温度和盐度对吉富品系尼罗罗非鱼幼鱼鳃Na+-K+-ATPase活力的联合效应

试验采用中心组合设计(central composite face-centered design,CCF)和响应曲面法(response surface methodology,RSM)研究了温度(12—34℃)和盐度(0—26)两因素对体长为(4.36±0.105)cm,体重为(2.45±0.153)g的吉富品系尼罗罗非鱼(GIFT Nile tilapia,Oreochromis niloticus;简称吉富罗非鱼)幼鱼鳃Na+-K+-ATPase活力的联合效应。结果表明:(1)温度和盐度的一次效应和二次效应对Na+-K+-ATPase活力影响极显著(P<0.01),温度和盐度的互作效应不显著(P>0.05);(2)经响应曲面法分析,随着温度和盐度的增大,Na+-K+-ATPase活力呈先减小后增大的趋势;(3)建立了Na+-K+-ATPase活力与温度、盐度间关系的模型方程(R2=0.9829,Pred.R2=0.8550,P<0.01),并可用于预测吉富罗非鱼幼鱼鳃Na+-K+-ATPase的活力;(4)优化结果显示,温度为24.15℃,盐度为11.75时,Na+-K+-ATPase活力最小为0.62μmol无机磷.mg-1蛋白.h-1,满意度函数值高达0.961。Na+-K+-ATPase活力可以作为检测罗非鱼生长性能的指标,其活力较低时,一般反映了鱼体生存环境适宜,生长代谢旺盛,消耗于渗透调节的能量较少。     

红罗非鱼Na~+-K~+-ATPase α基因的克隆及其在不同盐度条件下mRNA表达差异

为获知红罗非鱼(Oreochromis sp.)Na+-K+-ATPaseα基因的全长分子结构及其在不同盐度条件下的表达情况,采用同源克隆及cDNA末端快速扩增(RACE-PCR)方法,首次在红罗非鱼鳃组织中克隆到了全长为3 379 bp的Na+-K+-ATPaseα基因全长cDNA序列,该序列包含3 072 bp的开放阅读框(ORF),143 bp的5'末端非编码区(UTR)和164 bp的3'末端非编码区(UTR),编码1023个氨基酸,预测分子量为112.5 kD,理论等电点为5.26。BLAST分析显示红罗非鱼Na+-K+-ATPaseα基因编码的氨基酸序列与其它已知物种相应基因编码的氨基酸序列的同源性达到97%-99%;系统进化分析显示,红罗非鱼Na+-K+-ATPaseα亚基与萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)和莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)亲缘关系较近。应用Real-time PCR技术,以β-actin基因为内参,对不同盐度(0、15、25、32 g/L)条件下鳃组织中Na+-K+-ATPaseα基因的表达情况进行了比较分析,结果表明,当盐度为25 g/L时,Na+-K+-ATPaseα基因的表达量达到峰值,而盐度升至32 g/L时,其表达量呈下降趋势;各盐度处理组中,养殖12 h后Na+-K+-ATPaseα基因的mRNA表达量显著上升(P0.05)并达到最高;随着养殖时间的延长,24 h后该基因mRNA表达量开始降低,但仍然显著高于对照组的表达量值(P0.05)。     

盐度对大菱鲆幼鱼鳃Na -K -ATPase活力、血清离子浓度 和激素水平的影响

采用饲养试验方法,研究了平均体质量为(7.16±0.07)g的大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼分别在盐度12、18、24、30和36下饲养60 d后,其鳃Na+-K+-ATPase活力、血清离子浓度、生长激素(GH)、皮质醇激素(COR)、特定生长率(SGR)和饲料效率(FCE)的变化。结果表明:幼鱼鳃Na+-K+-ATPase活力、血清Na+浓度均随盐度的升高而上升,分别在3.48~8.30 U/mg和169.99~180.00 mmol/L之间,其中12盐度组最低,36盐度组最高。幼鱼血清中K+和Cl-浓度分别在2.20~3.47 mmol/L和136.67~142.00 mmol/L之间,各盐度组之间差异不显著。幼鱼血清中GH和COR浓度分别在0.41~1.66 ng/ml和35.33~76.41 ng/ml之间;其中GH在36盐度组最高,12盐度组最低,而COR在12盐度组最高,36盐度组最低。幼鱼SGR和FCE分别在(1.45~2.00)%/d和1.12%~1.38%之间,与盐度的相关性不显著,两者均为12盐度组最低。由此可见,盐度变化显著影响大菱鲆幼鱼鳃Na+-K+-ATPase活力、血清Na+浓度和激素含量。本研究对大菱鲆养殖生理生态条件分析具有重要参考意义,研究结果可为大菱鲆养殖的盐度选择提供理论依据。     

