂肪酸合成相关基因表达发生了变化。结论研究戊糖片球菌的热应答相关机制,可为合理开发、利用具有发酵性能的戊糖片球菌提供借鉴。     

发酵柚子皮戊糖片球菌的分离及生物学特性分析

目的从发酵柚子皮中分离具有优良性能的戊糖片球菌。方法对5株戊糖片球菌分离株(WPPE01、WPPE02、WPPE03、WPPE04和WPPE05)以及标准株CGMCC 1.2695的生物学特性和安全性进行系统分析。结果 WPPE02和WPPE04的耐酸性优于其他菌株,WPPE01和WPPE05的耐胆盐能力优于其他菌株,WPPE01和WPPE03同时具有较强的自聚及粘附能力,WPPE02具有最强的盐耐受能力,WPPE03的耐热性能最强。与其他受试细菌相比,5株戊糖片球菌对单增李斯特菌具有最强的抑制效果,WPPE01和WPPE03对大肠埃希菌的抑制效果显著优于标准株。分离株主要通过置换的方式抑制大肠埃希菌O157:H7对Caco-2细胞的粘附且WPPE02和WPPE03的抑制效果最强。全部戊糖片球菌均对部分抗生素敏感且不具有溶血性。结论 5株从发酵柚子皮中分离的戊糖片球菌具有作为益生菌应用的潜能。     

广西传统发酵米粉中乳酸菌的分离鉴定

对广西传统米粉发酵液中的乳酸菌进行分离筛选,获得6株纯培养优势菌株。通过形态学鉴定及16S rDNA序列分析,结果表明其中4株乳酸菌属于戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),另外2株鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。这2种乳酸菌均为对人类及动物安全的益生菌,该结果将为传统发酵米粉中有益微生物资源的挖掘和利用奠定基础。     

中国传统酸肉发酵过程中微生物的消长变化*

对我国传统发酵酸肉中的微生物种群进行了研究,从中分离到大量的米酒乳杆菌、戊糖片球菌、乳酸片球菌、明串珠菌等多种乳酸细菌和德巴利氏酵母、球拟酵母等微生物,这些微生物在发酵过程中有一个动态的变化。发酵全过程中优势微生物种群是乳酸细菌、微球菌、德巴利氏酵母和球拟酵母,为高效天然肉品发酵剂的研究与开发提供了生物资源。     

乳酸菌粘附力与生物膜、疏水性和自凝集特性的研究

目的益生菌粘附能力的强弱是其发挥益生作用的前提条件,因此确定细菌粘附力的初筛指标对于益生菌的研究意义重大。方法以5株乳酸菌为研究对象,对其生物膜、疏水性和自凝集的特性进行研究。结果德氏乳杆菌DM8909、罗伊乳杆菌RC-14具有良好的疏水性和自凝集能力,且成膜能力较强,而戊糖片球菌则疏水性、自凝集和生物膜的形成能力都较弱。结论疏水性、自凝集能力和生物膜形成能力三者关系具有正相关,均可作为粘附能力的考察指标。     

一株产γ-氨基丁酸的戊糖片球菌分离鉴定及药敏分析

目的 从健康人肠道微生物群中分离功能菌株。方法 从健康人粪便中分离肠道菌株,进行形态学观察、生理生化鉴定和16S rDNA测序分析,并对分离的菌株进行耐药特性评估,利用ELISA试剂盒测定发酵液中γ-氨基丁酸的含量。结果 本研究分离得到菌株为革兰阳性球菌,生理生化反应初步判断为片球菌属,16S rDNA测序鉴定为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）,该菌株命名为P. pentosaceus WMU002。该菌株对氨苄西林、亚胺培南、头孢曲松、头孢噻肟、大环内酯类红霉素、克林霉素和哌拉西林敏感,对丁胺卡那、新生霉素、头孢西丁和甲氧嘧啶耐药。24 h发酵液γ-氨基丁酸含量为4.12μmol/L。结论 从健康人肠道中分离获得的1株产γ-氨基丁酸的P. pentosaceus WMU002菌株可作为人体益生菌制剂候选菌株。     

片球菌素pedA基因的原核表达、纯化及生物信息学分析

旨在构建片球菌素PA-1结构基因pedA的原核表达载体,在大肠杆菌体系中实现PA-1的外源表达,运用生物信息学手段分析重组蛋白的理化性质及分子结构。以戊糖片球菌C-2-1的DNA为模板,扩增pedA基因,扩增产物克隆入pET28a(+)原核表达载体,构建pET28a-ped A重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3)中;30℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达5 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,检测纯化后重组蛋白的抑菌活性;利用生物信息学手段探究重组蛋白的理化性质及分子结构信息。结果显示,pET28a-ped A重组质粒构建成功,带有His标签的PA-1重组片球菌素在大肠杆菌中实现了可溶性表达,利用Ni-NTA亲和层析获得纯化的重组蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分析表明纯化后的重组蛋白分子量约为7.8 k D,与理论值相符。琼脂扩散法抑菌活性实验抑菌圈效果明显,表明纯化的重组片球菌素具有抑菌活性。生物信息学方法对比分析其蛋白结构发现,获得的重组蛋白含有信号肽,α螺旋占23.53%,疏水性提高,可能促进了重组蛋白的可溶性表达。该实验成功构建了片球菌素PA-1的原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的可溶性表达,该表达可能与其含有信号肽及信号肽疏水性有关,纯化后的重组蛋白抑菌活性明显。     

内蒙古地区传统制作奶豆腐和乌日莫中乳酸菌多样性及分布特征

【背景】传统制作奶豆腐和酸性奶油(乌日莫)是内蒙古农牧地区最喜爱的食品,蕴含着十分丰富的乳酸菌资源,亟待开发利用。【目的】通过解析内蒙古农牧地区传统自制奶豆腐和乌日莫样品中乳酸菌多样性及分布特征,为优良菌株选育与利用提供资源和理论基础。【方法】采用稀释涂布法分离纯化乳酸菌,测定菌株16S rRNA基因序列鉴定种属关系,阐明乳酸菌系统发育、遗传分化及菌群结构。【结果】传统自制样品中共分离得到乳酸菌81株,主要归属于乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、食二酸乳杆菌(Lactobacillus diolivorans)、奥塔基乳杆菌(Lactobacillus otakiensis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefir)、乳酸乳球菌(Lactoc...     

青藏高原乳酸菌对垂穗披碱草青贮饲料发酵品质的影响

摘要:【目的】为了探究青藏高原乳酸菌对垂穗披碱草发酵品质的影响。【方法】本试验将3株从青藏高原垂穗披碱草(Elymus nutans Griseb.)中筛选的耐低温乳酸菌(戊糖片球菌PP-6,植物乳杆菌LP-2和清酒乳杆菌LS-5)作为添加剂加入垂穗披碱草进行青贮,同时对其生理生化特性进行研究,并以低海拔条件下分离得到的相同菌种的商品化乳酸菌制剂为对照,研究所筛选的3 株优良乳酸菌在低温(15 ℃)和常温条件(25 ℃)下对垂穗披碱草青贮饲料发酵品质的影响。【结果】试验结果表明,在碳源利用方面,分离得到的戊糖片球菌PP-6(Pediococcus pentosaceus)发酵棉子糖、乳糖、山梨醇、蜜二糖和蔗糖,清酒乳杆菌LS-5(lactobacillus sakei)可发酵棉子糖、苦杏仁苷、鼠李糖、乳糖、山梨醇、木糖、阿拉伯糖、蜜二糖和蔗糖,而相同菌种的商品菌均不能利用,表明高原乳酸菌具有更广泛的糖源利用特性。将筛选得到的3株低温生长优良菌株进行青藏高原垂穗披碱草青贮发酵试验,青贮50 d后,与对照的商品菌处理相比,在15 ℃时,清酒乳杆菌LS-5显著降低了青贮饲料pH值、丙酸含量和氨态氮/全氮值(P＜0.05),且能够保存更多的水溶性碳水化合物和粗蛋白;植物乳杆菌LP-2(lactobacillus plantarum)和戊糖片球菌PP-6作为复合添加剂显著提高了青贮饲料乳酸含量(P＜0.05),显著降低了氨态氮/全氮值和中性洗涤纤维含量(P＜0.05),能够保存更多的粗蛋白。但在25 ℃时,此3株菌与对照菌种相比均无明显优势。【结论】上述结果表明,从青藏高原分离筛选的3株菌种在低温条件下可有效提高青藏高原垂穗披碱草青贮饲料的发酵品质。     

葡萄藤叶青贮中乳酸菌的分离与鉴定

为了筛选出性状优良的乳酸菌菌株,本试验以实验室纯培养方式从葡萄藤叶自然发酵的青贮中分离鉴定乳酸菌。经过菌落形态、细胞形态、生理生化鉴定和16S r DNA基因序列以及系统发育树的分析,从葡萄藤叶青贮中分离出5株乳酸菌,其中菌株P-1. 2和P-2. 2为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus),菌株P-1. 7为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus),菌株P-2. 1为粪肠球菌(Enterococcus faecium),菌株P-2. 3为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。测定产酸速率和生长速率,发现菌株P-2. 1的产酸能力和生长性能最好。     