盐度对日本囊对虾仔虾生长发育和Na+-K+-ATPase活力的影响

研究了盐度对日本囊对虾仔虾(Marsupenaeus Japonicus)的生长发育和Na -K -ATPase活力的影响。结果表明,盐度对日本囊对虾仔虾存活率、增重率和Na -K -ATPase活力的影响显著(P<0.05)。随着向低盐度变化的增加,仔虾的存活率和增重率明显下降,而向高盐度变化无显著差异;在盐度变化48h内,随着盐度变化的增加仔虾Na -K -ATPase活力变化增大,各处理组仔虾Na -K -ATPase活力随着取样时间的增加呈峰值变化,至24h时低盐度处理组酶活力达到最大值,而高盐度处理组达到最小值:至48h~72h时,不同盐度下仔虾Na -K -ATPase活力趋于稳定,而且盐度越低酶活力越大。由此表明日本囊对虾仔虾在低盐度地下卤水中的适宜盐度为20‰—24‰。     

纳米TiO2、ZnO、SiO2对剑尾鱼肝组织中Na+/K+-ATP酶活性的影响

采用浸浴法研究了氧化纳米颗粒TiO2、ZnO、SiO2对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)肝中Na+/K+-ATP酶活性的影响。结果表明:纳米TiO2处理组,高浓度(5 mg/L、10 mg/L)组表现为抑制作用,其中5 mg/L处理组Na+/K+-ATP酶的活性与对照组无显著差异(p>0.05),10 mg/L处理组中Na+/K+-ATP酶的活性显著低于对照组中酶的活性(p<0.05)。低浓度组(0.1 mg/L、1 mg/L)则表现为先诱导后抑制,除0.1 mg/L组在暴露1 d后与对照组有显著差异外(p<0.05),其余组与对照组均无显著差异(p>0.05)。纳米ZnO、SiO2处理组(0.1 mg/L、10 mg/L)在暴露1 d后,肝中Na+/K+-ATP酶的活性均比对照组高,随着暴露时间增加至20 d,Na+/K+-ATP酶活性下降,且显著低于对照组(p<0.05)。3种纳米颗粒的浓度为0.1 mg/L时,对暴露后1 d剑尾鱼肝中的Na+/K+-ATP酶活性的影响均为诱导作用,诱导大小顺序为ZnO>TiO2>SiO2;随着暴露时间的增加至10 d,纳米TiO2、ZnO、SiO2处理组对Na+/K+-ATP酶活性均表现出抑制作用。     

大蒜素对大鼠骨骼肌抗氧化能力和ATP酶活性的影响

目的:探讨大蒜素对大鼠骨骼肌抗氧化能力和ATP酶活性的影响。方法:30只SD大鼠随机分为安静组、训练组、大蒜素训练组(n=10),6周训练和补充大蒜素后,测定大鼠骨骼肌超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Ca2+-ATPase、Na+-K+-ATPase和血清Ca2+的含量。结果:大蒜素训练组与训练组相比,运动至力竭的时间明显延长;骨骼肌抗氧化能力明显升高,Na+-K+-ATPase,Ca2+-ATPase及血清Ca2+极为显著升高。结论:大蒜素能增强大鼠骨骼肌抗氧化能力,延缓疲劳出现。     

温度、pH和盐度对克氏原螯虾鳃 Na+-K+-ATPase活性的影响

采用钼蓝法测定克氏原螯虾(Procambarus clarkii)鳃Na~ -K~ -ATPase活性,探讨温度、pH、盐度3个环境因子在环境驯化和突变状态下对Na -K -ATPase活性的影响。实验结果表明,Na~ -K~ -ATPase的活性与环境因子密切相关。酶活性在温度、盐度驯化实验中都表现为正相关关系,不同pH驯化中则表现为中性pH活性最高。在突变状况下表现出明显的应激性,应激响应在2～8h之间,之后逐渐缓和,最终结果与驯化结果相同。     

鲻鱼鳃组织14-3-3a、NKCCla、Apo-14和Na~+-K~+-ATPaseβ基因表达对盐度变化的响应

探讨了鲻鱼(Mugil cephalus)鳃组织14-3-3a、NKCCla、Apo-14和Na+-K+-ATPaseβ基因对盐度变化的响应表达特性。结果表明:不同盐度处理组对14-3-3a、NKCC1a、Apo-14和Na+-K+-ATPaseβ等4种基因mRNA的表达量与对照组(盐度20)间存在一定的差异性,且各类基因与盐度适应相关性的差异性也较为显著;其中Na+-K+-ATPaseβ和NKCC1a在低盐环境下被显著诱导,表达量上升明显(P0.01),而14-3-3a与Apo-14在低盐环境下表达量均有明显的下调(P0.05);不同盐度处理组与对照组表达量的差异、各基因表达量与盐度的回归关系以及4种基因生物整合标志物响应值的不同,表明Na+-K+-ATPaseβ和NKCC1a相对于14-3-3a和Apo-14更能赋予生物在受到低盐度应激刺激后,产生渗透调节机制,提高生物抵抗环境的胁迫能力;可考虑Na+-K+-ATPaseβ和NKCC1a适宜作为鱼类鳃组织在低盐环境胁迫下调控渗透基因的潜在分子生物标志物。     

栀子提取物ZG对副流感病毒1型感染后宿主细胞膜的影响

为了探讨栀子提取物ZG抗病毒作用的生物学机制,观察了栀子提取物ZG对副流感病毒1型(PIV-1)感染后宿主细胞膜电位、膜Na -K -ATP酶活性和膜流动性的影响。以氯化乙酰胆碱为阳性对照,采用荧光探针Di-BAC4(3)标记Hep-2细胞膜电位,借助流式细胞仪检测膜电位;定磷法,分光光度计检测Na -K -ATP酶活性;荧光探针NBD-C6-HPC标记细胞膜磷脂,以荧光漂白恢复法和激光扫描共聚焦显微镜检测膜流动性。结果显示:PIV-1感染后宿主细胞膜电位下降,处于超极化状态;膜Na -K -ATP酶活性显著增加,膜流动性显著降低。栀子提取物ZG作用后,对宿主细胞膜的超极化状态没有明显影响;对膜Na -K -ATP酶活性没有明显影响;而对膜流动性则有明显的恢复作用。阳性对照药乙酰胆碱能明显改善病毒感染后膜电位的超极化状态。PIV-1感染后膜电位、Na -K -ATP酶活性和膜流动性等细胞膜能态和功能的改变,可能为病毒感染的生物学机制之一;栀子提取物ZG可能是通过改善细胞膜流动性,维持细胞膜的正常功能来发挥抗病毒感染的作用,而与膜电位和膜Na -K -ATP酶活性等能态来源的环节可能无关。     

葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠肾脏Na~+-K~+-ATP酶活性的影响

目的探讨葡萄籽原花青素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用以及对肾皮质血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)和Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法清洁级雄性SD大鼠,链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,随机将大鼠分为正常对照组、糖尿病组和葡萄籽原花青素治疗组,每组10只,葡萄籽原花青素治疗组使用葡萄籽原花青素500mg/(kg·d)灌胃,余给予等量生理盐水。4周后,检测血糖、血尿素氮、血肌酐和肾皮质Na+-K+-ATP酶活性,放免法检测24h尿微量蛋白、血浆和肾组织ANGⅡ。结果与正常组比较,糖尿病大鼠血糖、蛋白尿、血肌酐、血尿素氮升高,血浆和肾组织ANGⅡ升高,肾皮质Na+-K+-ATP酶活性降低;与DM组相比,葡萄籽原花青素治疗组微量蛋白尿、血肌酐、血尿素氮减轻,血浆和肾组织ANGⅡ降低,肾皮质Na+-K+-ATP酶活性升高。结论葡萄籽原花青素可用于治疗早期糖尿病肾病,可能通过改变Na+-K+-ATP酶活性保护糖尿病大鼠的肾脏。     