屎肠球菌对斑节对虾肠道代谢组学及炎性因子的影响

【背景】屎肠球菌(Enterococcus faecium)作为乳酸菌属的潜在益生菌,因其具有良好的生物学特性在动物养殖中应用广泛,但是屎肠球菌对肠道代谢组学的研究很少。【目的】以斑节对虾为试验动物,初步探究屎肠球菌R8对肠道代谢组学及炎性因子的影响,为屎肠球菌作为益生菌在对虾养殖中的应用提供理论基础。【方法】将400条斑节对虾随机分配,设计饲料中屎肠球菌添加量分别为107、108、109 CFU/g的3个试验组,不添加屎肠球菌为对照组进行试验,养殖周期为28 d。养殖周期结束后测定斑节对虾免疫球蛋白M (immunoglobulin M,IgM)、对虾酚氧化酶(phenoloxidase,PO)、白介素6 (interleukin 6,IL-6)、补体片段3a (complement fragment 3a,C3a)的活性含量并运用LC-MS代谢组学研究肠道内源代谢物的变化,分析差异代谢物和相关的代谢通路。【结果】添加屎肠球菌对斑节对虾炎性因子有积极的影响,增加了斑节对虾体内免疫球蛋白IgM、对虾酚氧化酶、补体片段3a的含量,降低了其体内IL-6的含量,对肠道差异代谢物的分析发现,对...     

乳酸菌遗传育种研究现状

乳酸菌是一大类发酵糖产生大量乳酸的细菌的通称 ,主要包括乳杆菌、双歧杆菌、乳球菌、链球菌、肠球菌、明串珠菌、片球菌、芽胞杆菌等属。乳酸菌在医药、工业、农业等与人类生活密切相关的重要领域有很高的应用价值 ,如乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌发酵的酸奶 ,应用于保健食品 ;植物乳杆菌应用于青贮饲料 ;乳杆菌、双歧杆菌等应用于临床医疗。但目前很多菌种都是野生型的 ,其某些性状、功能不太令人满意。因此 ,许多研究者通过微生物遗传育种来改良野生型菌株的某些遗传性状 ,以更适合开发利用其价值。1　传统的乳酸菌菌种改良方法1 1　…     

生物转化生产D-塔格糖的食品级菌种选育及L-阿拉伯糖异构酶的克隆表达

L-阿拉伯糖异构酶(L-arabinose isomerase,L-AI)是一种可以催化D-半乳糖为D-塔格糖的胞内异构化酶。随着塔格糖在食品工业中越来越广泛的应用,能够将半乳糖转化为塔格糖的食品级微生物以及食品级来源的L-AI受到更大的关注。文中从各种酸奶制品、泡菜及其他一些食品中采集不同的样品,筛选出1株具有L-AI酶活的食品级菌株,经过生理生化鉴定以及16S rDNA序列测定,确定该菌株为戊糖片球菌,命名为Pediococcus pentosaceus PC-5。以该菌基因组为模板,克隆L-AI基因,并在大肠杆菌BL21成功地异源表达。表达产物经粗提取后,在40℃下加入Mn2+,使D-半乳糖转化为D-塔格糖的转化率为33%。     

伏立康唑治疗隐球菌病的研究进展

伏立康唑是新型的三唑类抗真菌药,现对隐球菌体外药敏试验、动物实验以及治疗隐球菌病的临床应用作一综述.     

不同麻醉藥对于頸动脈竇反射性呼吸反应的影响

刺激犬颈动脉窦压力感受器所引起的呼吸反应的形式,和所用麻醉药的种类有密切关系。用硫贲妥钠、安密妥钠和巴比妥钠麻醉的动物,呼吸反应以兴奋为主。用戊巴比妥钠麻醉的动物,抑制反应略多于兴奋反应。用氯醛糖麻醉的动物,以兴奋或双相反应占多数,而在氨基甲酸乙酯麻醉下的动物,则以抑制反应为主要形式。切除两侧颈迷走神经干,能够影响呼吸反应,但和所用麻醉药的种类也有—定关系。用硫贲妥钠、安密妥钠和巴比妥钠麻醉的动物,在切断迷走神经干后,仍以兴奋为主要反应,其中部分动物的兴奋程度变得更加明显,少数动物与呼吸加强同时,呼吸频率稍为减低。用氨基甲酸乙酯、戊巴比妥钠或氯醛糖麻醉的动物切断迷走神经后有利于抑制反应的加深或发展。加深麻醉能够影响呼吸反应的程度,但是并不改变呼吸反应的形式。颈动脉窦压力感受性呼吸反应的刺激合,在我们的实验情况下以120——140毫米汞柱的最为多见,切断颈迷走神经干后,合值稍为降低。麻醉药种类不同和切断迷走神经对呼吸反应的影响以及颈动脉窦压力感受性呼吸反应的传入途径,文中曾予讨论。     