周期性张应力对面颌肌细胞Na+/K+-ATPase功能活性影响

目的:本研究在成功构建面颌肌细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,探讨机械张应力对细胞内Na+水平和面颌肌细胞Na+/K+-ATPase功能活性的影响.方法:本实验采用Blua法,对SD大鼠乳鼠面颌肌细胞进行体外原代培养、鉴定并绘制生长曲线;取第3代细胞接种于细胞加力板上,采用Forcel四点弯曲加力装置,对细胞分别施加1h、2h、4h、8h、12h、16h、24 h和48 h的张应力刺激,后测定细胞内Na+水平变化和Na+/K+-ATPase功能活性改变.结果:(1)Na+水平变化:与对照(不加力)组相比,加力1h细胞内Na+显著增加(P＜0.05),并随加力时间延长逐渐降低,加力至12h时降到正常水平,再延长加力时间Na+无明显变化.(2) Na+/K+-ATPase功能活性变化:分别施加不同时间的周期性张应力后,Na泵的活性在加力8小时后才开始增加(0.5725mmolPi/mgPr.hr),随加力时间延长进一步增加,48小时后达到最大值(0.8963mmolPi/mgPr.h).结论:周期性张应力刺激会引起细胞内Na+的改变,并可以增加骨骼肌细胞Na+/K+-ATPase的活性.     

重金属Cd2+和Cu2+对一种曲壳藻生长情况及其抗氧化酶活性的影响

以淡水底栖硅藻曲壳藻(Achnanthes kryophila Petersen)为毒理试验材料, 研究了重金属镉、铜对曲壳藻生长及抗氧化酶活性的影响。结果表明: 镉和铜胁迫96 h EC50 分别为: 0.984 mgL–1 和1.589 mgL–1。藻生长量总体随重金属浓度的增加而降低, 然而镉(0-0.1 mgL–1)、铜(0-0.02 mgL–1)暴露组表现出明显的毒性兴奋效应。曲壳藻可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性随镉和铜胁迫浓度增加先升高后下降, 丙二醛(MDA)含量随着胁迫浓度增高逐渐增大, 镉和铜变化趋势大体相同, 但是变化幅度不同。高浓度重金属胁迫诱导氧自由基的大量产生,破坏了曲壳藻抗氧化酶系统的动态平衡, 加剧了膜脂过氧化作用, 影响藻细胞的生长并最终导致细胞死亡。     

山药多糖对老年性痴呆小鼠抗氧化能力的影响

目的:探讨山药多糖对老年性痴呆小鼠抗氧化能力的影响。方法:采用三氯化铝复制痴呆小鼠模型,将50只昆明种小鼠随机分5组(n=10):对照组、模型组和山药多糖低、中、高剂量组,山药多糖剂量分别为100 mg/kg·d、300 mg/kg·d、500 mg/kg·d。治疗组用不同剂量山药多糖分别灌胃90 d。测定小鼠脑系数、脑组织丙二醛(MDA)含量、Na+-K+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性,以及血清氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果:山药多糖能显著提高痴呆模型小鼠脑系数、Na+-K+-ATP酶和Mg2+-ATP酶活性、以及SOD和CAT活力;显著降低MDA含量。结论:增强脑组织ATP酶活性和提高机体抗氧化能力可能是山药多糖防治老年性痴呆的作用机制之一。     

盐度变化对克氏原螯虾渗透调节影响机制的初步研究

本文研究了克氏原螯虾在盐度变化下血淋巴渗透压、鳃丝Na+-K+-ATPase活力和生物胺的变化过程和特征。结果显示：盐度变化（0－20‰）对克氏原螯虾血淋巴渗透压、鳃丝Na+-K+-ATPase活力和生物胺含量影响显著(p<0.05),而对照组无明显变化。在实验时间内各处理组血淋巴渗透压随盐度变化增大而升高,1－2d后趋于稳定,鳃丝Na+-K+-ATPase活力逐渐降低,6d后保持稳定,且渗透压正相关性,酶活力与盐度呈负相关性;各处理组在实验时间内血淋巴和鳃丝多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺含量均呈峰值变化,血淋巴中多巴胺、5-羟色胺含量分别在1d和3d时达到最小值和最大值,且变化过程分别与盐度变化值呈负和正相关性,并分别在6d和9d后趋于稳定,而各处理组的NE含量（除盐度为4的处理组）在0.5d内迅速升高,0.5－3d内略有波动,然后呈下降趋势,至15d时保持稳定;各处理组鳃丝多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量均于2d时达到最大值,且变化过程均与盐度变化值呈正相关性,均在9d后趋于稳定;稳定后各处理组血淋巴和鳃丝生物胺含量均与对照组无显著性差异。这些结果表明,在外界盐度变化下生物胺作为一种神经内分泌因子,在甲壳动物的渗透压调节过程中发挥重要作用,可引发甲壳动物产生的渗透调节过程,如激活鳃丝已有的Na+-K+-ATPase活力、调节血淋巴渗透压效应物含量以适应外界环境的变化。     

脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKⅡ通路CaM、CaMKⅡ蛋白表达的变化

目的观察脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKⅡ通路关键分子[Ca2+]i以及CaM、CaMKⅡ、p-Ca MKⅡ蛋白表达水平的变化。方法受试动物随机分为4组,即空白对照组,脾气虚模型7 d、14 d、21d组,每组12只。除空白对照组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、游泳力竭法及饥饱失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型,在观测各组大鼠一般生存状态和肝组织ATP酶活性的基础上,采用激光共聚焦技术检测肝组织细胞内[Ca2+]i浓度,蛋白免疫印迹技术检测肝组织CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ的表达变化。结果与空白组比较,脾气虚大鼠随着造模时间的延长,一般生存状况渐差,肝组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性均降低(P0.05,P0.01);肝组织[Ca2+]i浓度和CaM、CaMKⅡ、p-Ca MK Ⅱ蛋白表达量显著降低(P0.01);且脾气虚模型7 d、14 d、21 d组之间比较,以脾气虚21 d组变化更为显著。结论脾气虚大鼠肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性和[Ca2+]i浓度降低,并且CaMKⅡ信号通路关键分子CaM、CaMKⅡ和p-CaMKⅡ蛋白表现为低表达。     

一氧化氮调节盐胁迫下小麦幼苗根部质膜H+-ATPase和焦磷酸酶活性提高耐盐性

采用外源一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)研究了NO对盐胁迫下小麦(Triticum aestivum L.)幼苗耐盐性的影响.结果表明,0.1 mmol/L SNP处理显著缓解了1 50 mmol/L NaCl胁迫对小麦幼苗生长的抑制效应,包括水分丧失以及叶绿素降解,从而提高了小麦幼苗的耐盐性.进一步结合1 mg/mL血红蛋白处理则显著逆转了SNP诱导的上述效应;利用亚硝酸钠和铁氰化钾作为对照也证实了NO对小麦幼苗耐盐性的专一性调节作用,并可能与NO对小麦幼苗根部质膜H -ATPase和焦磷酸酶活性诱导有关.此外,尽管NO显著提高了盐胁迫下小麦幼苗根部细胞质膜H -ATPase和焦磷酸酶的ATP水解活性,但是对跨膜H 转运则没有明显影响.应用外源CaSO4和EGTA处理也证实,Ca2 可能在NO诱导的质膜H -ATPase和焦磷酸酶活性的提高过程中起信号作用.另外,分析盐胁迫下小麦幼苗根部Na 和K 含量的变化也发现,NO对Na 含量没有明显影响,但是却显著提高了K 水平和K /Na 比,这可能也是NO提高小麦幼苗耐盐性的原因之一.     

双酚A暴露对东亚三角涡虫急性毒性及神经酶的影响

旨在探讨双酚A (BPA)对东亚三角涡虫的急性毒性及神经系统相关酶活性的影响。采用不同浓度的BPA处理涡虫24 h、48 h、72 h,求出半致死浓度,以此为基础,采用不同浓度的BPA处理涡虫24 h、72 h、144 h,测定AchE、ChAT及Na+~K+^-ATP酶活性。BPA对三角涡虫的24 h、48 h、72 h,LC50分别为12.18 mg/L、8.49 mg/L、6.43 mg/L。ChE、ChAT、Na+~K+^-ATP酶活性对BPA反应敏感,具有较好的规律性。24 h处理组,AChE酶活力随BPA浓度的升高而升高,72 h和144 h处理组则呈现先上升后下降的趋势,除0.643 mgBPA/L以外,其它处理组均表现出了时间-效应关系;在BPA胁迫下,ChAT酶活力均呈现降低趋势,在BPA浓度为0.643 mg/L、1.286 mg/L时,表现出了时间-效应关系;24 h、72 h处理组Na+~K+^-ATP酶活力随BPA浓度升高呈现先上升后下降的趋势,144 h处理组则呈现下降趋势,Na+~K+^-ATP酶活力随BPA胁迫时间的延长呈现先升高后下降的趋势。BPA对涡虫具有较强的生态毒性,AchE、ChAT、Na+~K+^-ATP酶活性可与其他敏感指标一起作为水体BPA污染的早期监测指标。     