乳酸菌表面蛋白对免疫细胞的诱导增殖及粘附抑制效应

目的研究表面蛋白在乳酸菌体外粘附和激活免疫细胞中的作用。方法应用5mol/L氯化锂结合盐酸胍提取植物乳杆菌LpYZU09、干酪乳杆菌LcYZU02、鼠李糖乳杆菌LrGG、发酵乳杆菌LfYZU15及戊糖片球菌PpYZU32的表面蛋白,并分析提取物对乳酸菌粘附鼠肠上皮细胞、巨噬细胞和脾细胞的抑制作用及诱导增殖效应。结果表面蛋白对3种细胞粘附菌体均具有显著抑制效应,抑制作用具有细胞和菌株差异性,其中菌株LrGG表面蛋白对巨噬细胞粘附5种菌体普遍显示了较强的抑制作用,抑制率为38.7%~76.0%。不同菌株表面蛋白对肠上皮细胞的诱导增殖指数为0.05~0.35,对巨噬细胞为0.05~0.42,对脾细胞为0.02~0.40,诱导效应具有菌株和剂量依赖性,菌株LrGG的诱导增殖指数显著高于其他四种。结论乳酸菌表面的蛋白类因子在粘附和激活免疫细胞中发挥了重要作用。     

乳酸菌细菌素的研究动向

乳酸菌是一类发酵糖产生大量乳酸、分解蛋白质但不产生有毒物质的细菌,主要包括乳球菌(Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ)、明串珠菌(Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ)、片球菌(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ)、乳杆菌(Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ)和肉食杆菌(Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)等属?..     

一株益生性粪肠球菌的安全性评价

目的研究1株微生态活菌制品生产用粪肠球菌的安全性。方法采用目前肠球菌安全性评价主要方法,测定粪肠球菌GMCC 0460.3株的全基因组序列并分析毒力和耐药性相关基因;以生物化学方法测定其耐药性和有毒代谢产物的产生情况;经口灌胃小鼠测定其动物体内毒力。结果该株肠球菌对卡那霉素和磺胺类药物耐药,耐药谱窄;基因组存在多种肠球菌毒力基因;生化试验表明其溶血性阴性、氨基脱羧酶活性阴性、硝基还原酶活性较低、细胞表面疏水性较低、生物膜形成能力较弱;动物实验结果表明该株菌在小鼠体内无明显毒性作用。结论粪肠球菌GMCC0 460.3株实验评价的结果显示了良好的安全性。     

青藏高原几种牧草附着耐低温乳酸菌的筛选

为筛选出适宜青藏高原低温发酵优良菌株,针对从青藏高原垂穗披碱草(Elymus nutans)、燕麦(Avena satival L.)和藏嵩草(Koeleria tibetica)中分离出的148株乳酸菌,经10℃低温条件下MRS液体培养基与不同培养时间(12、24、36和48 h)初筛后,进一步将初筛的菌株通过不同温度(10、15和25℃)条件下绿汁发酵液的复筛,并对其进行生理生化特性研究。结果表明,植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)31、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Q5、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)Q6和棒状乳杆菌(Lactobacillus coryniformis)Q7这4株菌在MRS液体培养基和绿汁发酵液较低温环境中生长活性和快速产酸能力较强,而且生理生化特性指标表明,Q5比对应模式菌具有更广泛的糖源利用能力,Q7较对应模式菌具有更强的耐酸和耐低温特性。因此,上述4株乳酸菌可作为适宜青藏高原低温发酵青贮饲料备选菌株。     

硫代乙酰胺对戊巴比妥钠睡眠时间和肝脏药物转化的影响

给小鼠皮下注射硫代乙酰胺60毫克/公斤后48小时戊巴比妥钠睡眠时间明显延长;同剂量的硫代乙酰胺给大鼠后在12—72小时内戊巴比妥钠睡眠时间也都明显延长,而以48小时者最为明显。进一步实验发现48小时前接受一剂硫代乙酰胺处理的小鼠,戊巴比妥钠自体内消失的速率比正常动物者明显减慢;12—72小时前曾接受一剂硫代乙酰胺的大鼠肝切片转化戊巴比妥钠的速率比正常动物肝切片者小,此与戊巴比妥钠睡眠时间的延长相一致。可见,经硫代乙酰胺处理的动物的戊巴比妥钠睡眠时间延长的原因之一,是由于硫代乙酰胺抑制了肝脏对戊巴比妥钠的转化。另一方面,48小时前曾接受过硫代乙酰胺处理的小鼠,睡眠刚醒时,体内戊巴比妥钠含量明显地低于对照组;曾经硫代乙酰胺处理的大鼠刚醒时,脑组织的戊巴比妥钠含量明显低于对照组者。在经硫代乙酰胺处理后的小鼠,戊巴比妥钠引起睡眠的 ED_(50)明显减小;二乙基巴比妥钠的睡眠时间亦明显延长。这些结果说明硫代乙酰胺处理也增加了动物中枢对戊巴比妥类药物的敏感性。