Cd2+与CTAB复合污染对枫香幼苗生长与生理生化特征的影响

采用盆栽试验方法,研究了表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)与重金属Cd²⁺单一及复合污染对枫香幼苗生长和生理生化指标的影响。结果表明,在单一CTAB污染条件下,较低浓度的CTAB(0.1-0.5 g/kg) 能促进枫香幼苗的生长,较高浓度的CTAB(0.5-2g/kg) 对枫香幼苗有毒害作用。在单一浓度Cd²⁺处理条件下,土壤中Cd²⁺浓度为100mg/kg时,枫香幼苗的生长受到严重的抑制。在同一浓度Cd²⁺污染土壤中,随着浇灌水中CTAB浓度的增加,枫香幼苗的株高、干重、叶片叶绿素含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性都呈先升后降的趋势。与生长盛期比较,枫香幼苗生长末期的叶绿素含量大幅下降;由于幼苗长期处于复合污染条件下,生长末期叶片SOD、POD活性均低于生长盛期的酶活性;且随着时间推移,枫香幼苗叶片中丙二醛(MDA)积累量有所升高。     

大鼠脑室内注射ANGⅡ和ANGⅡ抗体对尿钠排出和肾皮质Na~+·K~+-ATPase的影响

在麻醉大鼠的侧脑室注射16pg血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ),15min内出现尿钠增多的反应并持续90min,平均动脉血压保持稳定。肾皮质Na~+·K~+-ATPase活性(1.51±0.26μmolPi/mg Pro·h)显著低于侧脑室注射人工脑脊液的对照值(2.66±0.28μmol Pi/mg Pro·h,P<0.01),而侧脑室注射ANGⅡ抗体后5min内则出现尿钠减少的反应并持续135min。肾皮质Na~+·K~+-ATPase活性(3.61±0.34μmol Pi/mg Pro·h)显著高于对照值(P<0.05)。股静脉和脊髓蛛网膜下腔分别注射16pg ANGⅡ,均未出现尿钠增多的反应。结果表明,脑内的内源性ANGⅡ具有引起尿钠增多的作用;并提示这种作用可能与肾脏Na~+·K~+-ATPase活性的抑制有关。     

豚鼠精子质膜Ca2+ -ATPase活性与精子顶体反应关系的研究

用生化测定法首次证实豚鼠精子质膜Ca²⁺-ATPase活性在精子获能和顶体反应过程中显著下降.Ca²⁺-ATPase抑制剂利尿酸(ethacrynic acid)抑制质膜Ca²⁺-ATPase活性,但钙调素(50μg/mL)的拮抗剂三氟拉嗪(TFP,200～500μmol/L)对该酶活性没有影响,说明钙调素不直接参与精子依赖于ATP的Ca²⁺的主动泵出.但钙调素与精子的Ca²⁺内流有关,钙调素拮抗剂TFP显著促进精子顶体反应和精子对Ca²⁺的摄入.Ca²⁺-ATPase抑制剂栎皮酮(quercetin)、原钒酸钠(sodiumorthovandate)、利尿磺胺(furosemide)和利尿酸均显著促进豚鼠精子的顶体反应,但却抑制精子对Ca²⁺的摄入,这无法用它们对质膜Ca²⁺-ATPase活性的抑制作用解释.推测这可能是由于Ca²⁺-ATPase抑制剂在抑制质膜Ca²⁺-ATPase活性的同时也抑制了顶体外膜或线粒体外膜上的该酶的活性,导致Ca²⁺在细胞质内的积累,进而通过负反馈机制抑制Ca²⁺进一步内流所致.另外,Ca²⁺-ATPase抑制剂对糖酵解的抑制作用也可能是Ca²⁺在细胞质中积累和抑制精子Ca²⁺摄入的原因.